不同浓度D+半乳糖致大鼠卵巢早衰的实验研究

包秀芳，孙 萍

（1.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学临床医学院，内蒙古 通辽 028000）

不同浓度D+半乳糖致大鼠卵巢早衰的实验研究

包秀芳1.2，孙 萍1.2

（1.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学临床医学院，内蒙古 通辽 028000）

目的探讨不同浓度D＋半乳糖致大鼠卵巢早衰的结果。方法选取9～12周龄SPF级大鼠58只，并按照随机平均的原则，将其分为实验组与对照组。实验组与对照组各29只大鼠，所有大鼠均予以35%半乳糖食物丸以及20%标准食物丸。在饲养的第80d，对大鼠体内半乳糖、E2、FSH、清蛋白水平以及总蛋白进行血检测，并对大鼠行促排卵检查对大鼠卵巢功能实施检查。利用光镜对大鼠卵巢以及肝组织形态学变化进行观察。结果经过比较发现，实验组E2、清蛋白水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论通过在大鼠中利用35%半乳糖产生的代谢作用，发现建立卵巢早衰动物模型可行性较高，可为卵巢早衰患者生育治疗问题提供一定依据。

不同浓度；D＋半乳糖；大鼠；卵巢早衰

卵巢早衰指的是卵巢功能提前衰退，主要在40岁之前妇女所出现的非生理性停经，常伴有继发或原发不育、雌二醇下降、生殖器萎缩等等。该种疾病在人群中的发病率为2%左右，在闭经患者中占据8%左右。就现今来看，对POF患者实施人体在体研究，或直接获取人体卵巢用于研究的难度较大，因而，在临床研究时，许多学者都寻找可靠性较高的方式进行，深入研究卵巢早衰的情况[1]。建立卵巢早衰的动物模型就是其中较为可行的一种研究思路。为了验证这种研究方式的有效性，本文选取9～12周龄SPF级大鼠58只，并按照随机平均的原则，将其分为实验组与对照组。实验组与对照组各29只大鼠，分别予以35%半乳糖食物丸以及20%标准食物丸，发现在大鼠中利用35%半乳糖产生的代谢作用，提示建立卵巢早衰动物模型可行性较高，可为卵巢早衰患者生育治疗问题提供一定依据。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选取9～12周龄SPF级大鼠58只，并按照随机平均的原则，将其分为实验组与对照组。实验组与对照组各29只大鼠，雌性，体重200～400 g。保持实验大鼠每日自由进食进水，光照时间为12 h。

1.2 模型建立方法

实验组大鼠喂半乳糖食物丸，其中碳水化合物64%，蛋白质含量28%，脂肪6%，复合矿物质8%，复合维生素1%，半乳糖27%[2]。对照组大鼠喂正常食物丸，碳水化合物含量65%，蛋白质含量19%，脂肪7%，复合矿物质7%，复合维生素2%。所有大鼠饲养时间为80d，利用阴道脱落细胞涂片对大鼠动情周期进行测定。

1.3 血清性激素、半乳糖水平以及肝功能测定

采用阴道脱落细胞涂片测定大鼠动情期，并对大鼠体重进行称重，眼眦静脉缺血，离心血液标本，将取得的血清保存在-20℃条件下保存。利用放免法对大鼠血清E2、FSH水平进行测定，利用半乳糖氧化酶法对大鼠血清半乳糖水平进行测定，利用双缩脲法以及溴甲酚绿对血清中总蛋白以及清蛋白浓度进行测定。

1.4 肝组织及卵巢形态学观察

利用阴道脱落细胞涂片测定大鼠动情期，断颈处死大鼠，去除大鼠肝脏及侧卵巢，并称重，利用10%甲醛对其固定后，作光镜切片。

1.5 统计学方法

采用SPSS18.0统计学软件进行处理，计数资料采用x2检验，计量资料以表示，采用t 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 肝组织光镜检查

实验组大鼠经肝细胞病理切片仅发现出现少量颗粒样改变，对照组大鼠检验发现出现肝细胞红染，并出现颗粒大小一致的情况。

2.2 大鼠血清E2、FSH、半乳糖、总蛋白、清蛋白水平比较

经过比较发现，实验组E2、清蛋白水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。但实验组FSH、半乳糖以及总蛋白水平与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 两组大鼠血清E2、FSH、半乳糖、总蛋白、清蛋白水平比较

3 讨 论

在本次实验中，通过给大鼠喂养浓度不同的半乳糖食物丸，在饲养80 d后，对大鼠血清中的半乳糖含量进行检测。喂养浓度存在差异的半乳糖食物丸，饲养80 d后，检测大鼠血清中含有的半乳糖。将其与正常组别比较，发现大鼠体内半乳糖含量明显增加，导致大鼠代谢物出现蓄积，进而导致机体代谢出现较为严重的紊乱，表现在大鼠肝功能受损，清蛋白含量减少。尤其半乳糖含量较高条件下，也会导致大鼠肝细胞切片出现坏死或变性。卵巢萎缩以及重量减轻也会导致卵巢组织中卵泡发育出现受阻[3-4]。通过本次实验，发现在大鼠中利用35%半乳糖产生的代谢作用，提示建立卵巢早衰动物模型可行性较高，可为卵巢早衰患者生育治疗问题提供一定依据。

[1] 王 冰,王旭东.中医药对不同卵巢早衰模型治疗的研究进展[J].医学综述,2016,06:1156-1159.

[2] 杨玉彬,刘 琛,李 琼.加味八珍方对卵巢早衰的作用[J].广东医学,2016,20:3013-3015.

[3] 马灵芝,金季玲,夏 天.补肾调冲方对半乳糖致卵巢早衰大鼠卵巢功能的影响[J].江苏中医药,2011,06:91-92.

[4] 朱萱萱,王海丹,倪文鹏,等.乌鳖颗粒拮抗D半乳糖致小鼠卵巢早衰的实验研究[J].中华中医药学刊,2011,10:2179-2181.

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ISSN.2095-8803.2017.15.073.02

内蒙古自治区自然科学基金项目（No.2016MS08122)