翡翠贻贝多糖对宫颈癌细胞凋亡及miRNA-34a表达的影响

2017-10-19郑州市妇幼保健院450052李幔

首都食品与医药 2017年18期

郑州市妇幼保健院（450052）李幔

微小RNA（miRNA）是非编码单链RNA分子，可对各个层面的基因活动进行调节。随着医学研究的进一步发展，人们发现miRNA对细胞凋亡具有明显的调控作用。miRNA通过对癌基因、抑癌基因表达的调节，调控癌细胞的细胞生物程序，在肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用。肿瘤的发生及细胞增殖与miRNA-34a表达之间存在联系，说明miRNA-34a激活细胞凋亡，抑制细胞增殖具有重要的临床意义[1]。本研究以人宫颈癌细胞株HeLa为材料，通过分析翡翠贻贝多糖对其细胞凋亡及miRNA-34a表达的影响，对翡翠贻贝多糖调控miRNA-34a表达、诱导宫颈癌细胞凋亡的作用进行探究，以期为翡翠贻贝药用价值的开发提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料人宫颈癌细胞株HeLa（上海酶研究生物科技有限公司）；DMEM（南京科佰生物科技有限公司），小牛血清（北京生东科技有限公司），胰酶细胞消化液及细胞凋亡检测试剂盒（碧云天生物技术研究所），miRNA-34a引物（上海吉玛试剂公司），miRNA荧光定量PCR检测试剂盒（广州健仑生物科技有限公司），翡翠贻贝多糖（广东医学院生物化学与分子生物学研究所）；实时荧光定量PCR仪（上海宏石医疗科技有限公司），FACSCanto II流式细胞仪（上海碧迪医疗器械有限公司），XD-101型倒置式生物显微镜（武汉欧卡科技有限公司），Synergy2多功能酶标仪（美国伯腾），CO2培养箱（立德泰勀科学仪器有限公司）。

1.2 方法制备含10%小牛血清的DMEM培养液，加入人宫颈癌细胞，温度37℃，饱和湿度，在5% CO2培养箱中培养。利用0.25%胰蛋白酶消化对数生长期的宫颈癌细胞，重悬，加入12孔板，5×104个细胞/孔，1mL细胞悬液/孔，设立实验组和对照组，4孔/组。细胞贴壁，对照组添加细胞培养液50μL；实验组添加翡翠贻贝多糖药液50μL，浓度为100mg/L。培养48h，按照试剂盒说明书进行流式细胞术，分析细胞的凋亡情况；参照miRNA检测试剂盒说明书，采用实时定量PCR法对miRNA-34a表达进行检测。

1.3 统计学方法采用SPSS18.0进行统计处理，计数数据用均数±标准差，采用t进行检验，P＜0.05说明差异比较具有显著性。

2 结果

实验结果显示：给药48h后，实验组宫颈癌细胞凋亡率高于对照组，miRNA-34a表达相对值高于对照组，两组差异比较具有显著性（P＜0.05），见附表。提示翡翠贻贝多糖能够调控宫颈癌细胞凋亡率和miRNA-34a表达升高。

3 讨论

翡翠贻贝的药用和食疗功效十分显著。古书记载[2]：翡翠贻贝能补五脏，理腰脚气，除腹中冷气，益阳事，消宿食。对于肾阳虚弱、肝肾不足、女子月经不调、动脉血管硬化等疾病，贻贝均有一定疗效。翡翠贻贝多糖是翡翠贻贝肉制备所得的一种多糖成分。研究表明，提取自贻贝的活性成分具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化等作用。现代研究发现，翡翠贻贝多糖对宫颈癌肿瘤细胞生长具有一定的抑制作用；同时，在荷瘤模型小鼠的研究中[3]，翡翠贻贝多糖能够提高T淋巴细胞增殖和IL-2分泌，对其免疫功能具有改善作用。相关报道指出[4]，多糖的抗肿瘤作用主要包括两类：①多糖可以直接杀死肿瘤细胞，在肿瘤细胞膜特异性作用、肿瘤细胞超微结构及诱导细胞分化和凋亡方面均有影响；②多糖具有增强机体免疫功能的作用，能够间接杀死或抑制肿瘤细胞，是一种生物免疫反应调节剂。翡翠贻贝多糖对肿瘤细胞活性具有抑制作用，对免疫系统调节及抗肿瘤作用进行研究，对翡翠贻贝药用价值的开发具有重要意义。此次就翡翠贻贝多糖影响宫颈癌细胞凋亡及miRNA-34a表达的作用进行探究。

宫颈癌是当前临床常见的恶性肿瘤疾病，我国每年新发病例达到13万人以上，其中死于宫颈癌的女性就有3万之多，对妇女的生活健康造成严重威胁。对宫颈癌的药理机制进行研究，也是临床开展宫颈癌诊疗工作的重要内容。在不同类型的肿瘤中，均存在miRNA-34a表达异常情况。有研究发现[5]，通过靶向c-Myc癌基因，miRNA-34a可对肾癌细胞的恶变进行有效抑制。在神经细胞瘤的一项研究中[6]，学者发现miRNA-34a基因缺失明显，而提高miRNA-34a表达可以激活细胞凋亡途径，对肿瘤细胞增殖进行抑制，提示miRNA-34a具有激活细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用。目前，翡翠贻贝多糖抑制肿瘤细胞生长的分子机制尚不明确，为进一步探究翡翠贻贝多糖对肿瘤细胞凋亡及miRNA-34a表达的影响，本研究通过实验对该题组进行研究，结果发现给药48h后，实验组宫颈癌细胞凋亡率及miRNA-34a表达相对值均高于对照组（P＜0.05）。提示miRNA-34a低表达或过表达在促进宫颈癌细胞增殖和抑制宫颈癌细胞增殖方面具有明显效果，在宫颈癌细胞生长中，miRNA-34a调控作用类似于抑癌基因，其宫颈癌细胞增殖的调控表现为负调控。所以，miRNA-34a表达的调控，可作为调控肿瘤细胞增殖与凋亡的新靶点。本次实验结果表明，在翡翠贻贝多糖作用下，宫颈癌细胞凋亡率和miRNA-34a表达相对值均明显升高，说明miRNA-34a可作为翡翠贻贝多糖调控肿瘤细胞凋亡的药理靶点。