重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+ Re-8株）免疫抗体监测与分析

周 伟 徐小艳 徐正军 王相子 开 妍 陈昌海

（溧水区农业局，江苏溧水 211200）

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+ Re-8株）免疫抗体监测与分析

周 伟 徐小艳 徐正军 王相子 开 妍 陈昌海

（溧水区农业局，江苏溧水 211200）

为评估我省使用重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）以来的鸡群免疫效果，笔者对2016年全省春防、秋防、定点监测及日常监测所采集的规模养鸡场及散养户样品进行了免疫抗体检测与分析。检测结果表明，江苏省H5亚型高致病性禽流感Re-6株平均免疫抗体合格率为96.39%；Re-7株平均免疫抗体合格率为95.75%；Re-8株平均免疫抗体合格率为95.56%，均超过国家和我省规定的免疫要求。大部分地区的免疫抗体合格率呈现较高的一致性。在种鸡场、商品代饲养场（户）、散养户中，种鸡场的免疫效果最好。

高致病性禽流感；血凝抑制试验；免疫抗体合格率

禽流感是由A型流感病毒引起的以呼吸系统症状为主要表现的禽类传染性疾病综合征。根据禽流感病毒致病性的不同，可以将禽流感分为高致病性、低致病性、无致病性禽流感，H5亚型毒株所引起的疾病称为高致病性禽流感（High Pathogenic Avian Influenza，HPAI），它不仅导致禽类发病死亡，而且可以感染人，使人发病死亡，因而是一种需要严格控制的人畜共患病[1-2]。

当前我国H5亚型AIV主要流行谱系为第2.3.4.4分支、第2.3.2.1c分支和第7.2分支，其对应的疫苗分别为Re-8、Re-6和Re-7。其中，第2.3.4.4分支又可细分为第2.3.4.4a、2.3.4.4b、2.3.4.4c、2.3.4.4d四个小分支，Re-8疫苗株属于第2.3.4.4d分支[3]。H5亚型高致病性禽流感病毒具有高度变异性，为提高疫苗与现流行毒株的匹配性，2014年底，农业部批准了针对该分支病毒的Re-8疫苗，我省2016年将对鸡群使用的重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）替换为重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）。为评估我省使用该疫苗后的鸡群免疫效果，更好地开展禽流感防控工作，笔者对2016年更换疫苗后全省春防、秋防、定点监测及日常监测所采集的规模养鸡场及散养户样品进行了免疫抗体检测与分析[4]。

1 材料与方法

1.1 材料

样品来源：2016年江苏省动物疫病预防控制中心在开展重大动物疫病春防、秋防、定点监测、日常监测等工作中，随机抽检的鸡血清样品942份，所检鸡群均免疫了重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株），免疫密度达100%。样品来自全省13个市25个县（市、区）49个乡镇的174个养鸡场（户）。

检测试剂：禽流感病毒H5亚型（Re-6株）血凝抑制试验抗原、阳性血清、阴性血清；禽流感病毒H5亚型（Re-7株）血凝抑制试验抗原、阳性血清、阴性血清；禽流感病毒H5亚型（Re-8株）血凝抑制试验抗原、阳性血清、阴性血清，均由哈尔滨维科生物技术开发公司提供，自配1%鸡红细胞。

1.2 方法

参照《高致病性禽流感诊断技术》GB/T 18936-2003中规定的血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验技术，首先采用血凝试验（HA）对禽流感病毒H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株进行血凝价测定，再通过血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原，最后采用血凝抑制试验（HI）检测样品中禽流感病毒H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗体。

1.3 结果判定

以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度，即血清效价。鸡免疫21d后，抗体效价≥24判为免疫合格；抽检鸡群免疫抗体合格率≥80%判为合格。

2 检测结果

2.1 各地区的疫苗免疫抗体合格率

对13个市的试验结果进行比较后可见：13个市的高致病性禽流感免疫抗体合格率均高于农业部规定的70%和我省规定的80%的标准。其中3市、4市、9市、10市等4个市H5亚型高致病性禽流感Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗体合格率均达到100%。详见表1。

表1 各市免疫抗体检测结果

2.2 不同类别鸡群的免疫抗体合格率

2016年，共检测各类养殖场户174个。检测种鸡场3个，Re-6株检测样品45份，合格44份，合格率97.78%；Re-7株检测样品45份，合格45份，合格率100%；Re-8株检测样品45份，合格45份，合格率100%。检测商品代饲养场（户）25个，Re-6株检测样品354份，合格340份，合格率96.05%；Re-7株检测样品356份，合格345份，合格率96.91%；Re-8株检测样品349份，合格333份，合格率95.42%。检测散养户146个，Re-6株检测样品542份，合格523份，合格率96.49%；Re-7株检测样品541份，合格512份，合格率94.64%；Re-8株检测样品530份，合格505份，合格率95.28%。详见表2。

2.3 不同时间段的免疫抗体合格率

2016年上半年全省H5亚型高致病性禽流感Re-6株共检测样品121份，合格117份，合格率为96.69%，Re-7株共检测样品121份，合格113份，合格率93.39%，Re-8株共检测样品119份，合格107份，合格率89.92%；2016年下半年H5亚型高致病性禽流感Re-6株共检测样品820份，合格790份，合格率96.34%，Re-7株共检测样品821份，合格789份，合格率96.10%，Re-8株共检测样品805份，合格776份，合格率96.40%。详见表3。

共检测鸡血清样品2807份，合格2692份，合格率95.90%。其中H5亚型高致病性禽流感Re-6株共检测样品941份，合格907份，合格率96.39%，Re-7株共检测样品942份，合格902份，合格率95.75%，Re-8株共检测样品924份，合格883份，合格率95.56%。

3 讨论

从2016年江苏省13个市的H5亚型高致病性禽流感免疫抗体检测结果看，Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗体合格率均超过国家标准（70%）和我省标准（80%），且免疫抗体整体水平较高，说明我省自推广使用重组禽流感病毒H5亚型三价灭活苗（Re-6株+ Re-7株+ Re-8株）以来，H5亚型高致病性禽流感整体免疫情况良好。

具体对比各市检测结果，13个市H5亚型Re-6株平均免疫抗体合格率为96.39%，其中最高的市为100.00%，最低的市为85.25%； Re-7株平均免疫抗体合格率为95.75%，其中最高的市为100.00%，最低的市为87.10%； Re-8株平均免疫抗体合格率为95.56%，其中最高的市为100.00%，最低的市为85.00%。13个市H5亚型高致病性禽流感Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗体合格率离散程度较小，合格率低于90%的只有1个市，说明我省绝大多数地区均按照合理的免疫程序、正确的接种方法开展免疫，免疫效果良好。从图1可见，绝大多数市Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗体合格率较整齐，但1市、7市Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗体合格率差异较大，导致这一结果的原因可能是这些地区的某些鸡群由于品种、健康状况等因素，对同一疫苗不同疫苗株的免疫反应强弱不一致，或是受到之前接种的禽流感二价苗（Re-6株+ Re-7株）干扰，影响对三价苗（Re-6株+ Re-7株+ Re-8株）的反应，对于这一类场点，应当加强养殖管理，加大日常监测，及时补免，降低疫情隐患。

表2 不同类别鸡群的免疫抗体检测结果

表3 不同时间段免疫抗体检测结果

图1 13个市重组禽流感三价苗免疫抗体合格率分布

2016年共检测174个养鸡场（户）的样品，其中种鸡场3个，Re-6株平均免疫抗体合格率为97.78%，Re-7株平均免疫抗体合格率为100%，Re-8株平均免疫抗体合格率为100%，3个种鸡场各株型免疫抗体合格率均高于80%；商品代饲养场（户）25个，Re-6株平均免疫抗体合格率为96.05%，平均免疫抗体合格率高于80%的场有23个，占92%，Re-7株平均免疫抗体合格率为96.91%，平均免疫抗体合格率高于80%的场有24个，占96%，Re-8株平均免疫抗体合格率为95.42%，平均免疫抗体合格率高于80%的场有22个，占88%；散养户146个，Re-6株平均免疫抗体合格率为96.49%，平均免疫抗体合格率高于80%的场有136个，占93.15%，Re-7株平均免疫抗体合格率为94.64%，平均免疫抗体合格率高于80%的场有128个，占87.67%，Re-8株平均免疫抗体合格率为95.28%，平均免疫抗体合格率高于80%的场有132个，占90.41%。从图2可见：1.各类型场点鸡群Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗体合格率均处于高位，种鸡场、存栏量大于1万只的商品代养殖场（户）的H5亚型禽流感疫苗整体免疫效果较存栏量小于1万只的商品代饲养场（户）、散养户好。2.各类型场点群体合格率（免疫抗体合格率≥80%的场点数/监测场点数×100%）均处于高位，种鸡场、存栏量大于1万只的商品代养殖场（户）群体合格率较存栏量小于1万只的商品代养殖场（户）、散养户高。分析原因，可能有以下几方面：（1）种鸡场和大、中型商品代养殖场（户）对疫病防控的意识较强，多按合理程序免疫；而部分小型商品代养殖场（户）、散养户缺乏对鸡群日龄、健康状况、免疫档案的管理，免疫程序不规范或通过春、秋季开展的集中免疫行动进行免疫，造成漏免或补免不及时。（2）种鸡场和大、中型商品代养殖场（户）养殖环境优、养殖管理严格、动物营养好、健康少病，免疫应激小，抗体产生早且维持时间长；而部分小型商品代养殖场（户）、散养户养殖环境、养殖管理、动物营养、健康状况相对较差，免疫应激大，影响免疫效果。（3）种鸡场和大、中型商品代养殖场（户）疫苗保存和接种方法得当，免疫效果好；而部分小型商品代养殖场（户）、散养户疫苗保存不符合要求或在注射疫苗时稀释方法不当、稀释后未及时使用等导致免疫失败或效果不好。综上所述，规范的养殖管理、规范的免疫程序、及时的免疫监测、妥善的疫苗保存、正确的接种方法都可以提高免疫效果，多方并举对有效控制高致病性禽流感更为有利。

图2 不同类型场点抗体合格率、群体合格率分布图

2016年上半年，H5亚型Re-6株免疫抗体合格率为96.09%，Re-7株免疫抗体合格率为93.39%，Re-8株免疫抗体合格率为89.92%；2016年下半年，H5亚型Re-6株免疫抗体合格率为96.34%，Re-7株免疫抗体合格率为96.10%，Re-8株免疫抗体合格率为96.40%。比较发现，重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）的持续使用对抗体水平产生了以下影响：1.三种毒株免疫抗体合格率均有所提高，特别是Re-8株，合格率提高了6.48个百分点。2.三种毒株免疫抗体合格率之间的差异显著缩小。表明重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）替换并持续使用后，H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）对Re-6株、Re-7株平均免疫抗体合格率的影响逐渐减小，Re-8株免疫抗体水平不断提高，推动我省高致病性禽流感免疫抗体水平持续向好。

[1] 兰德增.高致病性禽流感[J].生命科学，2005，17（1）：60-63.

[2] 徐小艳.重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫抗体监测与分析[J].畜牧与兽医，2011，43（6）：50-52.

[3] 蒋文明.H5亚型高致病性禽流感病毒抗原性变异分析[J].中国动物检疫，2016，33（9）：27-32.

[4] 王相子.重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）免疫抗体监测分析[J].兽医导刊，2017，264（1）：198-199.