酒精性肝损伤大鼠模型血脂水平动态变化及乌药的干预研究*

王军伟陈英俊余力丁慧珍谭明明楼招欢

1浙江省天台县人民医院浙江天台317200

2浙江中医药大学浙江杭州310053

酒精性肝损伤大鼠模型血脂水平动态变化及乌药的干预研究*

王军伟1陈英俊1余力1丁慧珍1谭明明1楼招欢2#

1浙江省天台县人民医院浙江天台317200

2浙江中医药大学浙江杭州310053

目的：观察酒精性肝损伤大鼠模型血脂的动态改变以及乌药的干预作用。方法：采用SD大鼠灌胃给予体积浓度50%的白酒，每日1次，灌胃容积1.2ml/100g，连续33d建立酒精性肝损伤模型，造模的同时灌胃给予乌药不同提取物。分别于给药第14d、第21d及末次给药并禁食12h后，眼眶静脉丛取血，离心制备血清，全自动生化分析仪测定大鼠血清TC、TG含量。结果：模型组TC、TG显著升高；动态观察显示模型组血清TC、TG含量早中期逐渐升高，第3周达高峰，后期回落；较之模型组，乌药组的血清TC、TG含量均显著下降，乌药醇提取物组、乌药醇提取物石油醚萃取物组及乌药醇提取物正丁醇萃取物组对TC下降较优，而乌药醇提取物组及乌药醇提取物石油醚萃取物组对TG下降较优。结论：酒精性肝损伤大鼠模型血脂动态改变规律为先升高后降低，第3周末血脂达高峰；乌药可以抑制酒精引起的高脂血症。

酒精性肝损伤血脂乌药大鼠实验研究

肝功能异常往往会并发血脂异常，而治疗后随着肝功能的恢复，血脂水平随之下降。乌药为传统理气中药，有调节胃肠道、保肝、抗炎、降脂等作用。本研究在既往工作[1]的基础上，观察酒精性肝损伤大鼠模型血脂的动态改变，以及乌药的干预作用。

1 材料

1.1 动物：健康SD大鼠，雌性，体重180～220g，88只，购自浙江省实验动物中心，动物质量合格证号：0016074。

1.2 药品与试剂：乌药，浙江红石梁集团天台山乌药生物工程有限公司提供，参考文献[1]方法得各种提取物，即乌药水提取物（WYSTW）、乌药醇提取物（WYCTW）、乌药醇提取物石油醚萃取物（WYCTC1）、乌药醇提取物乙酸乙酯萃取物（WYCTC2）、乌药醇提取物正丁醇萃取物（WYCTC3）。阳性对照药：思密达（浙江万邦药业股份有限公司，批号：02130121）。白酒：红星二锅头酒（酒精度52%），2.0L/瓶，北京红星股份有限公司。与双蒸水按一定体积比例稀释，酒精体积分数为50%。TC试剂盒，批号20140723；TG试剂盒，批号20140804，均购于宁波美康生物科技股份有限公司。

1.3 仪器：TBA-40FR全自动生化仪，日本东芝医疗系统株式会社。

2 方法

2.1 实验方法：选取健康雌性SD大鼠88只，随机分为8组，每组11只，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组（思密达0.9g/kg）、乌药水提物（WYSTW）组、乌药醇提物（WYCTW）组、乌药石油醚萃取物（WYCTC1）组、乌药乙酸乙酯萃取物（WYCTC2）组、乌药正丁醇萃取物（WYCTC3）组。所有大鼠均给予基础饲料，自由采食饮水。除正常对照组（以等体积的蒸馏水灌胃）外，其余各组大鼠均灌胃给予浓度为50%（v/v）的白酒，每日1次，灌胃容积1.2ml/100g，连续33d。自造模第l天起，除正常对照组和模型对照组灌服蒸馏水外，其余各给药组分别灌胃给予相应的药物，4g/kg，每日1次，灌胃容积为1ml/100g体重，连续33d。分别于给药第14d、第21d及末次给药并禁食12h后，眼眶静脉丛取血，离心制备血清，全自动生化分析仪分别测定大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。

2.2 统计学方法：使用SPSS16.0统计软件包进行统计学分析，计量资料数据以±s表示，用单因素方差分析，两组间比较方差齐性用LSD方法检验，方差不齐用Dunnett检验。

3 结果

3.1 酒精性肝损伤模型大鼠TC含量的动态变化及乌药干预后变化：与正常对照组相比，造模14d、21d、33d的TC含量均显著升高，尤以21d时达到最高水平，模型对照组大鼠21d、33d的TC含量与正常组相比有显著性差异（P＜0.01）。与模型对照组相比，给药第21d，WYSTW、WYCTW、WYCTC1、WYCTC2及WYCTC3组大鼠血清TC含量均明显降低（P＜0.05或0.01）；给药第33d，WYCTW、WYCTC1及WYCTC3组大鼠血清TC含量明显降低（P＜0.05或0.01）。见表1。

表1 乌药不同提取部位对急性酒精性肝损伤模型大鼠血清TC含量的影响（±s）

表1 乌药不同提取部位对急性酒精性肝损伤模型大鼠血清TC含量的影响（±s）

注：与正常对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别TC（mmol/L）给药33d 1.07±0.23 1.54±0.37##1.37±0.19 1.34±0.23 1.17±0.21*1.05±0.16**1.34±0.36 1.22±0.15*正常对照组模型对照组阳性对照组WYSTW组WYCTW组WYCTC1组WYCTC2组WYCTC3组给药14d 1.43±0.28 1.52±0.23 1.50±0.43 1.66±0.18 1.56±0.37 1.55±0.43 1.58±0.31 1.55±0.27给药21d 1.45±0.21 1.87±0.35##1.42±0.27**1.62±0.21*1.49±0.25**1.52±0.39*1.59±0.36*1.51±0.17**

3.2 酒精性肝损伤模型大鼠TG含量的动态变化及乌药干预后变化：与正常对照组相比，造模14d、21d、33d的TG含量均显著升高，尤以21d时达到最高水平，模型对照组大鼠14d、21d、33d的TG含量与正常组相比有显著性差异（P＜0.05或0.01）。与模型对照组相比，给药第14d及第21d，WYCTW、WYCTC1、WYCTC2及WYCTC3组大鼠血清TG含量均明显降低（P＜0.05或0.01）；给药第33d，各给药组大鼠血清TG含量均明显降低（P＜0.05或0.01）。见表2。

表2 乌药不同提取部位对急性酒精性肝损伤模型大鼠血清TG含量的影响（±s）

表2 乌药不同提取部位对急性酒精性肝损伤模型大鼠血清TG含量的影响（±s）

注：与正常对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

给药33d 0.35±0.07 0.55±0.17#0.41±0.08*0.37±0.08*0.34±0.06**0.33±0.10**0.40±0.11*0.41±0.07*组别正常对照组模型对照组阳性对照组WYSTW组WYCTW组WYCTC1组WYCTC2组WYCTC3组TG（mmol/L）给药14d 0.53±0.13 0.83±0.20##0.70±0.18 0.74±0.19 0.54±0.11**0.54±0.12**0.63±0.16**0.66±0.11**给药21d 0.72±0.18 1.19±0.32##1.12±0.21 1.10±0.31 0.76±0.14**0.87±0.23**0.86±0.16**0.99±0.12*

4 讨论

酒精性肝损伤致血脂异常及脂肪肝的机理与以下病理生理过程有关：当酒精进入肝细胞后，在乙醇氧化酶系统作用下转变为乙醛，进而再次氧化转变成乙酸，此过程使辅酶不断转变为还原型辅酶，两者比例的改变抑制线粒体内的三羧酸循环，导致脂肪氧化减弱，肝内脂肪酸的合成增多，引起甘油三酯合成增多，导致血甘油三酯水平上升和脂肪肝的形成。胆固醇的最终代谢产物是胆汁酸，而胆汁酸仅在肝脏合成，在肝细胞内质网微粒体酶的作用下，胆固醇在肝内逐步转化成胆汁酸，肝功能受损时，肝脏脂肪代谢出现紊乱，胆固醇降解成胆汁酸的过程受阻，从而导致血胆固醇升高[1]。

研究结果表明，酒精性肝损伤模型大鼠TC、TG显著升高，动态观察显示模型组血清TC、TG含量早中期逐渐升高，第3周达高峰，后期回落，与文献报道一致[2]。考虑早中期血脂升高与肝功能受损相关，而后期回落可能与大鼠老化及肝功能受损后进食量减少有关，有待进一步论证。较之模型组，乌药组的血清TC、TG含量均有显著下降。比较乌药不同提取物对急性酒精性肝损伤模型大鼠血脂生化指标的影响，可得出乌药醇提取物调节血脂作用优于水提取物（药效作用时间久，效果稳定）；醇提取物三个萃取部位作用比较后，乌药醇提石油醚萃取物效果最优，药效作用依次为：乌药醇提石油醚萃取物＞醇提正丁醇萃取物＞醇提乙酸乙酯萃取物。

[1] 王美娟，王军伟，吴人照，等.乌药不同提取物对急性酒精性肝损伤模型大鼠血脂的影响[J].浙江中医杂志，2014，49(6)：457-458.

[2] 赵敏，杨杏芬，黄俊明，等.小鼠酒精性肝损伤模型的动态研究[J].中国公共卫生，2005，21(9)：1101-1102.

国家自然科学基金项目基于“肠-肝轴”的乌药抗慢性酒精性肝损伤的作用机制研究，编号：81503328；浙江省科技计划项目乌药抗酒精性肝损伤有效部位研究，编号：2016C33184；浙江省医药卫生科技计划项目乌药不同提取物对慢性酒精性肝损伤模型大鼠肠源性内毒素血症的干预作用，编号：2015DTA021；台州市科技计划项目乌药对急性酒精性肝损伤模型大鼠肠源性内毒素血症的干预作用，编号：2014A33339

#通讯作者：楼招欢，E-mail：lou_jasmine@163.com

2017-04-12