岗梅茎的化学成分研究

杜冰曌　张和新歌　杨鑫瑶　张瑞飞　尹旭　邢建永　韩正洲　高增平　柴兴云

[摘要]综合运用多种色谱技术从我国岭南特色药材岗梅茎的水提物中分离得到了13个化学成分，通过波谱技术将它们分别鉴定为柳叶绣线菊新木脂醇（1）， rel（7R，8S）3，3′，5trimethoxy4′，7epoxy8，5′neolignan4，9，9′triol 9βDglucopyranoside（2），（+）cycloolivil（3），（+）syringaresinol4′OβDmonoglucoside（4）， 鹅掌楸苦素（5）， 咖啡酸（6）， 3，4二羟基5甲氧基苯甲醛（7）， 1，2，4苯三酚（8）， 3，4，5trimethoxyphenyl1OβDapiofuranosyl（1″→6′）glucopyranoside（9）， 秦皮乙素（10）， 隐绿原酸乙酯（11）， 绿原酸乙酯（12），和rel5（3S，8Sdihydroxy1R，5Sdimethyl7oxa6oxobicyclo[3，2，1]oct8yl）3methyl2Z，4Epentadienoic acid（13）。化合物1～5為木脂素类化合物、6～12为其他酚酸类化合物、13为倍半萜内酯类化合物，其中7， 8， 11， 13为首次从冬青属植物中分离得到，1～3， 9， 10， 12为首次从岗梅中分离得到。抗炎活性筛选结果显示，化合物1和9 对RAW2647细胞中NO的生成显示中等抑制作用，化合物10具有微弱的抑制效果，其IC50分别为357， 506， 987 μmol·L-1。

[关键词]岗梅； 冬青属； 冬青科； 化学成分； 抗炎活性

[Abstract]Phytochemical investigation on the stems of Ilex asprella by using various chromatographic techniques led to the isolation of 13 compounds By spectroscopic analyses and comparisons the spectral data with those in literatures， these compounds were identified as salicifoneoliganol（1）， rel（7R，8S）3，3′，5trimethoxy4′，7epoxy8，5′neolignan4，9，9′triol 9βDglucopyranoside（2），（+）cycloolivil（3），（+）syringaresinol4′OβDmonoglucoside（4）， liriodendrin（5）， caffeic acid （6）， 3，4dihydroxy5methoxybenzaldehyde（7）， benzene1，2，4triol（8）， 3，4，5trimethoxyphenyl1OβDapiofuranosyl（1″→6′）glucopyranoside（9）， aeculetin（10）， cryptochlorogenic acid ethyl ester（11）， chlorogenic acid ethyl ester（12）， and rel5（3S，8Sdihydroxy1R，5Sdimethyl7oxa6oxobicyclo [3，2，1]oct8yl）3methyl2Z，4Epentadienoic acid（13） Among them， compounds 7， 8， 11， and 13 were isolated from genus Ilex for the first time， and 13， 9， 10， and 12 were isolated from this speciesfor the first time The antiinflammatory assay results of these compounds showed that compounds 1 and 9 showed moderate inhibitory effect against NO production in RAW 267 4 cells with IC50 values of 357 and 506 μmol·L-1， in vitro respectively， whereas compound 10 showed weak inhibition（IC50 value 987 μmol·L-1）.

[Key words]Ilex asprella； Ilex； Aquifoliaceae； chemical constituents； antiinflammatory activity

岗梅为冬青属植物梅叶冬青Ilex asprella （Hook et Arn）Champ ex Benth的干燥根及茎，其性凉、味苦，归肺、脾、胃经，具有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功效，临床上用于治疗风热感冒、急慢性咽喉炎、肺热咳嗽、咽喉肿痛、跌打瘀痈等病症[1]。岗梅既是中成药感冒灵颗粒、外感颗粒、青梅感冒冲剂等清热解毒类的重要组成药物，也是多种医院制剂和凉茶饮品的原料之一，市场消耗量大。岗梅在传统上多以根入药，然而因植株生长缓慢，野生资源已不能满足市场所需，广东和湖南两省将岗梅茎一并收载于《广东省中药材标准》（2004年版）和《湖南省中药材标准》（2009年版）中以扩大入药资源，同时当地政府、企业等也正在加大种植栽培力度，以缓解当前的资源压力[2]。

前人对岗梅的根和叶2部位进行了化学成分研究，报道了从中分离得到的至少104个化学成分，以三萜及其皂苷为主，还有绿原酸类、黄酮类、苯丙素、木脂素等酚酸类成分，及少量甾体等。药理活性研究包括抗炎、抗病毒、抗肿瘤、调节脂质代谢等。作为岗梅质量标准体系研究的一部分，本课题首次开展岗梅茎的化学研究，综合运用多种色谱和波谱方法，从岗梅茎的水提物中分离鉴定了13个化合物，并筛选了体外抗炎活性。本研究为充分利用岗梅茎的资源和阐明岗梅的药效物质基础提供了一定的参考。endprint

1材料

11药材药材于2016年9月采收于广东省梅州市平原县仁居镇华润三九青草湖种植基地，经韩正洲教授级高级工程师鉴定为梅叶冬青I asprella的茎，药材标本（2016GM901）存放于北京中医药大学中药现代研究中心。

12细胞小鼠巨噬细胞RAW 2647细胞系购自上海细胞所。

13仪器和试剂Varian Inova500型核磁共振仪；LCMSITTOF系统（Shimadzu，日本）；制备型高效液相色谱仪（Waters）；半制备色谱柱ReprosilPur Basic C18 （10 mm × 250 mm，5 μm）Sephadex LH20（Pharmacia）；旋转蒸发仪（Buchi，瑞士）；ODS（40～63 μm，Merck）；HP20大孔树脂（DIAION，日本）；柱色谱硅胶（200～300目）及薄层色谱硅胶板GF254（青岛海洋化工厂产品）；提取和分离中所用化学试剂均为分析纯（北京化工厂）；SANYO MCO18AIC细胞培养箱；Motic AE2000倒置荧光显微镜；ESCO OptiMair超净工作台；瑞士TECAN M1000型多功能酶标仪；DMEM培养基（Hyclone，美国）；胎牛血清（Gibco，美国）；NO化学法试剂盒（南京建成生物公司）；阳性对照为姜黄素和吲哚美辛（Sigma，美国）。

2提取与分离

岗梅的干燥主茎19 kg，粉碎后以10倍量纯水加热回流提取2次，每次2 h，合并提取液，并将提取液减压浓缩至粘膏状，最终得到提取物浸膏（IA）约40 kg。IA经HP20大孔吸附树脂柱色谱分离，乙醇水梯度洗脱，得到水洗脱部位（24 kg）和95%乙醇洗脱部位（16 kg）。

95%乙醇洗脱部位（15 kg）经硅胶柱色谱分离，经二氯甲烷甲醇（10∶1～0∶1）梯度洗脱，相似洗脱部分合并后，共得到12份洗脱段（Ⅰ～Ⅻ）。Ⅲ（约80 g）经硅胶柱色谱分离，乙酸乙酯甲醇甲酸（30∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脱，合并得12个流分（Ⅲ1～Ⅲ12）和化合物4 （10 g）。Ⅲ2（20 g）再经Sephadex LH20（MeOH）分离，得到8个流分（Ⅲ2A～2H）。Ⅲ2D（62 g）再经硅胶柱色谱分离，石油醚乙酸乙酯甲酸（3∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脱，得到Ⅲ2D1～2D9。Ⅲ2D6（250 mg）经半制备液相（MeOHH2O，30∶70）纯化得到化合物1 （27 mg）和13 （37 mg）。Ⅲ2D7（220 mg）经半制备液相（MeOHH2O，40∶60）纯化得到化合物11（38 mg）和12（59 mg）。Ⅲ2D8（410 mg）经半制备液相（MeOHH2O，40∶60）纯化得到化合物3（50 mg）。Ⅲ2E（35 g）再经硅胶柱色谱分离，石油醚乙酸乙酯甲酸（3∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脱，得到（Ⅲ2E1～2E10）。Ⅲ2E4（150 mg）经半制备液相（MeOHH2O，30∶70）纯化得到化合物6 （610 mg），7（50 mg），8 （42 mg）和10 （65 mg）。Ⅳ（65 g）经硅胶柱色谱分离，乙酸乙酯甲醇甲酸（10∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脫，相似组分合并，得8个流分（Ⅳ1～Ⅳ8）。Ⅳ3 （20 g）经Sephadex LH20多次纯化和ODS柱色谱（MeOHH2O，80∶20）分离得到2（75 mg）和9（810 mg）。Ⅵ（400 g）经硅胶柱色谱分离，乙酸乙酯甲醇甲酸（10∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脱，得到化合物5 （20 g）。

3结构鉴定

化合物1白色粉末； ESIMS m/z 399 [M+Na]+； 1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：671（2H，s，H2，6），661（1H，br s，H6′），658（1H，br s，H2′），551（1H，d，J=60 Hz，H7），385（1H，dd，J=115，55 Hz，H9a），375（1H，dd，J=110，35 Hz，H9b），356（2H，t，J=65 Hz，H9′），345（1H，m，H8），256（2H，t，H7′），179（2H，m，H8′），382（6H，s，3，5OCH3）； 13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：1493（C3，5），1464（C4′），1418（C3），1368（C1′），1361（C4），1344（C1），1297（C5′），1170（C6′），1167（C2′），1041（C2，6），888（C7），651（C9），623（C9′），568（C3，5OCH3），559（C8），357（C8′），327（C7′）。以上数据与文献[3]对比，鉴定化合物1为柳叶绣线菊新木脂醇。

化合物2白色粉末； ESIMS m/z 575 [M+Na]+； 1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：674（1H，s，H6′），668（3H，s，H2，2′，6），555（1H，d，J=60 Hz，H7），433（1H，d，J=80 Hz，Hglc1），406（1H，t，J=85 Hz，H9a），383～388（2H，m，H9b，Hglc6a），360～367（2H，m，H8，Hglc6b），352（2H，t，J=60 Hz，H9′），333～337（1H，m，Hglc3），325～328（2H，m，Hglc4，5），319～323（1H，m，Hglc2），257（2H，t，J=80 Hz，H7′），177（2H，t，J=65 Hz，H8′），376（6H，s，H3，5OCH3），381（3H，s，H3′OCH3）； 13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：1492（C3，5），1474（C4′），1451（C3′），1370（C1′），1362（C4），1338（C1），1295（C5′），1181（C6′），1141（C2′），1043（C2，6），1041（Cglc1），894（C7），781（Cglc3），779（Cglc5），751（Cglc2），723（C9），716（Cglc4），627（Cglc6），622（C9′），568（C3，5OCH3），568（C3′OCH3），529（C8），357（C8′），328（C7′）。以上数据与文献[4]对比，鉴定化合物2为rel（7R，8S）3，3′，5trimethoxy4′，7epoxy8，5′neolignan4，9，9′triol 9βDglucopyranoside）。endprint