疏肝活血方对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响

陈维+潘博希+冯妮+尹瑞

摘要：目的 研究疏肝活血方对血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆的影响。方法 采用改进的2VO法制备VD大鼠模型。雄性SD大鼠90只，随机分为模型组、假手术组、多奈哌齐组、疏肝活血方高、中、低剂量组，每组15只。于造模3 d后开始灌胃给药，每天1次，连续4周。给药后4周行水迷宫实验进行行为学测试。结果 疏肝活血方中剂量组大鼠学习记忆成绩明显高于模型组大鼠，差异有统计学意义（P<005）。结论 疏肝活血方能提高血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。

关键词：疏肝活血方；血管性痴呆大鼠；学习记忆；水迷宫

中图分类号：R2855 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2017）10-0079-03

Effect of Shugan Huoxue Prescription on Learning and Memory in Vascular Dementia Rats

CHEN Wei1， PAN Bo-xi2， FENG Ni1， YIN Rui-wen2

（1 School of Clinical Medicine， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， China；

2 Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650021， China）

【Abstract】Objective： To study the effect of Shugan Huoxue Prescription on learning and memory in vascular dementia （VD） rats Methods： VD rat model was prepared by modified 2VO method 90 male SD rats were randomly divided into a model group， a sham operation group， a donepezil group and Shugan Huoxue Decoction groups of high， medium and low dose， 15 rats each group Three days after modeling， the rats were given oral administration， once a day for 4 weeks Four weeks after administration， water maze test was conducted for behavioral testing Results： The learning and memory scores of Shugan Huoxue Decoction groups were significantly higher than those of the model group and the difference was statistically significant （P<005） Conclusion： Shugan Huoxue Prescription can improve the learning and memory ability of vascular dementia rats

【Key words】Shugan Huoxue Prescription， vascular dementia rat， learning and memory， water maze

血管性癡呆（（vascular dementia，VD）是因脑血管疾病所致的智能及认知功能障碍的临床综合征。其发病率在所有痴呆类型中居第二位，仅次于阿尔茨海默（Alzheimer disease，AD）。在我国及日本等亚洲国家，由于脑血管病（主要是缺血性脑血管病）的高发，VD发病率较欧美其他国家为高。据流行病学调查，在欧美，VD仅占老年性痴呆的30%，而在我国其比例高达60%[1]。我国的一项流行病学调查显示，我国65岁及以上人群中VD的患病率为13%[2]，随着世界人口老龄化的发展及卒中治疗死亡率的降低，VD发病率有逐年上升趋势。患者的学习，记忆能力受损，伴随情感、性格的改变，严重影响其日常生活，给家庭和社会带来巨大的经济和精神负担。世界卫生组织（WHO）已将VD列为21世纪的重点研究项目。有资料报道，VD比阿尔茨海默病（AD）更有预防和治疗价值[3]。因此对血管性痴呆的脑损伤机制及其防治的研究，是我国以及世界医学领域联合公关、重点研究的项目。笔者在临床实践及对中医理论探讨中，认识到血管性痴呆与肝郁血瘀有密切的关系[4]，认为肝郁血瘀贯穿了VD的整个病程，是VD的核心病机。为了探讨疏肝活血方治疗VD的疗效，本研究建立大鼠VD模型，利用水迷宫实验观察疏肝活血方对VD大鼠学习记忆的影响。

1 材料和方法

11 实验动物分组及造模 雄性SD大鼠90只，体重为（250±50）g，由北京维通利华公司提供，许可证号：SCXK（京）2014-0003和SCXK（京）2014-0010。购回后适应性饲养1周左右。随机分为模型组、假手术组、多奈哌齐组、疏肝活血方高、中、低剂量组，每组15只。采用改进的2VO法制备VD大鼠模型，具体手术方法如下：大鼠手术前12 h禁食，4 h禁水，用10%水合氯醛（35 mL/kg）腹腔注射麻醉，保证其手术期间有自主呼吸，将其仰卧固定于手术台上，颈部去毛，碘伏常规消毒，颈正中切口，钝性分离颈部肌肉组织，分离出一侧颈总动脉，避免损伤颈部交感神经和迷走神经，用l号手术线分别从近端和远端双重结扎颈总动脉，以确保阻断颈总动脉血流。该侧结扎后间隔1周，行第2次手术结扎另一侧颈总动脉。假手术组动物手术过程同模型制备组，但不结扎颈总动脉。注意保温，术后伤口涂以复方新诺明粉，送至有通风和空调设备的动物房饲养。每次手术后肌注青霉素，每只每日20万U，连续3 d，以预防感染，对出现感染者延长用药至1周。endprint

12 实验药品及动物给药 复方疏肝活血方，由柴胡15 g，白芍20 g，郁金15 g，川芎10 g，丹参30 g，当归10 g，三七10 g，炙远志10 g，石菖蒲10 g组成，所有药材购于云南省中医医院。盐酸多奈哌齐片（贵州圣济堂制药有限公司，规格为5 mg×12片，批号20130905）。于造模3d后开始用灌胃针灌胃给药，每天1次，连续4周。实验每日给药量按人与实验动物的体表面积折算，其中疏肝活血方以成人每日剂量的10倍、15倍和20倍为低、中、高剂量，即中药低、中、高剂量组分别灌胃给予疏肝活血方26 g/（kg·d）、39 g/（kg·d）、52 g/（kg·d）；多奈哌齐组给予多奈哌齐2 mg/（kg·d）；模型组和假手术组每次给予等量的生理盐水灌胃，灌胃时温服。

13 各组大鼠行为学检测（Morris水迷宫） Morris水迷宫：采用不锈钢的圆形水池，直径130 cm，深50 cm，水深30 cm，水温（26±2）℃，人为在池壁上取四个等距离点，分水池为四个象限，任选一象限在其中央放置平台。平台无色透明，直径6 cm，高28 cm，平台没于水面下1 cm，在水池壁内和池外分别做明显固定标记参照物。水温控制在23-26℃之间。于造模后3天，及给药后4周行水迷宫实验，包括4天的定位航行试验（place navigation）和最后一天的空间探索试验（escape latency）。实验过程中要在每只大鼠下水一次后清理水中的粪便，每两天更换一次迷宫中的水，保持实验过程中水的清洁，避免给动物一些其他的提示和干扰。实验开始前一天，将实验动物分别单独放入无平台的水池中自由游泳2 min，以使其熟悉环境。定位航行试验：试验历时5 d，每日4次。均在上午进行，操作者将大鼠面向池壁随机从一象限起始点放入水中，记录120 s内大鼠找到平台的时间（逃避潜伏期），如果120 s内找不到平台（逃避潜伏期记为120 s），则由操作者将其引上平台。大鼠站立于平台上10 s后，将大鼠从平台拿上下来休息30 s，再按顺时针方向由下一象限起始点入水进行试验。将4次所得值平均作为当天的逃避潜伏期。空间探索试验：在行为学测试第5 d下午，定位航行试验结束后，撤除平台，然后从原始平台对侧象限入水点将大鼠放入水中，测其60 s内经过原始平台位置的次数。

14 统计学处理 应用SPSS 170软件进行系统分析。观察指标采用均数±标准差（x±s）表示，单因素方差分析（one way ANOVA）进行组间比较，有显著差异者进行两两比较。错误次数比较应用秩和检验。以P<005为有统计学意义。

2 结果

21 定位航行实验 给药4周以后，行定位航行实验，显示：与模型组比较，各组大鼠的逃避潜伏期均明显缩短，差异有统计学意义（P<005）；并且除假手术组以外，以多奈哌齐组和疏肝活血方中剂量组缩短最为明显，差异有统计学意义（P<005）；而多奈哌齐组和疏肝活血方中剂量组比较，差异无统计学意义（P>005）。见表1。

22 空间探索试验 治疗4周以后，行空间探索试验，比较各组大鼠经过原始平台位置的次数显示：与模型组比较，各组大鼠经过原始平台位置的次数均多于模型组，差异有统计学意义（P<005）；并且除假手术组以外，以多奈哌齐组和疏肝活血方中剂量组经过原始平台位置的次数最多，差异有统计学意义（P<005）；而多奈哌齐组和疏肝活血方中剂量组比较，差异无统计学意义（P>005）。见表2。

3 讨论

血管性痴呆是老年期痴呆的主要类型之一，仅次于阿尔茨海默病。随着医学的发展，现代医学对VD的预防与治疗有较大进展，但因其发病机制复杂，存在多种学说，国内外学者正在试图从治疗AD和脑血管疾病的药物中筛选出对VD有疗效的药物。从近年来的临床报道看，中医药治疗VD可改善症状及缓解病程进展，近期疗效和与同类西药接近或优于西药，远期疗效更好[5]。相关的实验研究也显示，中医中药能从多环节、多靶点改善血管性痴呆动物模型的学习记忆能力[6]。

中医学认为VD属“呆病”、“健忘”等范畴。目前大多数学者认为VD的中医病因病机与老年痴呆（AD）的中医病因病机相同，然而笔者在临床中发现VD与肝郁血瘀的关系密切，认为其始于肝气郁结，终致瘀血阻窍、脑失所养，从而出现健忘、痴呆等症状[4]。

本研究采用改进的2VO法制备VD大鼠模型，利用水迷宫实验观察疏肝活血方对VD大鼠学习记忆的影响，结果显示疏肝活血方中剂量组与模型组比较，大鼠的逃避潜伏期均明显缩短，经过原始平台位置的次数明显增多，差异有统计学意义（P<005）；而疏肝活血方中剂量组与多奈哌齐组比较，大鼠的逃避潜伏期与经过原始平台位置的次数均无明显差异（P>005）。从而证明疏肝活血方能提高血管性痴呆大鼠的学习记忆能力，且疗效和多奈哌齐相当。从肝郁血瘀论治血管性痴呆切实可行，在今后的研究中，需进一步揭示其作用机制。

参考文献：

[1]孟培燕电针对血管性痴呆大鼠学习记忆相关信号通路影响的实验研究[D].湖北中医学院学位论文，2007

[2]张振馨，Zahner GE，Roman GC，等中国北京、西安、上海和成都地区痴呆亚型患病率的研究[J].中国现代神经疾病杂志，2005，5（3）：156-157

[3]Duren E，hanon 0Vascular risk factorscognitive decline，and dementia[J].Vasc Health Risk Manag，2008，4（2）：363-81

[4]陈维，刘福友，呼興华，等从肝郁血瘀论治血管性痴呆[J].辽宁中医杂志，2010，37（8）：1462-1463

[5]窦金金，谢宁，吴颂，等中医药治疗血管性痴呆的研究进展[J].中医药信息，2011，4（28）：140-141

[6]张洁，吴亚芬，曹志芳，等血管性痴呆中医药实验研究概况[J].江西中医学院学报，2011，3（23）：68-71endprint