阴道炎性疾病代谢产物差异性比较

慕建宁，马小红，白芳利，严维娜，陈广福，卢占斌，安瑞芳

(1.西安交通大学医学院附属西安高新医院妇科，陕西 西安 710075；2.西安交通大学第一附属医院妇产科，陕西 西安 710061)

阴道炎性疾病代谢产物差异性比较

慕建宁1，马小红1，白芳利1，严维娜1，陈广福1，卢占斌1，安瑞芳2

(1.西安交通大学医学院附属西安高新医院妇科，陕西 西安 710075；2.西安交通大学第一附属医院妇产科，陕西 西安 710061)

目的探讨细菌性阴道病(BV)、外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)和细胞溶解性阴道病(CV)之间阴道代谢物的差异性。方法纳入2014年3至10月在西安高新医院门诊就诊的186例女性，其中BV女性50例，VVC女性41例，CV女性30例和健康女性65例；测定阴道分泌物中D-乳酸和L-乳酸、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)和基质金属蛋白酶-8(MMP-8)浓度，并分析其与三种阴道疾病的关系。结果四组阴道分泌物L-乳酸、D-乳酸、EMMPRIN、MMP-8浓度均有显著性差异(F值分别为917.059、727.342、133.657、262.906，均Plt;0.05)，BV组阴道分泌物D-乳酸和L-乳酸浓度与对照组和VVC组相比显著性减少(t值分别为15.624、80.106；26.299、87.663，均Plt;0.05)，VVC组阴道分泌物中L-乳酸浓度与对照组相似(t=1.423，Pgt;0.05)。对照组、BV组和CV组女性阴道分泌物中EMMPRIN浓度相似，对照组和BV组女性阴道分泌物中MMP-8浓度相似(t=1.296，Pgt;0.05)。对照组、BV组、VVC组和CV组阴道分泌物中EMMPRIN和L-乳酸浓度高度相关(r值分别为0.501、0.629、0.374、0.671，均Plt;0.05)。BV组阴道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸浓度呈高度相关(r=0.311，Plt;0.05)，而对照组、VVC组和CV组阴道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸浓度则弱相关。对照组和VVC组阴道分泌物中EMMPRIN和MMP-8浓度高度相关(r值分别为0.462、0.519，均Plt;0.001)。结论BV女性阴道分泌物D-乳酸和L-乳酸分泌不足，而VVC女性的EMMPRIN和MMP-8水平提升，女性在L-乳酸水平提升；这些偏差可能为预防和治疗BV、VVC和CV提供新的手段。

细菌性阴道病；外阴阴道假丝酵母菌病；细胞溶解性阴道病；代谢物

细菌性阴道病(bacterial vaginosis，BV)和外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal candidiasis，VVC)是育龄女性常见的外阴阴道障碍疾病[1-2]。BV的特征表现是阴道细菌微生物群的改变，导致微生态平衡失调，引起阴道分泌物异常；VVC是由假丝酵母菌增殖而导致的外阴阴道炎症，其典型特点是阴道微生物群落不变及阴道pH值保持不变[2]；细胞溶解性阴道病(cytolytic vaginosis，CV)是由阴道乳酸杆菌过度增殖而导致阴道鳞状上皮细胞溶解破裂所引起的阴道疾病。最近关于阴道微生态和阴道表皮细胞相互作用的研究提示可以通过提高阴道内代谢产物组成而维持阴道健康[3]。L-乳酸维持阴道正常的酸性环境以及参与免疫活性反应抑制BV相关性菌体的增殖[4]。L-乳酸和D-乳酸可能参与调节阴道表皮细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metallo￣proteinase inducer，EMMPRIN)的生成[5]。EMMPRIN间接性参与调节细胞内乳酸水平和预防细胞死亡。EMMPRIN也是基质金属蛋白酶-8(metalloproteinase-8，MMP-8)有效诱导子，而MMP-8可以使细菌更易进入上生殖道。本研究主要通过分析BV、VVC和CV女性阴道D-乳酸、L-乳酸、EMMPRIN和MMP-8浓度特征，并与健康女性相比较，有利于上述疾病新治疗方案的制定，现将结果报告如下。

1 资料和方法

1.1研究对象

2014年3至10月在西安高新医院门诊检测生殖道感染的绝经前性活跃女性，选择符合条件的女性进行分析。研究对象纳入和排除标准：非妊娠期或月经期女性；当前未使用抗生素、抗真菌药物，糖皮质激素或其它任何免疫抑制性药物及阴道产品等；最后一次性生活gt;24小时。根据上述标准纳入186例女性：其中BV女性50例，VVC女性41例，CV女性30例和健康女性65例(对照组)。四组女性在年龄、教育年限、妊娠次数、吸烟史、避孕方式、性伴侣(最后6个月)和每月性生活次数上无显著性差异(Pgt;0.05)，见表1。所有研究对象均完成关于药物史和人口学特征调查问卷。所有研究对象均签订知情同意书，本研究同时经医院伦理委员会审核通过。

表1 四组女性的基本特征

1.2临床评估和实验室分析

无菌棉签于阴道侧壁取阴道分泌物。参照中华医学会妇产科分会诊断标准[6]。BV诊断标准为阴道分泌物呈灰白色，黏稠状，呈鱼腥味，湿涂片中可检出线索细胞，pH值增高；VVC诊断通过检测女性阴道排泄物中假丝酵母菌的存在，通过显微镜检测和微生物培养结合革兰染色分析，临床症状为外阴瘙痒、灼痛，还可伴有尿痛以及性交痛等症状，白带增多及外阴潮红、水肿等；CV诊断通过显微镜观察上皮细胞形态和革兰染色检测阴道排泄物，阴道分泌物培养显示阴道菌落正常或大量乳酸菌生长而无假丝酵母菌生长以及结合临床瘙痒、外阴烧灼症状。

D-乳酸和L-乳酸手性异构体的测定通过D-乳酸/L-乳酸测定试剂盒(德国拜发R-Biopharm公司提供)，采用酶学法测定；EMMPRIN和MMP-8浓度测定采用ELISA检测试剂盒(美国Ramp;D Systems公司提供)进行测定。

1.3统计学方法

2结果

2.1不同健康状态女性阴道分泌物中代谢物浓度

四组阴道分泌物L-乳酸、D-乳酸、EMMPRIN、MMP-8浓度均有显著性差异(均Plt;0.05)，BV组阴道分泌物D-乳酸和L-乳酸浓度与对照组和VVC组相比显著性减少(t值分别为15.624、80.106；26.299、87.663，均Plt;0.05)，VVC组阴道分泌物中L-乳酸浓度与对照组相似(t=1.423，Pgt;0.05)。对照组、BV组和CV组女性阴道分泌物中EMMPRIN浓度相似，对照组和BV组女性阴道分泌物中MMP-8浓度相似(t=1.296，Pgt;0.05)，VVC组显著性升高，CV组显著性减少，见表2。

表2 四组女性阴道代谢物的浓度

注：◇表示与对照组和VVC组相比Plt;0.001；△表示与对照组和BV组相比Plt;0.001；□表示与对照组、BV组和VVC组相比Plt;0.001；◆表示与对照组、BV组和CV组相比Plt;0.001。

2.2不同状态下女性阴道分泌物各代谢物之间的关系

对照组、BV组、VVC组和CV组在阴道分泌物中EMMPRIN和L-乳酸浓度高度相关(r值分别为0.501、0.629、0.374、0.671，均Plt;0.05)。BV组阴道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸浓度呈高度相关(r=0.311，Plt;0.05)而对照组、VVC组和CV组阴道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸浓度则弱相关。对照组和VVC组在阴道分泌物中EMMPRIN和MMP-8浓度高度相关(r值分别为0.462、0.519，均Plt;0.001)，见表3。

表3 阴道分泌物中代谢产物与临床诊断的关系

3讨论

3.1 BV、VVC和CV阴道分泌物中代谢物水平

本研究主要分析三种女性常见阴道疾病BV、VVC和CV阴道分泌物中代谢物的浓度，并与健康女性相比较，研究发现BV女性阴道中D-乳酸和L-乳酸浓度减少，而VVC女性EMMPRIN和MMP-8水平提升，CV女性L-乳酸浓度增加。健康组中阴道L-乳酸和L-乳酸/D-乳酸比与EMMPRIN和MMP-8水平高度相关。

Witkin等[5]研究无症状育龄女性阴道分泌物中D-乳酸、L-乳酸、EMMPRIN和MMP-8之间的关系，研究发现当阴道内卷曲乳杆菌、加氏乳酸杆菌和詹森乳杆菌占主导时，D-乳酸水平最高，而对于以加德纳氏菌或惰性乳杆菌占主导的菌群中D-乳酸几乎不存在，并且阴道内L-乳酸水平也最低；BV的特点是乳酸杆菌缺乏而以加德纳氏菌占主导，因此本研究中BV女性阴道分泌物中D-乳酸和L-乳酸水平低于其它组BV女性阴道内D-乳酸处于低水平，虽然不能代表所有乳酸产生菌缺乏，但至少说明乳酸产生菌生成乳酸的浓度处于较小水平。L-乳酸的免疫特性及其对BV相关细菌的抑制作用，正逐渐被认可[5,7]，BV女性L-乳酸浓度减少可能导致BV相关细菌增值也包括阴道炎性免疫反应降低。因此，额外提供外源性L-乳酸或L-/D-乳酸比，可能使BV女性在恢复正常阴道菌群和预防复发方面获益。

3.2 BV、VVC和CV阴道分泌物中代谢物水平差异原因分析

本研究结果显示VVC女性阴道EMMPRIN浓度升高。假丝酵母菌达到适当浓度后促使EMMPRIN释放。假丝酵母菌细胞表面具有单羧酸转运蛋白-1(monocarboxylate transporter 1，MCT1)，EMMPRIN可能是必要的共调节因子参与调节L-乳酸进出酵母菌细胞[8]。VVC女性阴道分泌物相伴MMP-8水平的升高，EMMPRIN可作为MMP-8有效的诱导子，MMP-8水平的升高可促使组织损伤，诱导促炎症免疫反应引起白细胞大量生成，促进假丝酵母菌渗透阴道上皮细胞和加剧临床症状。因此，进一步研究确定阴道EMMPRIN或MMP-8浓度与假丝酵母菌酵母形态至假菌丝形态的转变、VVC敏感性或其复发的关系，有助于VVC女性预防和治疗提供新的手段。

CV疾病的特点是乳酸菌的过度增殖导致阴道鳞状上皮细胞溶解破裂[9]。本研究中CV女性阴道分泌物中L-乳酸水平升高，其水平可能用于预测女性CV呈阳性；而D-乳酸水平则无明显变化。这表明阴道内并非产D-乳酸的乳酸杆菌即阴道内卷曲乳杆菌、加氏乳酸杆菌和詹森乳杆菌呈现较高浓度。CV女性阴道上皮细胞溶解的合理性解释为过度的L-乳酸的生成并未伴随D-乳酸的增加，导致细胞内pH的降低进而引起细胞坏死。有研究也发现D-乳酸同L-乳酸竞争性结合MCT1，可以降低L-乳酸与MCT1的结合，进而减少L-乳酸进入细胞[10]。因此，或许可通过外源性的增加D-乳酸而降低L-乳酸进入阴道上皮细胞进而减小或阻止酸性介导的细胞损伤。

综上所述，内源性阴道菌群生成成分D-乳酸和L-乳酸的相对水平，可能在女性生殖道功能障碍的病理生理学影响比预期临床预防和治疗中扮演着更重要的作用。因此，处理阴道内乳酸同分异构体的浓度或许可作为预防和治疗的女性阴道疾病新型手段。

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[专业责任编辑：杨筱凤]

Differenceinvaginalmetabolitesamongwomenwithdifferentvaginitis

MU Jian-ning1, MA Xiao-hong1, BAI Fang-li1, YAN Wei-na1, CHEN Guang-fu1, LU Zhan-bin1, AN Rui-fang2

(1.DepartmentofGynecology,Xi’anHi-techHospitalAffiliatedtoMedicalSchoolofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710075,China;2.DepartmentofObstetricsandGynecology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

ObjectiveTo investigate the difference in vaginal metabolites among women with bacterial vaginosis (BV), vulvovaginal candidiasis (VVC) and cytolytic vaginosis (CV).MethodsA total of 186 women visiting outpatient department of Xi’an Hi-tech Hospital were enrolled in this study, including 50 women with BV, 41 women with VVC, 30 women with CV and 65 healthy women as controls. Concentrations of D-lactic acid, L-lactic acid, extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) and matrix metalloproteinase-8 (MMP-8) in vaginal secretions were detected and their relation with three kinds of vaginal diseases was analyzed.ResultsThere were significant differences in concentrations of L-lactic acid, D-lactic acid, EMMPRIN and MMP-8 in vaginal secretions in 4 groups (Fvalue was 917.059, 727.342, 133.657 and 262.906, respectively, allPlt;0.05). Concentrations of D-lactic acid and L-lactic acid in vaginal secretions in BV group were significantly lower than those in the control group and VVC group (tvalue was 15.624, 80.106, 26.299 and 87.663, respectively, allPlt;0.05). L-lactic acid concentration in vaginal secretions in VVC group was similar to that in the control group (t=1.423,Pgt;0.05). Concentrations of EMMPRIN in vaginal secretions in the control group, BV group and CV group were similar, and concentrations of MMP-8 in vaginal secretions in the control group and BV group were similar (t=1.296,Pgt;0.05). Concentrations of EMMPRIN were highly correlated with L-lactic acid in vaginal secretions in the control group, BV group, VVC group and CV group (rvalue was 0.501, 0.629, 0.374 and 0.671, respectively, allPlt;0.05). Concentrations of EMMPRIN were also closely related with D-lactic acid in vaginal secretions in BV group (r=0.311,Plt;0.05), whereas those were weakly correlated with D-lactic acid in vaginal secretions in the control group, VVC group and CV group. Concentrations of EMMPRIN and MMP-8 in vaginal secretions in the control group and VVC group were highly correlated (rvalue was 0.462 and 0.519, respectively, bothPlt;0.001).ConclusionConcentrations of D-lactic acid and L-lactic acid in vaginal secretions of women with BV are deficient. Levels of EMMPRIN and MMP-8 in women with VVC are elevated, and L-lactic acid level in women with CV is elevated. These deviations may contribute to new methods for prevention and treatment of BV, VVC and CV.

bacterial vaginosis (BV); vulvovaginal candidiasis (VVC); cytolytic vaginosis (CV); metabolite

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.11.018

R711.31

A

1673-5293(2017)11-1371-04

2017-03-06

慕建宁(1977—)，女，副主任医师，硕士，主要从事妇科肿瘤及妇科炎症研究。

安瑞芳，主任医师。