姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠膈肌的保护作用*

项兰婷， 顾倩如， 张仕锵， 董细丹， 应丽丽， 陈三妹， 陈国荣△

(1温州医科大学附属第一医院病理科， 浙江 温州 325000； 2绍兴文理学院医学院， 浙江 绍兴 312000)

姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠膈肌的保护作用*

项兰婷1， 顾倩如1， 张仕锵1， 董细丹1， 应丽丽1， 陈三妹2△， 陈国荣1△

(1温州医科大学附属第一医院病理科， 浙江 温州 325000；2绍兴文理学院医学院， 浙江 绍兴 312000)

目的探讨姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠膈肌的保护作用及机制。方法40只SPF级雄性SD大鼠，随机均分成5组：正常对照(NC)组、高脂(HF)组、高脂治疗(FT)组、糖尿病(DM)组和糖尿病治疗(DT)组。后4组采用高脂饲料喂养，4周后DM组及DT组腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病模型，造模成功后FT组和DT组用L6H4灌胃治疗8周。生化法检测空腹血糖及血脂水平；放射免疫法检测空腹血清胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)；ELISA法检测血清脂联素(APN)水平；光镜和电镜观察大鼠膈肌形态改变；酶组织化学染色观察膈肌内脂质沉积及琥珀酸脱氢酶(SDH)和还原型辅酶Ⅰ四氮唑还原酶(NADH-TR)活性；硫代巴比妥酸法和羟胺法分别检测膈肌丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性；免疫组化和Western blot检测膈肌脂联素受体1(AdipoR1)蛋白的表达。结果HF组和DM组大鼠的血糖、血脂、FINS和HOMA-IR较NC组均有升高(P<0.01)，L6H4治疗后均下降(P<0.01)；HF组与DM组大鼠血清APN水平较NC组下降，L6H4治疗后升高(P<0.01)。HF组及DM组大鼠膈肌纤维萎缩，肌纤维内脂肪颗粒堆积，线粒体轻微肿胀；DM组大鼠膈肌纤维化，L6H4治疗后，大鼠膈肌的形态学损害减轻。HF组和DM组大鼠膈肌MDA含量及SDH和NADH-TR活性较NC组升高，L6H4治疗后下降(P<0.05)；HF组和DM组大鼠膈肌SOD活性和AdipoR1蛋白表达较NC组下降，L6H4治疗后升高(P<0.05)。结论姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠的膈肌具有保护作用；膈肌AdipoR1蛋白表达增强、血清APN浓度增加及抗脂质过氧化可能参与其中。

糖尿病； 膈肌； 姜黄素类似物； 脂联素； 脂联素受体1

膈肌是人体主要的呼吸肌，是糖尿病损害的主要靶部位之一。有研究发现糖尿病膈肌的线粒体超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性降低，丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量升高，导致过氧化脂质大量生成，氧化应激明显增加[1-3]。姜黄素类似物L6H4是一种在姜黄素基础上合成的单羰基姜黄素类似物，在具备姜黄素药理优点的同时，还克服了其稳定性差、不易于吸收等缺点，具有更高的生物利用率和安全性，能更好地发挥姜黄素的作用。本实验通过检测大鼠血脂、血糖、血清脂联素(adiponectin，APN)水平、膈肌脂联素受体1(adiponectin receptor 1，AdipoR1)表达情况、膈肌SOD活性和MDA含量，评估胰岛素抵抗水平，观察膈肌形态学改变，研究L6H4对糖尿病大鼠膈肌的保护作用及机制，为糖尿病及其并发症的防治提供新的理论依据。

材 料 和 方 法

1实验动物与分组

SPF级健康雄性SD大鼠40只(购于温州医科大学实验动物中心，批准文号WYDW2014-0052)，体重180～220 g，适应性饲养1周，随机均分成5组(n=8)：正常对照(normal control，NC)组、高脂(high fat，HF)组、高脂治疗(high fat with treatment，FT)组、糖尿病(diabetes mellitus，DM)组和糖尿病治疗(diabetes mellitus with treatment，DT)组。后4组予高脂饮食[4](饲料配方为10.0% 猪油、20.0% 蔗糖、2.5% 胆固醇、1.0%胆酸盐和66.5%常规饲料)。喂养4周后，DM组和DT组用35 mg/kg链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射诱导2型糖尿病，72 h后尾静脉检测血糖浓度，以血糖>16.7 mmol/L为造模成功[5]，其余3组(NC组、HF组和FT组)腹腔注射等容积枸橼酸缓冲液。造模成功后，FT组和DT组用0.2 mg· kg-1·d-1的L6H4(溶于1%羧甲基纤维素钠)灌胃治疗，每日1次，其余3组用同等剂量的1%羧甲基纤维素钠灌胃，共8周，期间每日称体重，后4组持续高脂饲养。

2药品与主要试剂

姜黄素类似物L6H4为温州医科大学梁广教授惠赠；羧甲基纤维素钠购自Sigma；STZ和血清脂联素ELISA试剂盒购自上海润朗生物科技有限公司；胰岛素放射免疫测定试剂盒购自上海瑞齐生物科技有限公司；SOD试剂盒和MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所；兔抗鼠AdiopR1单克隆抗体购自Abcam；山羊抗兔单克隆抗体(II 抗)PV6001购自北京中杉金桥生物技术有限公司；还原型辅酶Ⅰ四氮唑还原酶(NADH-tetrazolium reductase，NADH-TR)染液和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase，SDH)染液由温州医科大学附属第一医院病理科提供。

3主要方法

3.1生化指标的检测 第12周末，大鼠禁食12 h后股动脉放血处死，收集血清，生化法检测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)；放射免疫法测定空腹胰岛素(fasting insulin，FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(homeostatic model assessment for insulin resistance, HOMA-IR)；双抗体夹心ABC-ELISA法测血清APN水平。

3.2大鼠膈肌标本处理及光镜标本制备 (1)HE染色：大鼠处死后取膈肌，用生理盐水洗净后滤纸吸干水分，取部分于10%中性福尔马林固定，经过乙醇梯度脱水、石蜡包埋后制成切片，行HE染色，光镜下观察膈肌纤维排列等变化情况；(2)Masson染色：制作石蜡切片，常规脱蜡，苏木素染色3～5 min，1%盐酸乙醇分化1～3 s，流水冲洗15 min，于红色Masson液(变色酸2R 0.5 g+磷钨酸1.0 g+冰醋酸1 mL+蒸馏水100 mL)3 min，流水冲洗5 s，于0.1%亮绿Masson液15 s(亮绿0.1 g+20%乙醇100 mL)，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。光镜下观察膈肌胶原纤维沉积情况；(3)酶组织化学染色：取部分膈肌，经液氮固定后置于-80 ℃冰箱中冻存。冰冻切片机切片，用于后续染色。将冰冻切片浸入油红O染液(油红O 0.5 g+丙二醇1 L)，于37 ℃恒温箱中孵育60 min，蒸馏水清洗，浸泡苏木素1～2 s，甘油明胶封固，光镜下观察膈肌内脂质沉积情况；将NADH-TR染液和SDH染液分别滴加于冰冻切片，37 ℃恒温箱孵育30 min，蒸馏水清洗，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，光镜下观察膈肌组织内酶反应情况。

3.3电镜观察 标本制备和超微结构观察的具体步骤参考文献[3]。

3.4免疫组化实验检测AdipoR1的表达情况 将AdipoR1抗体按1∶100浓度稀释，采用EnVision二步法[6]，并随机选择10个高倍镜视野(×400)。PBS代替I 抗作阴性对照。通过图像分析系统计算蛋白的积分吸光度(integral absorbance，IA)。

3.5Western blot实验 提取膈肌组织总蛋白，用BCA法检测蛋白含量。取 50 μg 蛋白，电转移到PVDF膜上，5%脱脂牛奶室温封闭1 h。加入I抗AdipoR1(1∶2 000)4 °C 过夜。辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG，室温孵育1 h。以 GAPDH 作为内参照，用Bio-Rad Quantity One 4.6凝胶成像分析系统拍照，采用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统对各条带进行相对定量分析。

3.6MDA含量和SOD活性的检测 取出-80 ℃保存的膈肌，称取1 g组织，按重量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加生理盐水，冰上研磨，制备成10%组织匀浆，2 500 r/min，低温离心10 min，取上清备用，并用BCA法测定蛋白浓度。MDA含量用硫代巴比妥酸法检测；SOD活性采用羟胺法检测。

4统计学处理

采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析。数据均服从正态分布，结果以均数±标准差(mean±SD)表示。多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，组内两两比较方差齐者采用Bonferroni校正的t检验法，方差不齐者采用Kruskal-Wallis 检验，两变量相关性分析用直线相关分析法。以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1一般情况

NC组、HF组及FT组大鼠饮食规律，毛发光泽顺滑，精神状态及活动正常；DM组大鼠精神萎靡、行动迟缓，毛发失去光泽、干燥、色黄；经L6H4治疗后，DT组大鼠较DM组症状明显减轻。分组前各组体重差异无统计学显著性，实验结束时，与NC组相比，HF组体重明显增加(P<0.01)，DM组体重明显下降(P<0.01)；经L6H4治疗后，FT组体重较HF组下降(P<0.01)，DT组体重较DM组增加(P<0.01)，见表1。

2各组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR及LDL/HDL值的检测结果

与NC组相比，HF组和DM组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR和LDL-C/HDL-C均不同程度增高(P<0.01)；经L6H4治疗后，FT组和DT组上述指标分别较HF组和DM均有不同程度下降，见表1。

表1各组大鼠体重、血糖、血胰岛素、胰岛素抵抗指数及LDL-C/HDL-C的比较

Table 1. Comparison of the body weight, FBG, FINS, HOMA-IR and LDL-C/HDL-C in the rats with different treatments (Mean±SD.n=8)

GroupBodyweight(g)FBG(mmol/L)FINS(mIU/L)HOMA⁃IRLDL⁃C/HDL⁃CNC362．26±18．626．73±0．5117．54±3．165．26±1．130．36±0．12HF418．88±24．90∗∗10．61±1．04∗∗23．07±4．23∗∗10．86±2．17∗∗1．87±0．49∗∗FT351．75±19．68##7．66±0．66##19．98±3．286．81±1．31##0．77±016##DM245．13±9．00∗∗30．47±1．82∗∗31．14±1．89∗∗42．07±1．85∗∗60．27±19．43∗∗DT309．25±13．95△△13．73±1．15△△25．00±1．94△△15．20±1．06△△2．05±0．16△△

**P<0.01vsNC group;##P<0.01vsHF group;△△P<0.01vsDM group.

3各组大鼠血清APN水平的比较

与NC组相比，HF组和DM组大鼠血清APN水平明显下降(P<0.01)；经L6H4治疗后，FT组血清APN水平较HF组有所上升，但差异无统计学显著性，DT组血清APN水平较DM组明显上升(P<0.01)，见图1。

4各组大鼠膈肌组织MDA含量及SOD活性的变化

与NC组相比，HF组膈肌的MDA含量增加，差异无统计学显著性，DM组膈肌的MDA含量显著增加(P<0.01)，HF组膈肌的SOD活性降低(P<0.05)，DM组膈肌的SOD活性显著降低(P<0.01)；经L6H4治疗后，FT组膈肌MDA含量较HF组有所降低，差异无统计学显著性，DT组膈肌MDA含量较DM组降低(P<0.05)，FT组和DT组膈肌SOD活性分别较HF组和DM组增加(P<0.05)，见图2。

Figure 1. The comparison of serum APN in the rats with different treatments. Mean±SD.n=8.**P<0.01vsNC group;△△P<0.01vsDM group.

图1各组大鼠血清APN含量的比较

5各组大鼠膈肌形态学的改变

5.1HE染色和Masson染色 NC组大鼠膈肌纤维排列整齐，胞浆着色均匀，胞核蓝染，卵圆形，位于肌膜下；血管壁周围及肌细胞间仅见少量墨绿色胶原纤维分布，其余部位未见明显胶原纤维沉积。与NC组相比，HF组大鼠膈肌结构较清晰，个别肌纤维萎缩，间质细胞增多，肌纤维排列尚整齐，血管壁周围及间质见稍多量墨绿色胶原纤维沉积。FT组大鼠膈肌结构及形态与正常组相似。DM组大鼠膈肌肌纤维排列较NC组稍紊乱，细胞核明显增多，部分细胞核内移，小灶区肌纤维萎缩，膈肌间质见墨绿色胶原纤维沉着较NC组增多(P<0.05)，经L6H4治疗后，上述改变略有减轻，差异无统计学显著性，见图3。

Figure 2. The changes of MDA content and SOD activity of the diaphragm in the rats with different treatments. Mean±SD.n=8.*P<0.05,**P<0.01vsNC group;#P<0.05vsHF group;△P<0.05vsDM group.

图2各组大鼠膈肌组织MDA含量和SOD活性的比较

5.2电镜观察 NC组大鼠膈肌线粒体呈圆形或卵圆形，成行排列，结构清晰，线粒体膜完整，线粒体嵴排列规则、密集清晰；肌原纤维密集，排列整齐，肌节完整。HF组膈肌少数线粒体肿胀，线粒体嵴稍紊乱；肌纤维排列尚整齐，肌丝间隙略增宽，见少量脂滴沉积。DM组膈肌超微结构与NC组相比损伤明显，膈肌线粒体肿胀，嵴紊乱，部分消失甚至形成大量空泡；肌原纤维排列紊乱，肌膜下甚至肌内见大量脂滴沉积，脂滴大小不一，常位于线粒体附近，肌原纤维受压或结构断裂。经L6H4治疗后，两组的上述改变均有减轻。FT组膈肌超微结构得到改善，与NC组结构相似。DT组大鼠膈肌肌原纤维结构、脂滴沉积及线粒体形态均较DM组明显减轻，见图4。

6膈肌酶组织化学染色

6.1油红O染色 NC组膈肌内未见明显脂质沉积，与NC组相比，HF组膈肌纤维细胞内可见较多红色脂质颗粒沉积(P<0.01)，颗粒较小，DM组膈肌纤维细胞内见大量红色脂质颗粒沉积(P<0.01)，颗粒稍大；经L6H4治疗后，FT组及DT组脂质沉积情况分别较FH组和DM组均有明显改善(P<0.01)，见图5。

6.2SDH染色和NADH-TR染色 NC组肌纤维染色颗粒较多，清晰，着色，呈阳性；HF组肌纤维染色颗粒略增多增粗，灶区肌纤维膜下肌周围见少量片状蓝染；DM组肌纤维染色颗粒明显增多增粗，肌纤维膜下肌周围见片状蓝染，呈强阳性酶反应。经L6H4治疗后，FT组及DT组肌纤维深蓝色颗粒沉积较对应模型组减少，见图6。

7膈肌AdipoR1的表达

免疫组化结果显示，NC组的AdipoR1呈弥漫强阳性表达，与NC组相比，HF组和DM组的AdipoR1阳性表达明显减弱(P<0.01)；经L6H4处理后FT组的AdipoR1阳性表达较FH组明显增强(P<0.01)，DT组的AdipoR1阳性表达较DM组增强(P<0.05)。Western blot检测结果显示，与NC组相比，HF组膈肌AdipoR1蛋白表达下降(P<0.05)，DM组膈肌的AdipoR1蛋白表达较FH组明显下降(P<0.01)；经L6H4治疗后FT组膈肌的AdipoR1蛋白表达较FH组有所上升，但差异无统计学显著性，DT组膈肌的AdipoR1蛋白表达较DM组明显上升(P<0.05)，见图7、8。

Figure 3. The morphological changes of the diaphragm in the rats with different treatments (×200). Mean±SD.n=8.*P<0.05vsNC group.

图3各组大鼠膈肌组织经HE染色和Masson染色的形态学改变

Figure 4. Ultrastructure of the diaphragm in the rats with different treatments observed under transmission electron microscope.

图4各组大鼠膈肌组织的透射电镜观察

8MDA、SOD与APN的相关性分析

经相关性分析，膈肌组织中AdipoR1蛋白的表达与血清APN和膈肌SOD活性均呈正相关，相关系数分别为0.616(P<0.01)和0.740(P<0.01)，与膈肌MDA含量呈负相关，相关系数为-0.607(P<0.05)。

Figure 5. The morphological changes of the diaphragm in the rats with different treatments (Oil red O staining, ×400). Mean±SD.n=8.**P<0.01vsNC group;##P<0.01vsHF group;△△P<0.01vsDM group.

图5各组大鼠膈肌组织的油红O染色观察

Figure 6. SDH and NADH-TR staining of the diaphragm in the rats with different treatments (×400).

图6各组大鼠膈肌组织的SDH染色和NADH-TR染色观察

讨 论

膈肌属于骨骼肌，是主要的呼吸肌，具有终生持续性收缩以及维持呼吸的特性，在调节呼吸运动及维持机体肺功能方面有着十分重要的作用，糖尿病可使膈肌出现收缩功能减弱和结构破坏，对肺功能产生不同程度的损害[7-8]。越来越多的临床研究和动物实验显示糖尿病机体存在明显的氧化应激[9-12]。沈兴平等[13]通过大鼠膈肌线粒体代谢指标研究发现早期糖尿病膈肌即出现呼吸链电子传递障碍、糖酵解能力下降等代谢功能异常。SDH作为三羧酸循环和线粒体的重要标志酶之一，其活性和含量与线粒体的数目相平行，能反映线粒体的有氧氧化代谢能力。NADH-TR是NADPH脱氢酶、NAD(P)脱氢酶及NADH脱氢酶这3种酶的合称。NADH-TR染色中，各型肌原纤维组织因NADH含量的不同而染成深浅不一的蓝紫色，线粒体聚集、酶活性增强及酶含量增高部位深染。李旭升等[2, 14]研究发现糖尿病大鼠膈肌SDH、NADPH和NOS 活性增高，LDH及CCO活性降低，提示糖尿病大鼠膈肌组织存在氧化应激和代谢功能异常；沈兴平等[13]在另一研究中发现，糖尿病大鼠膈肌脂肪酸合成增加。本实验通过膈肌SOD活性及MDA含量检测、SDH染色和NADH-TR染色发现，糖尿病大鼠膈肌组织内线粒体聚集，酶活性增强，酶含量增高，存在明显的氧化应激；油红O染色显示HF组和DM组大鼠膈肌纤维内脂肪颗粒堆积。糖尿病通过氧化应激损伤膈肌线粒体的功能，导致膈肌组织脂质沉积、糖脂代谢紊乱，L6H4可通过降低机体氧化应激水平而缓解糖尿病诱导的膈肌损伤。

Figure 7. The expression of AdipoR1 in the diaphragm of the rats with different treatments detected by immunohistochemistry (×400). Mean±SD.n=8.**P<0.01vsNC group;##P<0.01vsHF group;△P<0.05vsDM group.

图7免疫组织化学检测大鼠膈肌组织AdipoR1蛋白的表达

Figure 8. The expression of AdipoR1 in the diaphragm of the rats with different treatments detected by Western blot. Mean±SD.n=8.*P<0.05,**P<0.01vsNC group;△P<0.05vsDM group.

图8Westernblot检测各组大鼠膈肌组织AdipoR1蛋白的表达

APN是一种新近发现的具有较高生物学活性的细胞因子，是一种胰岛素增敏剂，主要由成熟的脂肪细胞合成分泌[15]，其受体AdipoR1主要分布于心肌、骨骼肌等部位，两者结合具有改善糖尿病症状等作用。研究发现APN与2型糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖等疾病具有一定程度的相关。随着对APN的不断深入研究了解，发现APN不仅能促进骨骼肌的脂肪酸氧化，降低血脂水平；同时还能促进骨骼肌组织对葡萄糖的吸收利用，从而降低血糖。APN与氧化应激也有相关性，Nakanishi 等[16]通过实验表明APN与氧化应激存在负相关关联，或许可以通过对氧化应激的调节，从而达到改善糖尿病及动脉粥样硬化的效果。有文献报道，APN可以抑制由氧化低密度脂蛋白导致的细胞增殖、自由基产生以及一氧化氮合酶的活性，其机制可能与NAD(P)H氧化酶相关。但APN要发挥相应的功能必须与其特异型受体之一AdipoR1结合，APN与其受体结合后具有抗动脉粥样硬化、抗炎等作用，可改善骨骼肌对胰岛素敏感性、减轻氧化应激损伤、调节机体的糖脂代谢等。本实验FT组和DT组大鼠在L6H4治疗后，血清 APN水平及膈肌AdipoR1蛋白的表达升高；经相关性分析，膈肌AdipoR1的表达水平与血清APN水平及膈肌SOD活性呈显著正相关，与膈肌MDA含量呈负相关，提示血清APN水平及膈肌AdipoR1的表达在糖尿病大鼠膈肌氧化应激的发生发展起重要作用。

姜黄素是从姜科植物根茎提取的一种植物多酚，具有抗氧化、抗炎等广泛的药理作用。L6H4为姜黄素类似物，保留其原有药理作用，并具有更高的生物利用率和稳定性。L6H4通过上调血清APN水平、增加膈肌AdipoR1蛋白的表达，而改善糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱、降低膈肌的氧化应激水平，缓解糖尿病诱导的膈肌损伤，为糖尿病及其并发症的防治提供新的理论依据。

[1] 杨 锐， 贾 强， 郭晓磊， 等. 硫化氢对1型糖尿病大鼠膈肌损伤的保护作用及其抗凋亡机制[J]. 中南大学学报(医学版), 2015, 40(11):1173-1178.

[2] 李旭升， 陈国荣， 毛孙忠， 等. 银杏叶提取物对糖尿病大鼠膈肌的保护作用[J]. 中国病理生理杂志, 2004, 20(7):1234-1237.

[3] 徐 敏， 王 芳， 李旭升， 等. 香菇多糖对糖尿病大鼠膈肌线粒体的保护作用[J]. 中国应用生理学杂志, 2006, 22(2):240-242.

[4] 郑海红， 苏志涛， 肖 艳， 等. 银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠肝脏糖皮质激素受体表达的影响[J]. 中国病理生理杂志, 2009, 25(5):934-938.

[5] 应丽丽， 倪瑾瑶， 李慧敏， 等. 姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠心肌的保护作用[J]. 中国病理生理杂志, 2016, 32(1): 27-32.

[6] Huang K, Chen L, Zhang J, et al. Elevated p53 expression levels correlate with tumor progression and poor prognosis in patients exhibiting esophageal squamous cell carcinoma[J]. Oncol Lett, 2014, 8(4):1441-1446.

[7] Merino-Ramirez MA, Juan G, Ramón M, et al. Electrophysiologic evaluation of phrenic nerve and diaphragm function after coronary bypass surgery: prospective study of diabetes and other risk factors[J]. J Thorac Cardiovasc Surg, 2006, 132(3):530-536.

[8] 沈兴平， 舒昌达， 何 军. 糖尿病大鼠膈肌功能和形态学变化[J]. 中国病理生理杂志, 2002, 18(8):970-973.

[9] 王 芳， 陈筱菲， 陈国荣， 等. 银杏叶提取物对糖尿病大鼠脂代谢及巨噬细胞功能的影响[J]. 中国病理生理杂志, 2006, 22(10):2036-2039.

[10] 陈四梅， 张森凯， 刘网网， 等. 姜黄素衍生物 L6H4 对糖脂代谢异常大鼠的治疗作用及其机制[J]. 温州医科大学学报, 2015, 45(3):176-179.

[11] Chen G, Wang R, Chen H, et al. Gossypol ameliorates liver fibrosis in diabetic rats induced by high-fat diet and streptozocin[J]. Life Sci, 2016, 149:58-64.

[12] 赵辛元， 徐 魁， 李彩容， 等. 川芎嗪通过抗炎作用减轻2型糖尿病大鼠心肌病变[J]. 中国病理生理杂志, 2017, 33(4):744-748.

[13] 沈兴平， 舒昌达， 李琼英， 等. 糖尿病大鼠膈肌酶组织化学研究[J]. 中国病理生理杂志, 2002, 18(10):1276-1279.

[14] 李旭升， 傅永强， 周 标， 等. 银杏叶提取物对 2 型糖尿病大鼠膈肌收缩能力的影响[J]. 中国应用生理学杂志, 2010, 26(2):249-251.

[15] Yilmaz MI, Sonmez A, Acikel C, et al. Adiponectin may play a part in the pathogenesis of diabetic retinopathy[J]. Eur J Endocrinol, 2004, 151(1):135-140.

[16] Nakanishi S, Yamane K, Kamei N, et al. A protective effect of adiponectin against oxidative stress in Japanese Americans: the association between adiponectin or leptin and urinary isoprostane[J]. Metabolism, 2005, 54(2):194-199.

(责任编辑： 林白霜， 罗 森)

ProtectiveeffectofcurcuminanalogueL6H4ondiaphragmoftype2diabeticrats

XIANG Lan-ting1, GU Qian-ru1, ZHANG Shi-qiang1, DONG Xi-dan1, YING Li-li1, CHEN San-mei2, CHEN Guo-rong1

(1DepartmentofPathology,TheFirstAffiliatedHospital,WenzhouMedicalUniversity,Wenzhou325000,China;2SchoolofMedicalSciences,ShaoxingUniversity,Shaoxing312000,China.E-mail:csm498@163.com;chengr1978@aliyun.com)

AIM: To investigate the protective effect of curcumin analogue L6H4 on diaphragm of type 2 diabetic rats.METHODSSPF male Sprague-Dawley rats (n=40) were randomly divided into 5 groups: normal control (NC) group, high fat (HF) group, high fat+L6H4 treatment (FT) group, diabetes mellitus (DM) group and DM+L6H4 treatment (DT) group. The rats in the later 4 groups were fed with high-fat diet. After 4 weeks of high-fat diet fee-ding, the rats in DM and DT groups were intraperitoneally injected with streptozotocin to induce type 2 diabetes melliutus. The rats in FT and DT groups were given L6H4 by gavage for 8 weeks. Blood glucose and blood lipid levels were detected biochemically. Fasting serum insulin (FINS) level was measured by radioimmunoassay and insulin resistance index (HOMA-IR) was calculated. Serum adiponectin (APN) level was measured by ELISA. The morphological changes of the diaphragm were observed under light and transmission electron microscopes. Lipid deposition and the activity of succinate dehydrogenase (SDH) and NADH-tetrazolium reductase (NADH-TR) were observed by enzyme histochemical staining. The content of malondialdehyde (MDA) and the activity of superoxide dismutase (SOD) in the diaphragm were measured by thiobarbituric acid method and hydroxylamine method， respectively. The protein expression of adiponectin receptor 1 (AdipoR1) in the diaphragm was determined by immunohistochemistry and Western blot.RESULTSThe levels of blood lipids, blood glucose, FINS and HOMA-IR in HF and DM groups were higher than those in NC group, but decreased after L6H4 treatment. The serum APN level in HF and DM groups was lower than that in NC group, but increased after treatment with L6H4. The muscle fibers of the diaphragm were shrunk, fat particles accumulated in the muscle fibers, and the mitochondria were slightly swollen in HF and DM groups. The diaphragmatic fibrosis was obvious in DM group. These lesions were relieved after L6H4 treatment. Compared with NC group, the level of MDA and the activity of SDH and NADH-TR in the diaphragm were increased in HF and DM groups, but decreased after treatment with L6H4. The activity of SOD and the expression of AdipoR1 in the diaphragm were lower than those in NC group, but increased after L6H4 treatment.CONCLUSIONThe curcumin analogue L6H4 exerts a protective effect on diaphragm in type 2 diabetic rats. The strengthened protein expression of AdipoR1, the increased serum level of APN, and anti-lipid peroxidation may be involved in the process.

Diabetes mellitus; Diaphragm; Curcumin analogues; Adiponectin; Adiponectin receptor 1

R587.1； R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.10.012

1000- 4718(2017)10- 1806- 08

2017- 06- 28

2017- 09- 08

浙江省公益性技术应用研究计划(No. 2011C23123)

△通讯作者 陈三妹 Tel： 0575-88345685； E-mail： csm498@163.com; 陈国荣 Tel: 0577-55579792； E-mail: chengr1978@aliyun.com

杂志网址： http://www.cjpp.net