儿童斑秃患者外周血Th17及IL-17水平研究

苏湘川，石青青，任小丽，胡雅玉，陈祥恩，陈健

（浙江省台州市立医院，台州318000）

·论著·

儿童斑秃患者外周血Th17及IL-17水平研究

苏湘川，石青青，任小丽，胡雅玉，陈祥恩，陈健

（浙江省台州市立医院，台州318000）

目的研究儿童斑秃患者外周血Th17细胞及白细胞介素（IL）-17的变化，探讨其在儿童斑秃患者发病中的作用。方法采用流式细胞术检测儿童斑秃患者外周血Th17细胞的比例，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定培养上清液中IL-17表达水平，以健康儿童作为对照。结果儿童斑秃患者外周血与健康儿童比较，外周血Th17细胞比例、IL-17水平增高（P<0.05）；重度儿童斑秃患者与轻度儿童斑秃患者比较，外周血Th17细胞比例及IL-17水平增高（P<0.05）；稳定期儿童斑秃患者与活动期儿童斑秃患者外周血比较，外周血Th17细胞比例、IL-17水平增高（P<0.05）。结论Th17细胞及IL-17可能在儿童斑秃的发生及发展过程中发挥重要作用。

斑秃；Th17细胞；白细胞介素-17

斑秃是一种快速发生的圆形或椭圆形片状脱发，受累范围小至1片头皮，大至整个头颅的全秃，甚至全身性脱发，称作普秃。斑秃可发生于任何年龄，尤其好发于青少年，一般轻者愈合较好，50%病例有复发，特别是初发于儿童者复发较多，全秃发生于儿童者很难恢复[1]。目前，对于斑秃的病因及发病机制尚未探究清楚，多认为是遗传因素、机体免疫系统平衡失调为主，同时掺杂环境因素、精神压力等因素共同作用所致[2]。本文研究儿童斑秃患者外周血Th17细胞及白细胞介素-17（IL-17）的变化，并分析其意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料2015年1月—2016年8月就诊于

台州市立医院皮肤科儿童轻型斑秃患者40例、重型斑秃20例、活动期与静止期斑秃患者各30例。患者年龄1～14岁，均符合斑秃的诊断标准。排除标准：①有其他系统疾病、精神疾患等病史者；②有其他炎症性、肿瘤性或自身免疫性等皮肤病；③1个月内接受过任何口服药物（糖皮质激素类、复方甘草酸苷等）、注射或照射等治疗；④1周内外用过糖皮质激素、米诺地尔等。健康体检儿童30例为对照组，各组年龄、性别差异无统计学意义。斑秃的分类与分期：按严重程度将斑秃分为轻型斑秃（头皮脱发面积＜50%）和重型斑秃（头部脱发面积≥50%及全秃和普秃）。按病情活动情况分为活动期斑秃及稳定期斑秃，活动期斑秃为脱发区不断扩大或有新的脱发区出现，拔发试验阳性，非活动期斑秃为脱发区面积未扩大及无新的脱发区出现，拔发试验阴性[3]。

1.2方法

1.2.1 试剂和仪器PE-抗IL-17流式抗体，PEIL-6流式抗体，PE-IgG1同型对照抗体均为美国eBioscience公司产品；佛波酯、离子霉素、植物血凝素、固定剂和破膜剂为美国Sigma公司；美能星、流式细胞仪为BD公司；RPMI1640培养基为Gibco产品。

1.2.2 外周血Th17细胞的检测[4]取100 μL者全血，用100 μL RPMI1640培养基等量稀释，加入1 μL/mL佛波酯工作液4 μL，37℃，5%CO2培养箱培养4～6 h。加入10 μL PECy5抗CD3和10 μL FITC抗CD8单抗，室温、避光、温育15 min。分为2管，每管加入上述已染色的全血100 μL编号为a和b，分别加入固定液100 μL，室温，避光温育15 min，再各自分别加入PBS 3 mL，1 200转/min离心5 min，除去上清液。各自再加入破膜剂100 μL，同时在a管中加入10 μL PE-IgG1同型对照抗体，b管中加入10 μL PE-IgG1抗IL-17流式抗体，室温，避光温育15 min，每管中加入PBS 3 mL，1 200转/min离心5 min，除去上清液，加入0.5 mL PBS重悬细胞，上机检测。

1.2.3 血清中IL-17的检测采清晨空腹静脉血5 mL，离心、取血清，采用ELISA法检测患者血清及健康组血清中IL-17的水平，操作严格按试剂说明书进行。ELISA试剂盒为晶美生物工程有限公司提供。

1.3 统计学处理采用SPSS 16.0软件进行分析，计量资料以表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 轻度儿童斑秃患者外周血与健康对照组比较外周血Th17细胞比例、IL-17水平增高（P=0.025<0.05）；重度儿童斑秃患者外周血与健康对照组比较，外周血Th17细胞比例、IL-17水平增高（P=0.011<0.05）；重度儿童斑秃患者与轻度儿童斑秃患者比较，外周血Th17细胞比例及IL-17水平增高（P=0.018<0.05）。见表1。

2.2 稳定期儿童斑秃患者外周血与健康对照组比较外周血Th17细胞比例、IL-17水平增高（P=0.029<0.05）；活动期儿童斑秃患者外周血与健康对照组比较，外周血Th17细胞比例、IL-17水平增高（P=0.015<0.05）；活动期儿童斑秃患者与稳定期儿童斑秃患者外周血比较，外周血Th17细胞比例、IL-17水平增高（P=0.023<0.05）。见表2。

表1 轻中度儿童斑秃外周血Th17细胞比例及IL-17浓度比较

表2 活动期与稳定期儿童斑秃外周血Th17细胞比例及IL-17浓度比较

3 讨论

目前国内外多数学者认为斑秃是一种T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病，近年对斑秃的研究也主要集中在细胞免疫与斑秃发病的关系方面。已有研究发现斑秃皮损毛囊周围浸润的T淋巴细胞及细胞因子在斑秃发病中起着重要的作用，主要由T淋巴细胞中Th1型细胞因子来调节，Th1/Th2细胞功能失衡和斑秃的发生有关[5-6]。

Th17细胞是一种近年新发现的CD4+T细胞亚群，是一种新型的CD4+效应T细胞，在炎症性疾病及自身免疫病的发病机制中发挥重要的免疫调节作用。Th17细胞是独立于Th1/Th2型细胞的一种新型T细胞，它不同于传统的Th1、Th2细胞，因分泌特征性介质IL-17诱导免疫炎症反应而得名，并且在自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等疾病的发生和发展中发挥关键作用。IL-17是Th17细胞发挥其生物学作用的关键性效应因子，它是一种强大的前炎症细胞因子。

国外学者研究发现在斑秃患者的头皮中，特别是在毛囊周围，有Th17细胞浸润[7]，IL-17A和肿瘤坏死因子α水平较对照组升高[8]。国内柳小婧等[9]研究发现斑秃患者外周血Thl7细胞比例较健康对照显著升高，病程≤6个月患者Thl7细胞水平显著高于病程＞6个月患者，活动期高于非活动期，斑秃复发患者Th17细胞比例高于初发患者，提示复发患者的自身免疫状态更加值得注意。刘官智等[10]研究发现斑秃活动期组外周血清IL-17水平明显高于稳定期组和正常对照组，斑秃稳定期组血清IL-17水平亦明显高于正常对照组，初步表明Th17细胞因子可能参与了斑秃的发病。

笔者研究发现，儿童斑秃患者外周血Th17细胞比例、IL-17水平与正常对照组比较，显著增高，差异有统计学意义；重度斑秃患者与轻度斑秃患者比较，活动期斑秃患者与稳定期斑秃患者比较，均显著增高，差异有统计学意义。进一步证实儿童斑秃患者的发生、病情的活动性及严重程度与Th17细胞比例及IL-17水平有一定的关系。

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Th17 cells and IL-17 in Percipheral Blood of Patients with Childhood Alopecia Areata

Su Xiangchuan,Shi Qingqing,Ren Xiaoli,Hu Yayu,Chen Xiang'en,Chen Jian
Taizhou Municipal Hospital in Zhejiang Province,Taizhou 318000,China

ObjectiveIn order to investigate the variations of Th17 and IL-17 in peripheral blood of the patients with childhood alopecia areata and explore their significances.MethodsThe percentages of Th17 cells in peripheral blood of patients with childhood alopecia areata were detected by flow cytometry,the levels of IL-17 were detected by ELISA.Meanwhile,healthy chilidren were taken as controls.ResultsThe percentags of Th17 cells and the levels of IL-17 were increased in patients with childhood alopecia areata compared with those of healthy controls（P<0.05）.The percentages of Th17 cells and the levels of IL-17 were higher in the severe alopecia areata than the mild alopecia areata of childhood（P<0.05）.The percentages of Th17 cells and the levels of IL-17 were higher in the active phase group than those in the stable phase group（P<0.05）.ConclusionTh17 cell and IL-17 may play an important role in the onset,development of patients with childhood alopecia areata.

Alopecia areata;T Helper Type 17 Cells;Interleukin-17

R758.71

A

1672－0709（2017）04-0298－03

2016-12-06）