宫颈癌组织中CDK8、p53、VEGF表达水平与肿瘤血管生成的关系研究

薛宏，汪光慧，李勇，卜兴江

（安徽省芜湖市第二人民医院 1.妇科，2.病理科，安徽 芜湖 241000；3.安徽师范大学生命科学学院，安徽 芜湖 241000）

宫颈癌组织中CDK8、p53、VEGF表达水平与肿瘤血管生成的关系研究

薛宏1，汪光慧1，李勇2，卜兴江3

（安徽省芜湖市第二人民医院 1.妇科，2.病理科，安徽 芜湖 241000；3.安徽师范大学生命科学学院，安徽 芜湖 241000）

目的探讨宫颈癌组织中细胞周期依赖性蛋白激酶8（CDK8）、p53、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平，及其与肿瘤血管生成的关系。方法收集该院收治的宫颈癌患者60例，检测宫颈癌组织中CDK8、p53、VEGF及微血管密度（MVD），分析CDK8、p53、VEGF、MVD与宫颈癌患者主要临床特征的关系。结果VEGF阳性患者MVD水平高于VEGF阴性患者（P＜0.05），CDK8阳性患者MVD水平高于CDK8阴性的患者（P＜0.05）。p53阳性与阴性患者MVD水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与癌旁组织比较，宫颈癌组织中VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平升高（P＜0.05）。与宫颈癌国际妇产科联盟分期Ⅰ期患者相比，Ⅱ～Ⅳ期患者的VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平升高（P＜0.05）。与肿瘤细胞高分化患者相比，中、低分化患者的CDK8（+）水平升高（P＜0.05）。与鳞癌患者相比，腺癌患者的VEGF（+）和MVD水平升高（P＜0.05）。多元线性回归分析显示，VEGF和CDK8是宫颈癌组织中MVD水平的影响因素（P＜0.05）。结论宫颈癌组织中CDK8、VEGF和p53蛋白表达水平升高，促进肿瘤细胞的生长和转移，CDK8、VEGF可能与肿瘤血管生成有关。

宫颈癌；血管内皮生长因子；细胞周期依赖性蛋白激酶8；微血管密度；p53

每10万女性中，有15.9～32.8例发生宫颈癌[1]，有5例因宫颈癌而死亡[2]。微血管密度（microvessel density，MVD）水平升高是肿瘤患者预后不良的主要因素[3-4]。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子，细胞周期依赖性蛋白激酶8（cyclin dependent kinase 8，CDK8）是蛋白质激酶家族中的一员，p53基因是人体抑癌基因，MVD、VEGF、CDK8、p53表达异常与患者预后不良有关[5-8]。本研究探讨宫颈癌组织中VEGF、CDK8及p53与肿瘤血管生成的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

前瞻性收集2015年1月-2017年1月安徽省芜湖市第二人民医院收治的宫颈癌患者60例。纳入标准：①宫颈癌（均有术中病理确诊）；②在本院接受手术治疗可获得活体组织标本；③年龄18～70岁；④肿瘤细胞类型为腺癌或鳞癌；⑤同意参与本研究。排除标准：①术前曾接受放化疗、分子生物治疗等特殊治疗；②合并其他恶性肿瘤；③复发性宫颈癌；④既往有心肌梗死、脑卒中等重大心血管疾病；⑤肝、肾等脏器功能不全；⑥生殖系统结核等其他重大生殖系统病变；⑦不能配合本研究。研究期间，根据纳入标准和排除标准，共纳入宫颈癌患者60例，其中宫颈癌国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰ期37例，Ⅱ期18例，Ⅲ期4例，Ⅳ期1例；肿瘤细胞分化程度：低分化8例，中分化22例，高分化30例；腺癌15例，鳞癌45例；体重指数18.92～31.63kg/m2，平均（23.61±3.46）kg/m2，年龄31～70岁，平均（47.82±7.28）岁。所有患者对本研究知情同意并签署知情同意书，本研究通过医院伦理委员会批准。

1.2 观察指标

主要观察指标为VEGF、CDK8、p53及MVD，同时观察患者的主要临床特征，包括FIGO分期、肿瘤细胞分化程度、肿瘤细胞类型及年龄。分析VEGF、CDK8、p53与MVD的相关性，同时分析VEGF、CDK8、p53、MVD与宫颈癌患者主要临床特征的相关性。

1.3 检测方法

收集宫颈癌组织和癌旁活体组织标本，用10%甲醛固定，用石蜡包埋、切片，用SP免疫组织化学法检测组织中VEGF、CDK8、p53、MVD的表达（相应的单克隆抗体购自福建迈新生物技术公司）。①VEGF：胞浆及胞膜出现黄色染色则为阳性，无显色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分；阳性细胞百分比≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；将染色和阳性细胞百分比2项得分相加，0～1分为阴性，≥2分为阳性。②CDK8：无染色0分，轻度染色1分，中度染色2分，重度染色3分；无阳性细胞为0分，阳性细胞百分比＜10%为1分，10%～50%为2分，≥50%为3分；将染色和阳性细胞百分比2项得分相加，0～1分为阴性，≥2分为阳性。③p53：缺乏或弱染色1分，中度染色2分，强染色3分；阳性细胞百分比＜10%为1分，10%～50%为2分，＞50%为3分；将染色和阳性细胞百分比2项得分相乘，1～3分为p53阴性，＞3分为阳性。④MVD：400高倍镜下测定18个血管密集区的微血管数，取平均值作为该患者相应组织中MVD。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 22.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，用t检验；计数资料以率（%）表示，用χ2检验，影响因素的分析采用多元线性回归模型，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53与MVD的相关性分析

VEGF阳性与阴性患者的MVD水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），VEGF阳性患者高于VEGF阴性患者；CDK8阳性与CDK8阴性患者MVD水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），CDK8阳性患者高于CDK8阴性患者；p53阳性与阴性患者MVD水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1和附图。

表1 宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53表达的MVD水平比较 （%，±s）

表1 宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53表达的MVD水平比较 （%，±s）

组别 例数 MVD t值 P值VEGF阳性 35 51.11±16.79 3.315 0.002阴性 25 36.08±18.05 CDK8阳性 30 51.13±16.17 2.738 0.008阴性 30 38.57±19.25 p53阳性 31 48.52±18.98 1.588 0.118阴性 29 40.93±17.96

2.2 宫颈癌组织和癌旁组织中VEGF、CDK8、p53及MVD表达水平比较

癌旁组织与宫颈癌组织中VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平比较，经t或χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），宫颈癌组织中VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平高于癌旁组织。见表2。

2.3 宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD水平与年龄的关系

年龄≥50岁与＜50岁患者的VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平比较，经t或χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

2.4 宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD与FIGO分期的关系

与FIGO分期Ⅰ期与Ⅱ～Ⅳ期患者的VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及 MVD 水平比较，经t或 χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），FIGO分期Ⅱ～Ⅳ期患者的 VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及 MVD 水平高于Ⅰ期患者。见表4。

2.5 宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD水平与肿瘤细胞分化程度的关系

附图 VEGF、CDK8、p53和MVD在宫颈癌中的表达 （免疫组织化学法×400）

肿瘤细胞高分化与中、低分化患者的CDK8（+）比例比较，经χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），肿瘤细胞中、低分化患者的CDK8（+）比例高于高分化患者。肿瘤细胞高分化与中、低分化患者的VEGF（+）、p53（+）及 MVD 水平比较，经t或 χ2检验，差异无统计学意义（P＜0.05）。见表5。

表2 宫颈癌组织和癌旁组织中VEGF、CDK8、p53及MVD表达水平比较 （n =60）

2.6 宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD水平与肿瘤细胞类型关系

鳞癌与腺癌患者的VEGF（+）和MVD水平比较，经χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），腺癌高于鳞癌。鳞癌与腺癌患者的CDK8（+）和p53（+）比例比较，经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表6。

2.7 宫颈癌组织中MVD水平的影响因素分析

多元线性回归分析因变量为MVD，自变量为VEGF、CDK8和P53，逐步回归结果显示，VEGF和CDK8是宫颈癌组织中MVD水平的影响因素（P＜0.05）。p53对宫颈癌组织中MVD水平无明显影响（P＞0.05）。见表 7。

表3 年龄与宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD水平的关系

表4 FIGO分期与宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD水平的关系

表5 肿瘤细胞分化程度与宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD水平的关系

表6 肿瘤细胞类型与宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53及MVD水平关系

表7 宫颈癌组织中MVD的影响因素分析

3 讨论

宫颈癌为实体瘤，由肿瘤细胞和间质构成，间质包含血管、淋巴管和结缔组织等，其中肿瘤血管起营养和支持肿瘤细胞的作用，肿瘤的新生血管在肿瘤的生长和扩散中具有重要意义[9-11]。VEGF、CDK8、p53被证实与肿瘤的生长和转移有关[12-14]，但VEGF、CDK8、p53与宫颈癌患者肿瘤血管生成的关系尚不清楚，尤其是CDK8。本结果结果显示，宫颈癌组织中VEGF、CDK8、p53和MVD水平升高，VEGF、CDK8与MVD水平有关，VEGF、CDK8、p53、MVD水平与FIGO分期有关，CDK8与肿瘤细胞分化程度有关，而VEGF与肿瘤细胞类型有关。

CDK8是蛋白质激酶家族中的一员，与细胞周期蛋白的结合，发挥细胞周期有序进行的关键功能。2016年我国学者梅兴明等[15]证实，CDK8与宫颈癌患者淋巴结转移有关。该研究提示，CDK8在宫颈癌的发生、发展中具有促进作用，与本研究结果相同[15]。但是该研究未能分析CDK8水平与宫颈癌组织中血管生成的关系。CDK8在肿瘤细胞增殖中的主要功能是促进肿瘤细胞分裂增殖，保证细胞周期的顺利进行。CDK家族还可以正向调节p53的表达。FIRESTEIN等[16]研究纳入了470例结直肠癌患者，结果发现，CDK8阳性患者的p53阳性率显著增高，最终促进肿瘤的增殖和转移。在乳腺癌中的研究表明，CDK8与肿瘤细胞的浸润、转移等有关，CDK8高表达是乳腺癌患者预后不良的主要危险因素[17]。目前CDK家族和p53已成为乳腺癌等肿瘤患者治疗的一个靶点[18-20]。本研究虽然表明，CDK8与肿瘤血管生成正相关，但是其因果关系尚不明确，尚需要临床研究进一步探讨。VEGF是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子，可在体内诱导血管新生。ZHANG等[5]研究显示，宫颈癌患者VEGF水平显著增高，且与患者预后不良有关。SUN等[6]研究证实，VEGF高表达与宫颈癌患者淋巴结转移有关。另外，本研究表明，VEGF在宫颈癌腺癌中表达水平高于鳞癌，与BIEDKA等[4]研究一致。

综上所述，宫颈癌组织中CDK8、VEGF和p53蛋白表达水平升高，促进肿瘤细胞的生长和转移，CDK8、VEGF可能与肿瘤血管生成有关。

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（童颖丹 编辑）

Expressions of CDK8, p53 and VEGF in cervical cancer and their correlations with angiogenesis

Hong Xue1, Guang-hui Wang1, Yong Li2, Xing-jiang Bu3
(1. Department of Gynecology, 2. Department of Pathology, the Second People’s Hospital of Wuhu,Wuhu, Anhui 241000, China; 3. School of Life Sciences, Anhui Normal University,Wuhu, Anhui 241000, China)

ObjectiveTo investigate the expressions of cyclin-dependent kinase 8 (CDK8), p53 and vascular endothelial growth factor (VEGF) in the cervical cancer tissues and their correlations with tumor angiogenesis.MethodsSixty cervical cancer patients were collected in our hospital. And the CDK8, p53, VEGF and microvessel density (MVD) in the cervical cancer tissues were detected. The correlations of CDK8, p53, VEGF and MVD with the main clinical features of cervical cancer were studied.ResultsMVD of the VEGF-positive patients was higher than that of the VEGF-negative patients (P＜ 0.05); MVD of the CDK8-positive patients was higher than that of the CDK8-negative patients (P＜ 0.05); there was no significant difference in MVD between the patients with negative p53 and those with positive p53 (P＞ 0.05). Compared with the adjacent tissues, VEGF(+),CDK8(+) and p53(+) rates and MVD were significantly increased in the cervical cancer tissues (P＜ 0.05). Compared with the patients of International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) stage I, the patients of FIGO stage II-IV got increased VEGF(+), CDK8(+) and p53(+) rates and MVD (P＜ 0.05). When compared with the patients with highly-differentiated carcinoma, the patients with moderately- or poorly-differentiated carcinoma got a higher CDK8(+) rate (P＜ 0.05). Compared with the squamous carcinoma patients, the patients with adenocarcinoma got a higher VEGF(+) rate and increased MVD (P＜ 0.05). Multiple linear regression analysis showed that VEGF and CDK8 were the factors influencing MVD in the cervical cancer tissues (P＜ 0.05).ConclusionsThe expression levels of CDK8, VEGF and p53 are elevated in cervical cancer tissues, which can promote the growth and metastasis of tumor cells. And CDK8 and VEGF may be related to tumor angiogenesis.

cervical cancer; vascular endothelial growth factor; cyclin-dependent kinase 8; microvessel density; p53

R737.33

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.29.008

1005-8982（2017）29-0039-06

2016-04-24