肇庆市某医院手足口病患儿的免疫功能分析

吴小文，申学基，区惠梅，蔡健梅

（广东省肇庆市第一人民医院 检验科，广东 肇庆526021）

肇庆市某医院手足口病患儿的免疫功能分析

吴小文，申学基，区惠梅，蔡健梅

（广东省肇庆市第一人民医院 检验科，广东 肇庆526021）

目的分析手足口病患儿的免疫功能。方法选取328例手足口病患儿，检测其血清IgG、IgM、IgA、C3、C4水平，以58例同期健康体检儿童作为对照组进行比较。结果普通组与对照组的IgG、IgM、IgA、C4水平比较差异均有统计学意义 （P＜0．05）；重症组与对照组的IgG、IgA水平比较差异均有统计学意义 （P＜0．05）；普通组与重症组的IgM水平比较差异有统计学意义 （P＜0．05）。四个不同年龄组儿童的IgG、IgA水平比较差异均有统计学意义 （P＜0．05）；IgM水平在＜1岁组最低，与其他组比较差异有统计学意义 （P＜0．05）。结论感染手足口病毒后，患儿的免疫功能会发生改变，IgG、IgM、IgA水平变化明显，而C3、C4水平则相对稳定，按年龄分组讨论手足口病更有实际指导意义。

手足口病；儿童；免疫功能

手足口病 （hand－foot－mouth disease， HFMD） 是儿科常见的传染病之一，发病主要集中在5岁以下儿童，临床上以手、足、臀部、口腔等部位出现皮疹或疱疹为主要特征。很多病毒都可引起HFMD，如柯萨奇病毒、埃可病毒、新肠道病毒等，其中以柯萨奇病毒 A组 16型 （CA16）及肠道病毒 71型（EV71）最常见。大多数患儿的症状较轻，在1周内便可痊愈，预后情况良好，而有少数患儿可能会出现心肌炎、肺水肿、无菌性脑炎、膜脑炎等危重症状。HFMD的发病机制尚未完全明确，有研究［1］推测可能与病毒直接侵犯组织细胞 （如脑细胞）或病毒脓毒症所致的异常免疫反应有关。本研究从临床症状严重程度、CA16和EV71感染情况、年龄分布等方面探讨HFMD与患儿免疫功能的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1．1 研究对象 选取我院 2014年 1月至 2017年 5月诊断为HFMD的328例患儿作为研究对象，其中普通组 （254例）男172例、女82例，年龄1个月 ~12岁；重症组 （74例）男49例、女25例，年龄2个月~8岁。另外选取58例同期健康体检儿童作为对照组，男38例，女20例；年龄2个月 ~12岁。三组儿童的年龄、性别、体重等方面比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1．2 诊断标准 按照2010年国家卫生部颁布的 《手足口病诊疗指南》［2］的诊断标准纳入研究对象。

1．3 排除标准 疱疹性咽峡炎、过敏性荨麻疹、水痘、口腔溃疡、汗疱疹等易与HFMD混淆的疾病；检测前一个月内使用过激素、血液制品、免疫抑制剂、免疫增强剂等会导致机体免疫功能发生变化的药物；因患结核、肿瘤等进行过放疗或化疗。

1．4 仪器与试剂 采用美国ABI 7500实时荧光定量PCR仪检测CA16和EV71，试剂由湖南圣湘生物科技有限公司提供；采用美国雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪以及厂家配套专用试剂检测血清免疫五项 （IgG、IgM、IgA、C3、C4）水平。

1．5 方法

1．5 ．1 标本采集 在儿童本人 （或家长）知情同意的情况下，用真空干燥管采集空腹静脉血2 mL检测免疫五项；用专用采样棉签采集患儿发病3天内咽后壁和两侧扁桃体部位的咽拭子检测CA16和EV71。

1．5 ．2 免疫五项检测 采集静脉血样后，3 500 r／min离心 10 min分离出血清，然后用全自动化学发光免疫分析仪检测免疫五项水平。实验操作严格按说明书要求进行，检测方法为免疫透射比浊法。

1．5 ．3 CA16和EV71检测 采集咽拭子样本后，严格按说明书要求用磁珠法提取核酸，然后吸取5 μL提取好的核酸加到45 μL扩增反应试剂中组成一个独立反应体系，并用PCR扩增仪按设定程序进行扩增。

1．6 统计学方法 采用SPSS 17．0统计学软件对数据进行分析处理。计量资料以均数 ±标准差 （±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验。P＜0．05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2．1 普通组和重症组CA16和EV71感染情况分布 普通组与重症组的EV71感染情况分布比较差异有统计学意义（P＜0．05）。 见表 1。

表1 普通组和重症组CA16和EV71感染情况分布 ［n（%）］

2．2 普通组、重症组和对照组的免疫五项水平比较 IgG、IgM、IgA水平在普通组、重症组和对照组均呈递增趋势；C3、C4水平在普通组和重症组均十分接近，且略高于对照组。普通组与对照组的IgG、IgM、IgA、C4水平比较差异均有统计学意义（P＜0．05）；重症组与对照组的IgG、IgA水平比较差异均有统计学意义 （P＜0．05）；普通组与重症组的IgM水平比较差异有统计学意义 （P ＜0．05）。 见表 2。

表2 普通组、重症组和对照组的免疫五项水平比较 （±s，g／L）

表2 普通组、重症组和对照组的免疫五项水平比较 （±s，g／L）

注： 与对照组比较， ▲P ＜0．05； 与重症组比较， ◆P ＜0．05。

组别 例数 IgG IgM IgA C3 C4重症组 74 8．19±3．36▲ 1．54±0．74 0．62±0．47▲ 1．13±0．30 0．31±0．14普通组 254 7．51±2．48▲ 1．26±0．57▲◆ 0．62±0．49▲ 1．13±0．23 0．31±0．12▲对照组 58 9．48±2．43 1．58±0．64 0．97±0．59 1．10±0．29 0．26±0．12

2．3 CA16和EV71不同感染情况组的免疫五项水平比较 IgG水平：单CA16阳性组、单EV71阳性组、双阳性组、双阴性组与对照组比较，差异均有统计学意义 （P＜0．05）。IgM水平：双阴性组与对照组、单EV71阳性组、双阳性组比较，双阳性组与单CA16阳性组比较，单CA16阳性组与对照组相比，差异均有统计学意义 （P＜0．05）。IgA水平：双阴性组与其余组别比较，单CA16阳性组、单EV71阳性组与对照组比较，差异均有统计学意义 （P＜0．05）。C4水平：单 CA16阳性组、单EV71阳性组、双阳性组与对照组比较，双阴性组与单CA16阳性组比较，差异均有统计学意义 （P＜0．05）。见表3。

表3 CA16和EV71不同感染情况组和对照组的免疫五项水平比较 （±s，g／L）

表3 CA16和EV71不同感染情况组和对照组的免疫五项水平比较 （±s，g／L）

注： 与对照组比较， ▲P ＜0．05； 与单 CA16阳性组比较， ◆P ＜0．05； 与单 EV71阳性组比较， △P ＜0．05； 与双阳性组比较， ◇P ＜0．05。

组别 例数 IgG IgM IgA C3 C4双阳性组 25 7．56±2．01▲ 1．66±0．48▲ 0．80±0．53 1．14±0．22 0．32±0．10▲单 CA16 阳性组 56 7．61±2．37▲ 1．34±0．55▲ 0．73±0．52▲ 1．16±0．24 0．34±0．13▲单 EV71 阳性组 64 8．24±3．05▲ 1．52±0．64 0．72±0．52▲ 1．15±0．21 0．32±0．13▲双阴性组 183 7．49±2．76▲ 1．20±0．62▲△□ 0．52±0．44▲◆△◇ 1．11±0．27 0．29±0．12◆对照组 58 9．48±2．43 1．58±0．64 0．97±0．59 1．10±0．29 0．26±0．12

表4 不同年龄组患儿的免疫五项水平比较 （±s，g／L）

表4 不同年龄组患儿的免疫五项水平比较 （±s，g／L）

注： 与对照组比较， ▲P ＜0．05； 与＜1 岁组比较， ◆P ＜0．05； 与 1 岁组比较， △P ＜0．05； 与 2～3 岁组比较， ◇P ＜0．05。

组别 例数 IgG IgM IgA C3 C4＜1 岁 74 5．89±1．88▲ 0．92±0．47▲ 0．25±0．13▲ 1．05±0．30 0．29±0．11 1 岁 113 7．46±2．43▲◆ 1．39±0．61◆ 0．43±0．22▲◆ 1．10±0．20 0．29±0．13 2～3 岁 105 8．19±2．02▲◆△ 1．48±0．63◆ 0．80±0．42◆△ 1．19±0．25▲◆△ 0．32±0．13▲4～12 岁 36 10．39±3．89◆△◇ 1．47±0．56◆ 1．42±0．60▲◆△◇ 1．20±0．19◆△ 0．33±0．12▲对照组 58 9．48±2．43 1．58±0．64 0．97±0．59 1．10±0．29 0．26±0．12

2．4 不同年龄组患儿的免疫五项水平比较 IgG、IgM、IgA、C3、C4水平均随患儿年龄增加呈递增趋势，IgG、IgM、IgA水平随年龄变化的幅度较C3、C4水平变化幅度明显。四个年龄组患儿的IgG、IgA水平比较差异均有统计学意义 （P＜0．05）；IgM水平在＜1岁组最低，与其他组比较差异有统计学意义 （P＜0．05）；患儿2岁前后的C3水平比较差异具有统计学意义 （P＜0．05）；四个年龄组患儿的C4水平比较差异无统计学意义 （P＞0．05）。 见表 4。

3 讨论

临床医生初次拟诊HFMD往往以手、足、臀部、口腔等部位是否有疱疹以及精神状态等作为依据，但有些患儿的临床症状较轻，表现不典型或呈隐性感染状态，因此部分轻症病例往往会被忽略。引起HFMD的病毒有多种，但一般实验室通常只检测最常见的CA16和EV71两种，因此实验室的阳性检出率会低于实际情况。本研究结果显示，普通组CA16阳性率和EV71阳性率相近，而重症组CA16阳性率则明显低于EV71阳性率，表明重症HFMD主要与EV71感染有关，这与其他相关研究［3－7］结果一致。

以往人们多数从血常规、心肌酶谱、心电图、脑电图、脑脊液等方面变化来研究HFMD患儿身体功能的改变。现代医学分析HFMD还可以通过检测免疫活性物质来了解机体的功能状态，常见的免疫活性物质包括抗体、补体、干扰素、白细胞介素等。本研究主要检测IgG、IgA、IgM、C3、C4免疫活性物质，并探讨其在HFMD的临床意义。

IgG主要针对蛋白质多肽类抗原产生免疫应答，是机体抗感染的主力部队，在抗细菌、抗病毒和抗毒素中发挥主要作用，同时也是机体再次免疫应答的主要抗体，是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白。表2中，普通组和重症组的IgG水平均低于对照组，症状越重IgG水平越高。表3中，患儿CA16和EV71阳性构成比分布情况与IgG水平关系不明显，但与对照组比较差异有统计学意义 （P<0.05）。表4中，患儿的IgG水平随年龄增加而升高。这是由于婴儿出生后，从母体获得的IgG会逐渐减少，到6个月时基本消失；而小儿自身合成的IgG则随个体免疫系统的成熟逐渐增多，直到学龄期机体合成IgG的能力才接近大人水平。

IgM是初次体液免疫应答中最早出现的抗体，是机体抗感染的先头部队。通过结合补体，IgM有溶解细菌、血细胞的作用，并能中和病毒，其效能比IgG高100倍以上，但因其在血中含量低，半衰期短，总体效应不如IgG。表2中，普通组的IgM水平与重症组、对照组比较差异均有统计学意义 （P<0.05），说明临床症状较轻时，体内原有的IgM会因迅速反应以抵抗感染而消耗掉一部分；随着病程的进展，机体免疫系统新产生的IgM水平会逐渐增加以维持血液中免疫球蛋白的稳定状态，因此重症组的IgM水平会接近对照组。表3中，CA16和EV71阳性构成比分布情况与IgM水平关系不明显。表4中，＜1岁组的IgM水平最低，与其他各组比较差异均有统计学意义（P<0.05），表明＜1岁的患儿自身免疫系统不够成熟，抵抗力较差，医护人员需特别注意该类患儿的病程变化。

IgA分为血清型和分泌型，其中血清型主要以单体形式存在，而分泌型则由J链连接的二聚体和分泌成分组成。IgA主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中，并在机体局部黏膜发挥作用，是机体抗感染的边防部队。表2和表3中，按临床症状严重程度和病毒感染情况分组，患儿的IgA水平无明显差别，但与对照组比较差异有统计学意义 （P<0.05）。表4中，不同年龄组的IgA水平比较差异明显，且随年龄增加呈递增趋势，说明按年龄分组讨论IgA水平更有实际意义。

补体是一组存在于人和脊椎动物血清中、具有酶样活性且不耐热的糖蛋白，其组成部分复杂多样，以连续反应的级联方式发挥生物效应。补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应及免疫调节，也可介导免疫病理的损伤性反应，是体内具有重要生物学意义的放大效应系统。目前已发现的补体成分有30多种，在血清中以C3和C4水平最高，两者均由巨噬细胞和肝脏合成，是补体系统的活化单位，主要负责免疫活化，随时准备发动免疫攻击。C3主要在补体经典激活途径与旁路激活途径中发挥重要作用，C4主要参与补体的经典激活途径。本研究结果显示，即使用了三种不同的分组方式，患儿组间的C3和C4水平仍然无明显差异，这与魏惠亚［8］的研究结果相似。而各组的C3水平与对照组比较一般无统计学意义，C4水平则部分有统计学意义。原因可能是：①正常情况下，血清补体的存在与抗原性异物的刺激无关，所以在HFMD的发展过程中同样不例外。②在正常人血清中，补体含量相对稳定，并不会随年龄变化而出现较大波动，所以HFMD患儿的C3、C4水平也相对稳定。③代谢率较快是补体水平相对稳定的一个重要原因，有文献［9］报道，血浆中的补体每天更新约50%，只要不是急性严重感染、大面积烧伤、失血过多或高消耗性疾病等，补体系统均会自动调整到最佳状态以维持机体的免疫稳定。

综上所述，患儿年龄越小，自身免疫系统越不完善，临床症状就越严重。若要考察HFMD患儿的免疫状态，建议检测IgG、IgM、IgA三项指标，并且按年龄分组讨论更有实际指导意义。由于重症HFMD与EV71感染关系较明显，因此医护人员需特别警惕EV71阳性患儿的病情变化，给予必要的干预措施，避免发生不可逆转的病理损伤甚至死亡。

[1]王兰兰,吴健民.临床免疫学与检验 [M].第4版.北京:人民卫生出版社,2008:30.

[2]中华人民共和国卫生部.手足口病诊疗指南 (2010年版) (一)[J].浙江中西医结合杂志,2012,22(7):586-587.

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[8]魏惠亚.678例手足口病患儿体液免疫检测分析 [J].浙江中西医结合杂志,2012,22(12):976-977.

[9]吕世静.临床免疫学检验 [M].北京:中国医药科技出版社,2004:70.

Analysis on the Immune Function of Children with Hand-Foot-Mouth Disease in A Hospital in Zhaoqing City

WU Xiaowen,SHEN Xueji,OU Huimei,CAI Jianmei
(Clinical Laboratory,Zhaoqing First People's Hospital,Zhaoqing 526021,China)

ObjectiveTo analyze the immune function of children with hand-foot-mouth disease(HFMD).Methods328 cases of children with HFMD were selected,and their serum IgG,IgM,IgA,C3 and C4 levels were detected.The results were compared with 58 cases of healthy children selected as the control group at the same period.ResultsStatistical difference was found in the IgG,IgM,IgA and C4 levels between common group and control group(P＜0.05).Statistical difference was found in the IgG and IgA levels between severe group and control group(P ＜0.05).Statistical difference was found in the IgM level between common group and severe group(P ＜0.05).Statistical difference was found in the IgG and IgA levels among four different age groups(P ＜0.05).IgM level was lowest in＜1 year group,had statistical difference with those of other groups(P＜0.05).ConclusionsThe immune function changes after children are infected with HFMD viruses.The IgG,IgM and IgA levels significantly change,but C3 and C4 levels are relatively stable.It is more practical to discuss HFMD in different age groups.

Hand-foot-mouth disease;Children;Immune function

R512.5

A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.11.1632

2017－06－22

2017-08-10

吴小文 （1983－），男，广东罗定人，本科学历，主管技师，从事分子生物学检验工作。

（责任编辑：张普）