重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫SPF鸭免疫持续期试验

孙德君，冯艳男，秦立鑫

（ 哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫SPF鸭免疫持续期试验

孙德君，冯艳男，秦立鑫

（ 哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

试验对重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫SPF鸭后的免疫持续期进行了研究。选用14日龄SPF鸭20只，其中10只鸭的腿部肌肉接种免疫灭活疫苗，剂量为0.5 mL·只-1，另10只不接种的鸭作为对照组。结果表明，免疫后14 d可以产生较高的免疫力，H5N1 Re-8株的抗体效价平均增值为5.6 log2，H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均增值为6.6 log2。到35 d产生的HI抗体效价平均值达到高峰，H5N1 Re-8株的抗体效价平均增值为8.6 log2，H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均增值为9.5 log2。第120天H5N1 Re-8株抗体效价平均值为4 log2，H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均值均为5 log2，为抗体的保护临界值。根据此数据分析，一次免疫的免疫保护期约为120 d。

重组禽流感病毒；SPF鸭；二价灭活疫苗；免疫

1 试验材料

1.1 试验动物

SPF鸭购于维科生物技术有限公司，隔离饲养。

1.2 疫苗

试验用疫苗为市售的某厂家生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re-1株）产品批号为201701，生产日期为20170616。

1.3 血清检测

血清检测所用的H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re-1株标准阳性血清购买于维科生物技术有限公司。

2 试验方法

选用14日龄SPF鸭20只，分为两组，每组10只，其中第一组10只鸭的腿部肌肉注射重组禽流感病毒（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re-1株）亚型二价灭活疫苗0.5 mL，第二组的10只鸭不进行免疫，作为对照组。两组SPF鸭分别饲养在隔离器中。1~60 d内，每7 d采血1次；60 d后，每14 d采血1次，直至120 d。采血后将分离的血清置于-20℃保存备用。按现行《中国兽药典》附录中的红细胞凝集抑制试验法进行HI抗体效价测定。按照国家动物疫病强制免疫计划中的要求，抗体保护临界值定为4 log2。

3 试验结果

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫SPF鸭，血清中HI抗体水平消长规律测定结果见表1和图1。

表1 SPF鸭免疫重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗抗体效价平均值（log2）

图1 SPF鸭免疫重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗抗体效价平均值

由表1可知，免疫SPF鸭后，第7天开始产生抗体，第14~21天高于保护临界值，并逐渐升高，第35天达到抗体的高峰值，此后逐渐下降。第120天下降至抗体的保护临界值。根据以上的数据分析，一次免疫的免疫保护期约为120 d。

4 讨论

SPF鸭采用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫后，在同一时间点上，H5N1 Re-8株与H7N9 H7-Re-1株的抗体水平稍有差异，H5N1 Re-8株的抗体效价平均值比H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均值低约1个滴度。

当前，疫苗免疫依然是防控禽流感的主要措施。水禽不仅是AIV的重要储存宿主，而且其本身也可以感染发病[1-4]。然而，一些养殖户仍然对水禽禽流感的预防工作不太重视，对水禽不进行免疫疫苗。试验结果表明，重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗对鸭具有良好的免疫原性，仅免疫1次，免疫后7 d可产生抗体，在免疫后14 d的抗体水平下就可以达到保护作用。免疫35d后抗体水平逐渐开始下降，到120 d时，抗体水平下降到保护的临界值。总体看来，一次免疫保护的时间为120 d，难以达到理想的效果。下一次试验，将考虑进行二次免疫，以提高抗体效价和抗体的持续时间。

试验中所使用的鸭为SPF鸭，当对当地养殖的鸭子进行免疫时，要根据实际情况及母源抗体的情况，进行抗体持续期的测定，以制定合理的免疫程序。

[1]GB/T18936-2003.高致病性禽流感诊断技术[S].北京:中国标准出版社,2003.

[2] 沈欣悦,程旭,刘梅,等.重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型）对鸭和鹅的免疫效果观察[J].中国动物传染病学报,2013,21（4）:40-45.

[3] 王明芳,邓国华,杨孝朴,等.两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒的序列分析及致病性研究[J].中国预防兽医学报,2012,34（11）:854-858.

[4]刘安芳.水禽,流感病毒扩大器——浅谈水禽流感的综合防制[J]. 中国动物保健,2008（7）:86-89.

Immune Duration Test of SPF Duck Immunized with Divalent Inactivated Recombinant Avian Influenza Virus(H5+H7)Vaccine

SUN Dejun,FENG Yannan,QIN Lixin

（Harbin Pharmaceutical Group Biological Vaccine Co.,Ltd.,Harbin 150069,China）

This study was conducted to investigate the immune persistence of recombinant avian influenza virus(H5+H7)bivalent inactivated vaccine after immunization with SPF duck.Twenty SPF ducks aged 14 days were selected.In each of the 10 ducks,the leg muscles were immunized with inactivated vaccines,and each of which was 0.5mL.Moreover,10 ducks without vaccination were used as control group.The aver⁃age value of antibody titer of H5N1 Re-8 strain was 5.6 log2,and the average value of antibody titer of H7N9 H7-Re-1 strain was 6.6 log2.The average titer of HI antibody reached the peak at 35 days,and the average titer of antibody titer of H5N1 Re-8 strain was 8.6 log2,and the average titer of antibody titer of H7N9 H7-Re-1 strain was 9.5 log2.On the 120th day,the average titer of antibody titer of H5N1 Re-8 strain was 4 log2,and the average titer of antibody titer of H7N9 H7-Re-1 strain was 5 log2,which was the critical value of antibody protection.According to the data analysis,the immune protection period of the first immunization was about 120 days.

recombinant avian influenza virus;SPF duck;bivalent inactivated vaccine;immunity

S834；S852.65+9.5

A

1001-0084（2017）11-0037-02

2017-10-18

孙德君（1980-），女，黑龙江勃利人，博士，高级兽医师，主要从事禽用疫苗研发。