宫颈癌及癌前病变中血清IL-10的表达与HPV感染的相关性分析

莫 翔，王兴红

(广西玉林市妇幼保健院，广西 玉林 537000)

宫颈癌及癌前病变中血清IL-10的表达与HPV感染的相关性分析

莫 翔，王兴红

(广西玉林市妇幼保健院，广西 玉林 537000)

目的分析宫颈癌及癌前病变中血清白介素-10(IL-10)的表达与人类乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法选取广西玉林市妇幼保健院自2014年1月至2016年6月收集的宫颈癌及癌前病变患者110份宫颈分泌物及组织，其中25例浸润性宫颈鳞癌，21例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ，22例CINⅡ及20例CINⅢ、22例正常女性宫颈组织，采用第二代杂交捕获法对几组HPV感染情况，同时采用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法对宫颈组织中IL-10 mRNA表达进行测量。结果宫颈癌组HPV感染率均明显高于正常组织组、CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组，CINⅡ-Ⅲ组HPV感染率均明显高于正常组织组、CINⅠ组，CINⅠ组HPV感染率均明显高于正常组织，差异均具有统计学意义(χ2=5.67～12.32，均P<0.05)。宫颈癌组IL-10阳性表达量均明显高于CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组，CINⅡ-Ⅲ组IL-10阳性表达量均明显高于CINⅠ组，差异均具有统计学意义(t=7.25～8.11，均P<0.05)；宫颈癌组IL-10阳性表达率均明显高于CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组，差异有统计学意义(χ2值分别为10.55、7.12，均P<0.05)，CINⅡ-Ⅲ组IL-10阳性表达率均明显高于CINⅠ组，差异有统计学意义(χ2=8.20，P<0.05)，IL-10的表达水平在CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及宫颈癌组织中呈明显的上升趋势。进一步分析血清IL-10的表达与HPV表达的相关性，结果提示IL-10的表达与HPV感染呈正相关(r=0.702，P=0.001)。宫颈组织IL-10表达不仅和HPV感染密切相关，而且与宫颈病变的严重程度也相关。结论宫颈癌前病变的发生发展与IL-10相关，IL-10的表达与HPV和子宫颈癌疾病阶段存在明显的相关性。

宫颈癌；癌前病变；白细胞介素-10；人乳头瘤病毒

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是宫颈疾病发生发展的重要危险因素之一，其作用机制为HPV与宿主DNA相结合对基因的转录产生调节作用，从而导致宿主细胞发生恶性增殖，导致疾病由宫颈炎开始，经过宫颈糜烂、不典型增生，最终发展成为宫颈上皮内瘤变(CIN)直至宫颈癌[1]。有研究表明，在宫颈癌及癌前病变发展过程中，伴随着不同程度的机体免疫功能方面的改变，同时也存在细胞凋亡调控过程的改变，多认为与HPV持续感染有着不可分割的关系，其中血清白介素-10(interleukin-10，IL-10)引起了临床工作者的广泛重视[2]。本研究针对宫颈疾病病灶中IL-10的表达与HPV感染情况的相关性展开分析，进一步探讨二者之间的关系，结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取广西玉林市妇幼保健院自2014年1月至2016年6月收集的宫颈癌及癌前病变患者110份宫颈分泌物及组织，均排除急性感染、肝肾功能损伤、心脑血管疾病等者，排除非原发初诊，排除合并其他部位恶性肿瘤患者，其中25例浸润性宫颈鳞癌，21例CINⅠ，22例CINⅡ及20例CINⅢ(合并为CINⅡ-Ⅲ组共42例)，22例正常宫颈组织，故分为宫颈癌组、CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组(CINⅡ和CINⅢ合并)、正常组织组。宫颈癌组年龄35～72岁，平均年龄(54.23±4.45)岁；CINⅠ组年龄33～71岁，平均年龄(52.45±4.34)岁；CINⅡ-Ⅲ组年龄33～70岁，平均年龄(52.78±4.23)岁；正常组织组年龄35～72岁，平均年龄(56.23±4.67)岁。几组一般资料比较差异无统计学意义，具有可比性。全部研究对象均签署了关于本次试验的知情权同意书。

1.2方法

1.2.1第二代杂交捕获法检测HPV-DNA

采用第二代杂交捕获法检测HPV-DNA，高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，操作方法为：在收集到的几组宫颈分泌物及组织样本中加入裂解体，将样本DNA双链分解为单链，使用RNA探针将其与DNA单链相结合，形成RNA-DNA杂交体。采用特异性抗体将RNA-DNA杂交体固定在微孔壁上，将该杂交体与具有碱性磷酸酶的第二抗体相结合，放大信号[3]。在碱性磷酸酶的促进下可见酶底物发光，期间对光的强弱进行判断，利用光的强弱对RNA-DNA杂合体的含量进行判断，从而判断是否存在HPV感染。若可见DNA负荷量≥1.0ng/L[相对发光度单位(relative light unit，RLU)/阳性定标的阈值(cut off，CO)≥1.0]即为阳性，反之为阴性[4]。

1.2.2反转录酶-聚合酶链锁反应法检测宫颈分泌物及组织中IL-10mRNA

将宫颈分泌物及组织中的RNA提取后，进行逆转录酶逆转录后进行PCR反应，IL-10基因产物的长度为351bp，PCR反应条件：94℃条件下，预变性5min，后进行40次循环(循环条件为94℃/30s，60℃/30s，72℃/30s)，后在72℃的条件下延伸10min，采用2%琼脂糖对扩增产物进行凝胶电泳。IL-10的相对表达量采用actin的PCR产物含量比值表示[5]。

1.3统计学方法

2结果

2.1宫颈分泌物及组织中高危HPV-DNA感染情况

宫颈癌组HPV感染率均明显高于正常组织组、CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组(χ2值分别为12.32、9.55、7.24，均P<0.05)，CINⅡ-Ⅲ组HPV感染率均明显高于正常组织组、CINⅠ组(χ2值分别为10.21、8.23，均P<0.05)，CINⅠ组HPV感染率均明显高于正常组织，差异具有统计学意义(χ2=5.67，P<0.05)，见表1。

表1 各组宫颈组织中高危HPV-DNA感染情况对比[n(%)]

注：a与正常组织组比较，P<0.05；b与CINⅠ组比较，P<0.05；c与宫颈癌组，P<0.05

2.2宫颈分泌物及组织中IL-10的表达情况

宫颈癌组IL-10阳性表达量均明显高于CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组，差异具有统计学意义(t值分别为7.25、6.78，均P<0.05)，CINⅡ-Ⅲ组IL-10阳性表达量均明显高于CINⅠ组，差异有统计学意义(t=8.11，P<0.05)；宫颈癌组IL-10阳性表达率均明显高于CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组，差异有统计学意义(χ2值分别为10.55、7.12，均P<0.05)，CINⅡ-Ⅲ组IL-10阳性表达率均明显高于CINⅠ组，差异有统计学意义(χ2=8.20，P<0.05)，见表2。

表2 各组宫颈分泌物及组织中IL-10的表达

注：a与宫颈癌组比较，P<0.05；b与CINⅠ组比较，P<0.05

2.3宫颈癌及癌前病变中血清IL-10与HPV表达相关性

进一步分析血清IL-10的表达与HPV表达的相关性，结果提示IL-10的表达与HPV感染呈正相关(r=0.702，P=0.001)。宫颈组织IL-10表达不仅和HPV感染密切相关，而且与宫颈病变的严重程度也相关。

3讨论

3.1 HPV与IL-10在宫颈癌及癌前病变中的水平变化机制

HPV作为一类可特异性感染人皮肤及黏膜的双链闭合环状DNA病毒，当其感染宿主后可与宿主基因相结合组成DNA整合导致宿主的基因表达发生改变，促进原癌基因的激活，使得抑癌基因发生突变，从而引起免疫功能的失调[6-7]。近年来，随着研究的不断深入有研究发现，机体的免疫因素在宫颈癌发展中具有重要的作用，免疫功能的失调与肿瘤的发生发展及预后可能存在密切的关系[8]。IL-10属于一类Th2基因型细胞因子，具有较多的生物学特性，大量资料显示，IL-10在自身免疫疾病、抗感染及肿瘤免疫的治疗过程中具有重要意义[9-10]。在IL-10的调节作用下，效应B细胞可直接作用于Fas/Fasl信号通路中，从而发挥突出的抗肿瘤效应。另外IL-10还借助活化信号转导等其他信号通路，对内皮祖细胞的功能产生促进作用，较为常见的功能包括细胞的迁移及黏附等[11]。有研究发现，在宫颈恶性病变中IL-10的含量呈现较高的表达水平，且宫颈鳞状上皮内损伤的严重程度与IL-10的高表达有密切的关系，而高水平的免疫调节因子仅局限在鳞-柱状上皮的交接区域内[12]。另外，已经感染了HPV妇女的外周血中，血清IL-10的含量也明显高于未感染的妇女，证实了宫颈癌的发生发展与IL-10的分泌量相关。

3.2宫颈癌及癌前病变中血清IL-10的表达与HPV感染的相关性

本研究结果显示，宫颈癌组HPV感染率均明显高于正常组织组、CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组，CINⅡ-Ⅲ组HPV感染率均明显高于正常组织组、CINⅠ组，CINⅠ组HPV感染率均明显高于正常组织，差异具有统计学意义(P<0.05)。可见随着病变严重程度的发展，HPV感染率有增加趋势。宫颈癌组IL-10阳性表达率均明显高于CINⅠ组及CINⅡ-Ⅲ组，CINⅡ-Ⅲ组阳性表达率均明显高于CINⅠ组，差异具有统计学意义(P<0.05)。可见正常宫颈组织中无IL-10表达，随着宫颈病变严重程度的增加，表达比例呈上升趋势。进一步分析血清IL-10的表达与HPV表达的相关性，结果提示IL-10的表达与HPV感染呈正相关。说明宫颈组织IL-10表达不仅和HPV感染密切相关，而且与宫颈病变的严重程度也相关。在不同的子宫颈癌阶段，IL-10表达呈明显的上升趋势。

综上所述，宫颈癌前病变的发生发展与IL-10对宫颈局部产生的抑制反应相关，IL-10的表达与HPV和子宫颈癌疾病阶段存在明显的相关性。由于本次研究样本量有限，可通过进一步扩大样本量深入研究以得出精确的结论。

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[专业责任编辑：安瑞芳]

CorrelationbetweenserumIL-10expressionandHPVinfectionincervicalcancerandprecancerouslesions

MO Xiang, WANG Xing-hong

(YulinMaternalandChildHealthCareHospitalofGuangxi,GuangxiYulin537000,China)

ObjectiveTo analyze the correlation between serum interleukin-10 (IL-10) expression and human papilloma virus (HPV) infection in cervical cancer and precancerous lesion.MethodsCervical secretions and tissues from 110 patients suspected with cervical cancer and precancerous lesion in Yulin Maternal and Child Health Care Hospital from January 2014 to June 2016 were selected. Among them, 25 cases were diganosed with invasive cervical squamous carcinoma, 21 cases with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) Ⅰ, 22 cases wtih CIN Ⅱ and 20 cases with CIN Ⅲ, and 22 cases with normal cervical tissues. HPV infection was detected by hybrid capture II in all groups, and IL-10mRNA expression in cervical tissues was measured by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR).ResultsHPV infection rate in cervical cancer group was significantly higher than that in normal tissue group, CIN Ⅰgroup, CIN Ⅱ-Ⅲ group. HPV infection rate in CIN Ⅱ-Ⅲ group was significantly higher than that in normal tissue group and CIN Ⅰ group, and that in CIN Ⅰ group was significantly higher than in normal tissue group. All above differences had statistical significance (χ2value ranged 5.67-12.32, allP<0.05). IL-10 positive expression in cervical cancer group was significantly higher than that in CIN Ⅰ, CIN Ⅱ-Ⅲ groups, and that in CIN Ⅱ-Ⅲ group was significantly higher than that in CIN Ⅰ group. The differences were statistically significant (χ2value ranged 7.25-8.11, allP<0.05). IL-10 positive expression rate in cervical cancer group was significantly higher than that in CIN Ⅰand CIN Ⅱ-Ⅲ groups with statistically significant differences (χ2value was 10.55 and 7.12, respectively, bothP<0.05). IL-10 positive expression rate in CIN Ⅱ and CIN Ⅲ groups was significantly higher than that in CIN Ⅰ group with significant difference (χ2=8.20,P<0.05). IL-10 expression showed an obvious rising trend in CIN Ⅰand CIN Ⅱ- Ⅲ and cervical cancer tissues. Further analysis revealed that IL-10 expression was positively correlated with HPV infection (r=0.702,P=0.001). IL-10 expression in cervical tissues was not only closely related with HPV infection, but with severity of cervical lesions.ConclusionOccurrence and development of cervical precancerous lesion is related with IL-10, and expression of IL-10 is obviously related with HPV and cervical cancer stage.

cervical cancer; precancerous lesions; interleukin-10 (IL-10); human papilloma virus (HPV)

R737.33

A

1673-5293(2017)10-1265-03

2017-01-17

莫 翔(1979—)，女，瑶族，主治医师，主要从事妇科临床工作。

王兴红，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.10.034