狼疮性肾炎患儿血清总IgE水平变化及临床意义

余 玲,毛建华

(浙江大学医学院附属儿童医院肾脏内科，浙江 杭州 310003)

狼疮性肾炎患儿血清总IgE水平变化及临床意义

余 玲,毛建华

(浙江大学医学院附属儿童医院肾脏内科，浙江 杭州 310003)

目的探讨血清总IgE变化水平在儿童狼疮性肾炎病情活动中的临床意义。方法采用ELISA法测定狼疮性肾炎患儿和对照组患儿血清中总IgE含量，并检测其24小时尿蛋白定量、尿蛋白/肌酐、血肌酐、血尿素氮，计算肾小球滤过率。结果狼疮性肾炎组患儿血清总IgE水平较对照组显著升高，差异有高度统计学意义(t=3.889，P<0.01)，高IgE亚组患儿公斤体重24小时尿蛋白定量和尿蛋白/尿肌酐水平均明显高于低IgE亚组，差异有统计学意义(t值分别为2.233、2.125，均P<0.05)，但两亚组的血肌酐、血尿素氮和肾小球滤过率均无显著统计学差异(t值分别为0.808、1.194、0.522，均P>0.05)。结论血清IgE对判断狼疮性肾炎病情活动有意义，调节IgE表达可能有助于改善狼疮性肾炎患儿的病情。

狼疮性肾炎；免疫球蛋白；儿童；酶联免疫吸附法

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种自身免疫性疾病，由于机体缺乏对核酸的免疫耐受、激活自身反应性淋巴细胞和产生大量诱导组织损伤的自身反应性抗体而发病。狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)是SLE严重的并发症之一，肾脏局部自身抗体的沉积以及淋巴细胞的浸润导致肾炎的发生，临床出现肾脏受累者约高达60%。与成人相比，儿童更易发生肾损害。

免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)在抵御寄生虫感染和过敏反应发病机制中重要作用已经被认可。既往有研究表明，SLE患者血清中自身反应性IgE含量较正常人群偏高[1]，但是SLE患者不比一般人群更容易发生IgE驱动的过敏反应。因此，IgE在自身免疫反应中的作用可能有所不同。本研究通过检测LN儿童血清总IgE含量，探讨IgE在LN病情活动中的临床意义。

1 对象和方法

1.1 研究对象

选取2011年3月至2016年12月在浙江大学医学院附属儿童医院肾脏内科治疗的LN患儿50例为LN组。所有患者均符合LN诊断标准[2]。SLE患儿有下列任一项肾受累表现者即可诊断为LN：①尿蛋白检查满足以下任一项者：1周内3次尿蛋白定性检查阳性，或24小时尿蛋白定量>150mg，或1周内3次尿微量白蛋白高于正常值；②离心尿每高倍镜视野(HPF)红细胞(RBC)>5个；③肾功能异常(包括肾小球和/或肾小管功能)；④肾活检异常。另随机选取本院同时期收治的50例同年龄阶段非LN(且非SLE等其他自身免疫性疾病)患儿纳入对照组。入组患儿均签署知情同意书。本研究通过浙江大学医学院附属儿童医院医学伦理会同意。

1.2 研究方法

采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测血清总IgE水平。同时测量患儿体重、身高，检测24小时尿蛋白定量、尿蛋白/肌酐、血肌酐(serum creatinine, Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)。肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)计算采用Schwartz-Lyon公式[3]：eGFR[(mL/min·1.73m2)]=k×身高(cm)/ Scr(μmol/L)，当k=36.5(当患儿为≥13岁的男性),k=32.5(当患儿为<13岁的男性和所有女性)。

1.3 标本采集与检测

嘱患儿家属入院后第2天收集患儿清晨的第1次尿，留取中段尿2～3mL于尿试管中立即送检。待晨尿排尽后留取24小时尿标本，同时将每次的尿标本收集于清洁干燥的容器内，并在收集第1次24小时尿标本后加入10mL甲醛防腐，当尿标本收集完毕后，取其中的2mL使用检验生化仪器检测尿蛋白和尿肌酐。所有患儿于入院24小时内抽取空腹8小时以上的肘静脉血8mL置于干燥的非抗凝管中，使用全自动生化分析仪测定Scr和BUN。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 一般资料

LN组中男性患儿14例，女性患儿36例，年龄6.2～15.8岁。对照组中男性患儿18例，女性患儿32例，年龄5.2～15.4岁。两组的性别构成比、发病年龄以及体重差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。

表1 LN组及对照组患儿基本资料

2.2 两组血清总IgE水平及肾功能相关临床指标比较

LN组患儿治疗前血清总IgE水平为272.5±42.6 IU/mL，其中有31例高于100IU/mL，超出正常范围。对照组患儿血清总IgE水平为85.9±22.1IU/mL，显著低于LN组患儿(P<0.01)。对照组中有6例患儿的IgE表现异常，高于100IU/mL，其中3例诊断为胡桃夹综合征，2例泌尿道感染，1例多囊肾。

LN组患儿的BUN明显高于非LN组，差异有高度统计学意义(P<0.01)，但前组的Scr不明显高于后组。此外，LN组的BUN均值和Scr均值略高于正常值上限(7.9mmol/L和77.0umol/L)，而对照组均在正常范围，见表2。

检测项目LN组(n=50)对照组(n=50)tP24小时尿蛋白(mg)1827．6±260．1未检测--尿蛋白/肌酐2．3±0．3未检测--Scr(μmol/L)77．3±8．761．0±3．31．750．085BUN(mmol/L)8．2±0．85．5±0．43．0840．003血清总IgE(IU/mL)272．5±42．685．9±22．13．889<0．001

2.3 血清总IgE水平与狼疮性肾炎病情程度相关性分析

为了分析LN患儿血清总IgE水平与病情程度的相关性，基于患儿血清总IgE水平均值，将LN患儿分为低IgE亚组(<272.5IU/mL)和高IgE亚组(≥272.5IU/mL)，其中低IgE亚组34例，高IgE亚组16例。

高IgE亚组患儿24小时尿蛋白定量显著高于低IgE亚组(2 628.6±490.4mg vs 1 439.2±285.6mg，P=0.03)，公斤体重标准化后24小时尿蛋白定量仍显示出类似的差异(75.3±11.7mg/kg vs 42.1±8.7mg/kg，P=0.03)。同时，高IgE亚组患儿的尿蛋白/肌酐水平也明显高于低IgE亚组(P=0.04)。

与此同时，高IgE亚组Scr和BUN有高于低IgE亚组的趋势，eGFR则呈现相反趋势，但这些趋势尚无显著统计学差异(P>0.05),见表4。

此外，两亚组患儿性别构成比、发病年龄、体重均无显著差异(P>0.05),见表3。

表3 两亚组基本情况比较

表4 两亚组后相关临床检测指标比较

3 讨论

3.1 SLE/LN与自身免疫反应

SLE的发病与效应T淋巴细胞的异常活化以及针对核抗原，特别是双链DNA(double-stranded DNA, dsDNA)自身抗体的出现有关。由自身抗体和核抗原形成的免疫复合物(immunocomplexes, ICs)沉积和炎症细胞在肾脏的浸润引起LN。如今较为研究成熟的SLE发病机制之一是Toll样受体9(toll-like receptor 9, TLR9)感应dsDNA-IgG ICs，激活浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells, pDCs)，导致干扰素-α(interferon-α, IFN-α)反应[4]。然后，IFN-α和pDCs支持B细胞活化、增殖和浆细胞分化而产生自身抗体。

3.2 SLE/LN与自身IgE抗体

IgE是免疫球蛋白的亚型之一，因其在辅助性T细胞2(type 2 helper T lymphocyte, Th2)应答和过敏发生机制中的作用而被熟知。不断有证据表明IgE抗体的致病作用不仅仅限于过敏，它们可能在其它炎症和自身免疫疾病中发挥作用[5-6]。以往检测的SLE/LN的相关抗dsDNA、Smith抗体等都是IgG抗体，这方面的研究很多，也广为人知，但是，最近有研究证明，针对dsDNA的自身IgE抗体在LN的发病机制中可能也发挥着重要作用，它们能加剧pDCs的干扰素反应。之前已经在一些SLE患者的研究中报道了针对dsDNA的IgE自身抗体存在[7]。

在本次研究中，LN组患儿血清总IgE水平显著高于对照组，也提示IgE与LN的发病有一定关系。进一步将LN组分为低IgE亚组与高IgE亚组后发现，后者24小时尿蛋白定量和尿蛋白/尿肌酐水平较前者明显升高，说明IgE与LN患儿的肾脏损伤程度有关。虽然经统计两亚组Scr、BUN和eGFR均无统计学差异，但高IgE亚组的前两项反映肾小球功能的指标有高于低IgE亚组的趋向，eGFR低于低IgE亚组，考虑与纳入研究的样本量偏少有关，今后加大样本量可进一步分析。

Henault等[8]研究报告，>50%的SLE患者存在dsDNA-IgE，在活动性SLE中dsDNA-IgE浓度升高。当IgE阻断抗体与来自dsDNA-IgE阳性患者的血清一起温育时，外周血单核细胞的IFN-α分泌显著减少，表明IgE自身抗体推动来自pDCs的IFN-α应答。事实上，通过使用针对dsDNA的特异性IgE单克隆抗体，他们证实了dsDNA-IgE ICs诱导pDCs产生大量IFN-α，从而揭示了之前未知的促成SLE发生的分子机制。那么，dsDNA-IgE如何介导pDCs激活和加剧自身免疫反应？有研究表明，pDCs表达高亲和性受体FcεRⅠ，IgE自身抗体与dsDNA形成ICs(即dsDNA-IgE ICs)，结合pDCs上的FcεRⅠ，将dsDNA-IgE ICs递送至吞噬溶酶体，继而使TLR9感应、干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7, IRF7)和NF-κB核易位，激活pDCs，并触发炎症细胞因子(包括IFN-α、IL-6、IL-8和TNF)产生[8]，活化的pDCs促进共同培养的B细胞增殖，浆细胞分化，IFN-α和IL-6刺激其产生免疫球蛋白[7]。最近又有小鼠实验结果显示dsDNA-IgE在狼疮样疾病进展中有重要意义[9]。FcγRIIB -/ -小鼠有IgE缺陷，延迟了狼疮样疾病的发展和降低了其严重性。此外，从LN患者的肾活检标本中发现IgE在肾小球和球外区域沉积，这些区域与pDCs和B细胞接近，因此推测上述体外现象在患者体内也可出现。这些证据均与本次研究分析保持一致，考虑IgE参与了疾病过程。此外，有研究报道SLE患者IgE水平相比特应性皮炎患者和正常人都升高，而且与疾病的是否活动以及严重程度呈正相关[8]。

综上所述，以往自身免疫性疾病及感染性疾病，包括SLE/LN等，认识较深的多为IgG或IgM抗体，特异性IgE自身抗体的研究甚少。本研究发现，血清IgE抗体与LN患者的疾病活动度有关，而IgE浓度较高的LN患者尿蛋白定量也明显高于IgE浓度较低的LN患者，提示IgE可能与LN的发生与发展有关，血清IgE浓度可作为一个评定LN病情的相应指标，对IgE相关机制的进一步研究可能为LN提供新的治疗策略。

[1]Dema B, Charles N, Pellefigues C,etal. Immunoglobulin E plays an immunoregulatory role in lupus[J]. J Exp Med, 2014, 211(11): 2159-2168.

[2] 中华医学会儿科学分会肾脏病学组. 儿童常见肾脏疾病诊治循证指南(试行)(六)：狼疮性肾炎诊断治疗指南[J]. 中华儿科杂志, 2010, 48(9): 687-690.

[3]De Souza V C, Rabilloud M, Cochat P,etal. Schwartz formula: is one k-coefficient adequate for all children[J]. PLoS One,2012,7(12):e53439.

[4]Hagberg N, Rönnblom L. Systemic lupus erythematosus—a disease with a dysregulated type I interferon system[J]. Scand J Immunol, 2015,82(3):199-207.

[5]Messingham K A, Holahan H M, Fairley J A. Unraveling the significance of IgE autoantibodies in organ-specific autoimmunity: lessons learned from bullous pemphigoid[J]. Immunol Res, 2014, 59(1-3):273-278.

[6] Sharma M, Bayry J. Autoimmunity: basophils in autoimmune and inflammatory diseases[J]. Nat Rev Rheumatol, 2015, 11(3): 129-131.

[7] Bayry J. Lupus pathogenesis: role of IgE autoantibodies[J]. Cell Res, 2016, 26(3): 271-272.

[8]Henault J, Riggs J M, Karnell J L,etal. Self-reactive IgE exacerbates interferon responses associated with autoimmunity[J]. Nat Immunol, 2016, 17(2):196-203.

[9]Dema B, Pellefigues C, Hasni S,etal. Autoreactive IgE is prevalent in systemic lupus erythematosus and is associated with increased disease activity and nephritis[J]. PLoS One, 2014, 9(2): e90424.

[专业责任编辑：吴红艳]

ClinicalsignificanceofchangesintotalserumIgElevelinchildrenwithlupusnephritis

YU Ling, MAO Jian-hua

(DepartmentofNephrology,Children’sHospital,ZhejiangUniversitySchoolofMedicine,ZhejiangHangzhou310003,China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of total serum IgE level change in children with lupus nephritis (LN).MethodsThe total IgE levels in serum of children with LN and that in control group were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The 24-hour urinary protein, urine protein/creatinine, serum creatinine and blood urea nitrogen were detected, and glomerular filtration rate was then estimated.ResultsThe level of total serum IgE in LN group was significantly higher than that in the control group (t=3.889,P<0.01). The urine protein/creatinine and 24-hour urinary protein levels were significantly lower in children with low IgE level than those with high IgE level (tvalue was 2.125 and 2.233, respectively, bothP<0.05). But there was no significant difference in serum creatinine, blood urea nitrogen and glomerular filtration rate between two subgroups (tvalue was 0.808, 1.194 and 0.522, respectively, allP>0.05).ConclusionSerum IgE level may be meaningful to predicting disease activity of LN. Furthermore, regulation of IgE expression may relieve the condition of LN in the future.

lupus nephritis (LN); immunoglobulin E (IgE); children; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

R725.7

A

1673-5293(2017)10-1208-03

2017-05-16

余 玲(1988—)，女，住院医师，硕士研究生，主要从事儿童常见肾脏疾病的研究。

毛建华，教授 。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.10.015