小型规模猪场爆发蓝耳病毒感染的诊断与防控分析

李 晶 ，杨 俊 ，葛 猛 ,龚爱民

（1.湖南省桃江县畜牧水产局，湖南桃江 413400；2.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙400131）

小型规模猪场爆发蓝耳病毒感染的诊断与防控分析

李 晶1，杨 俊2，葛 猛1,龚爱民1

（1.湖南省桃江县畜牧水产局，湖南桃江 413400；2.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙400131）

某小型猪场的不同生长阶段的育肥猪陆续出现发病死亡，母猪出现流产的情况，根据发病猪群的临床表现和实验室检测结果，诊断该猪场的主要病因为蓝耳病毒感染，采取相应防控措施后疫情得到了有效控制。

猪蓝耳病毒感染；PCR；序列分析

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由PRRS病毒 引起的猪的一种高度接触性传染病，患病怀孕母猪表现为流产、早产、产死胎、木乃伊胎等临床症状，保育和育肥猪表现为以腹式呼吸为主的呼吸道症状[1]。我国是由郭宝清第一次在爆发的流产胎儿中分离到PRRSV，并证实了该病在猪场中的存在[2]。尤其是2006年以来，我国猪群中出现高致病性PRRSV毒株的感染并广泛流行，导致严重型PRRS的爆发，给养猪业造成了巨大的经济损失[3-4]。目前,PRRS对我国生猪养殖业造成了严重危害。

1 病例介绍

2016年7月，湖南常德某20头母猪的小型规模猪场发病，前期发病表现为50～75kg肥猪发病，体温可升高至40～42℃以上，耳朵及全身皮肤通红，食欲不振或废决；哺乳仔猪和保育猪陆续发病，体温达41以上，后肢瘫痪或站立不稳，病程5～7d后死亡；少数怀孕母猪出现体温升高，食欲下降，前后共有5头母猪出现了流产现象，一头母猪产仔后7天小猪全部死亡，母猪也出现死亡。发病后，笔者协助猪场将4头不同日龄、具有典型临床症状的病猪送检，进行实验室检测。

2 实验室诊断

2.1 引物设计和病料样品RNA的提取

根据GenBank中PRRSV基因序列（登录号：EF112445.1），应用Pri m er设计了一对引物，上游引物为：5-GCGCTCACTATGGGAGCAGTAG-3 ；下游引物为：5-TAATTACGGCCGCATGGTTC-3；扩增片段为830bp，由上海生工合成设计的引物。

从送检的4头猪中分别取4份样品，使用北京天恩泽基因科技有限公司的柱式病毒试剂盒提取样品RNA。

2.2 PRRSV片段的扩增

提取的基因组RNA为模板，利用反转录试剂盒（Therm o公司）进行反转录，反转录体系如下：FreeRNaseH2O 10 μL，5×RT Buf f er4 μL，10m M ol dNTPs 2μL，Random pri m er 1μL；ReverTra Ace 1 μL，RNaseInhi bi t or1 μL；Tot alRNA 1 μL。

反转录条件为：30℃10 m i n,42℃60 m i n,99℃5 m i n。PCR扩增体系为：M i x 25μL，基因组模板，上游和下游引物各1μL，加超纯水至50μL。PCR反应条件为：94℃ 预变性 5 m i n，然后 94℃ 30 s、60℃30 s、72℃ 30 s,40 个循环，72℃延伸 7 m i n。

2.3 PCR产物的序列分析

将PCR扩增产物测序并进行Bl ast分析。

3 结果

3.1 PCR扩增结果

以提取的基因组为模板进行RT-PCR扩增，4个样品中均扩增到830bp的目的片段，结果见图1。

图1 RT-PCR扩增结果

3.2 测序结果

将RT-PCR产物进行测序和Bl ast比对分析，结果显示：所扩增的基因片段为猪蓝耳病毒基因，与PRRSV基因序列（登录号：EF112445.1）同源性达到100%。

4 讨论

高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征在湖南省发生以来，根据何世成等对湖南省的20个规模化猪场血清学监测表明，免疫血清阳性率和非免疫血清阳性率仅有9.3﹪相差，说明规模猪场的野毒感染率比较高[5]。王建等对上海地区发病猪进行PRRSV检测，2002～2009年H P-PRRSV阳性率逐年上升，成为PRRS中的优势病毒株，上海地区猪场自2009年开始使用H P-PRRS弱毒疫苗后，H P-PRRSV在临床病例中的检出率由53.69﹪下降到22.3﹪，说明H P-PRRS弱毒疫苗的控制效果较好[6]。在笔者进行兽医工作的地区也使用H P-PRRS弱毒疫苗多年，在进行动物流行病学调查时未见H P-PRRS的爆发与流行，说明高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征的流行得到了有效地控制，但缺乏系统的实验数据支持。

由于H P-PRRSV疫情整体平稳，部分养殖户主观上对H P-PRRSV疫苗免疫不重视，在个别猪场及周围有爆发高热病的可能。本文中猪场根据检测结果，采取对未发病猪群紧急免疫H P-PRRSV弱毒疫苗，发病猪使用泰万菌素为主的综合防控措施后，疫情得到有效控制。2017年开始，猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征将会退出国家动物强制免疫范围，我们兽医工作者和规模养殖户要加强对猪繁殖与呼吸综合征的综合防控，同时加强流行病学与病原学监测，逐步实现PRRSV的无疫区建设。

[1]刘准，王风雪，武华，等.猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白研究进展[J].动物医学进展，2010，31（12）：120-124.

[2]郭宝清，陈章水，刘文兴，等.从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J].中国畜禽传染病,1996,（2）：1-4.

[3]Tian Ke-gong,Yu Xiu-ling, Zhao Tie-zhu,etal.Emergence of fatal PRRSV variants:unparalleled outbreaks of atypical PRRS in China and molecular dissection of the unique hallmark[J].PLoS One,2007,2(6)526:1-10.

[4]Li Yu-feng,Wang Xing-long,Bo Kun-tao,et al.Emergence of a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus in the Mid-Eastern region of China [J].Vet J,2007,174(3):577-584.

[5]何世成，范仲鑫，刘道新，等.规模化猪场猪瘟猪繁殖与呼吸综合征血清学调查与分析[J].中国兽医杂志，2009，45（4）:48-49.

[6]王建，张维谊，鞠厚斌，等.2004年-2012年上海地区猪繁殖与呼吸综合征流行情况调查 [J].中国预防兽医学报，2015，37（3）：190-193.

S858.28

C

1006-4907（2017）05-0026-02

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.05.012

2017-10-03