五日生化需氧量测定中稀释水的保存时间探讨

胡彩霞

摘要：测定五日生化需氧量（BOD5）所需的接种稀释水因含大量微生物，保存时间短，一般都是现用现配，笔者采用将稀释水和接种液分开存放，使用时再分别加入到稀释容器中，对样品进行稀释，这样避免了接种液和稀释水的提前混合，可以延长稀释水的有效期至第4天。

关键词：五日生化需氧量；稀释水；保存时间

1.前言

接种稀释水是BOD5测定的一个重要影响因素，国标中普遍将一定量接种液加入到稀释水中混合均匀，再用来稀释样品。因接种液含大量分解有机物质的微生物，稀释水又含微生物所需的营养盐和溶解氧，两者的混合为微生物的繁殖提供了良好条件，若存放时间过长，会导致空白偏大，影响结果的准确性，所以接种稀释水一般都是现用现配。笔者采用将稀释水与接种液分开存放，使用之前再按需加入到稀释容器里混合均匀，这样延长了稀释水的保存时间，稀释水配制当天如有大量剩余，仍可放置，以供后面使用。

2.实验

2.1主要仪器与试剂

哈希HQ40d溶氧仪，LRH-250A生化培养箱，溶解氧瓶：250-300ml，稀释容器：量筒500-1000ml，虹吸管，曝气装置：增氧泵

盐溶液：硫酸镁溶液（22.5g七水合硫酸镁溶于水，定容至1000ml），氯化钙溶液（27.6g无水氯化钙溶于水，定容至1000ml），氯化铁溶液（0.25g六水合氯化铁溶于水，定容至1000ml，），磷酸盐缓冲溶液（8.5g磷酸二氢钾、21.8g磷酸氫二钾、33.4g七水合磷酸氢二钠、1.7g氯化铵溶于水，定容至1000ml）

稀释水：在5-20L的玻璃容器中加入一定量蒸馏水，控制水温在（20±1）℃，用增氧泵曝气至少1小时，使溶解氧达到饱和，使用前每升水中加入4种盐溶液各1ml，混合均匀。此稀释水不接种的空白值应小于0.50mg/L，接种后的空白应小于1.50mg/L。

接种液：取100g花园等处植物生长土壤，加1L水，混合均匀并静置10分钟，取上清液供用，使用时每升稀释水中加10ml此接种液。

质控样品：葡萄糖-谷氨酸标准溶液，取130℃干燥1小时的葡萄糖和谷氨酸各150mg，溶于水，定容至1000ml，此溶液的BOD5值为180-230mg/L。

2.2步骤

取质控样品Vml于500ml量筒中，加入接种液5ml，用虹吸管沿筒壁将稀释水慢慢加入量筒中，至500ml刻度，用带胶板的玻璃棒小心上下搅拌均匀，操作过程应尽量避免气泡的产生。将此试样装入溶解氧瓶中，用溶氧仪测定培养前的溶解氧浓度为D1，塞紧瓶塞并留有一定水封，放入生化培养箱中于（20±1）℃培养5d±4h，测定培养后的溶解氧浓度为D2。另取4个溶解氧瓶，2个加入接种液，2个不加接种液，用稀释水装满，当作空白，分别测定其在培养前后的溶解氧浓度为D3、D4。

剩余的稀释水和接种液存放在（20±1）℃的培养箱，供第二天使用。连续7天采用相同步骤对同一稀释水进行空白试验和质控样品的BOD5测试，按以下公式计算BOD5的值。

BOD5（mg/L）=[（D1-D2）-（D3-D4）*f1]/f2

式中：f1=（500-V）/500，f2=V/500

3.结果与讨论

3.1测试结果见表1。

3.2从表1可以看出，稀释水配置的第1-4天，不接种的空白值均小于0.50mg/L，接种后的空白值均小于1.50mg/L，质控样的BOD5值均在180-230mg/L的范围内，满足一般样品的测试要求。因稀释水不是由无菌水配置，其中含有一定量微生物，由于微生物的繁殖作用，稀释水的空白随着天数的增加而逐渐增大，当稀释水存放到第4天以上，不接种的空白值大于0.50mg/L，接种后的空白增加明显，质控明显偏低，误差增大，不能满足测试要求，应弃去。

结论：通过连续7天测试同一稀释水的质量，得出：采用先将稀释水和接种液分开存放，使用前再分别按需加入到稀释容器里对样品进行稀释的方法，避免了接种液和稀释水的提前混合，可以延长了稀释水的保存时间至第4天，这样有效地减少了每次测试BOD5前现配稀释水的准备工作，节约了时间和成本。endprint