玉露增殖培养试验报告

应冬勤　陈依桃　林昱

摘要：以玉露的幼嫩花为试材进行增殖培养试验，结果表明，玉露适宜分化增殖培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L，芽多苗壮，生根培养基为1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L，生根快，10天生根率达86%。玉露试管苗移栽基质以过筛的沙壤土：草粪=2：1为宜，栽后少浇水并遮荫，移栽成活率达90%以上。

关键词：玉露；茎尖培养；增殖培养

1試验材料

玉露的幼嫩花茎。

2试验方法

2.1无菌材料的获得 将选取的玉露幼嫩花茎小心剥去苞叶，先用适量的洗洁精清洗，倒去洗涤剂，然后流水冲洗2h。在超净工作台上用75%的酒精浸泡60s，无菌水冲洗2-3次后，再用0.1%HgCI浸泡3-5min，并添加1滴吐温；然后用无菌水冲洗4-5次。将消毒后的材料置于无菌盘内，剪切成1cm左右的小段，放入无菌锥形瓶中封好瓶口备用。

2.2培养基的筛选 以MS基本培养基为基本培养基，在多次试验的基础上，确定诱导培养基：MS+NAA0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L；增殖培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；生根培养基：I/2MS+NAA0.25mg/L，以上培养基均添加3%的蔗糖，6%的琼脂，pH5.8。

2.3培养条件 培养温度（25±2）℃，光照强度2000-3000Lx，光照时间12h/d，大约15-25d后，试管中接种的外植体就可以膨大，形成愈伤组织。愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生长状态已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。愈伤组织形成1周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。

2.4愈伤组织继代培养 将愈伤组织在接种室无菌环境下，从玻璃瓶中取出，用镊子和解剖刀清除附着在愈伤块上的培养基，直到愈伤块上无残留培养基为止。然后用解剖刀将愈伤组织切成小块，再接种到愈伤组织诱导培养基的玻璃瓶中，在与诱导愈伤组织相同的培养基下继续培养。几天后，玻璃瓶中的小愈伤块即可逐渐长大。通过愈伤组织的继代培养，原来接种的1个玉露茎尖组织可以繁殖出大量的新组织，这些新材料可用于分化培养。

2.5愈伤组织分化培养 在无菌环境下，将愈伤组织从玻璃瓶中取出，用镊子和解剖刀剔除组织上的培养基，并切成小接种块接种到分化培养基的玻璃瓶中，分化培养的条件和愈伤组织培养相同。大约30-50d后，愈伤组织就可以分化出芽，并长出新叶片。当幼苗分化出一定数量或长到一定高度后，将这些小幼苗在无菌室取出，进行下一步的生根培养或重新诱导分化。

2.6诱导生根培养 当玻璃瓶中幼苗的叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌室取出，放人生根培养基玻璃瓶中培养，培养条件与分化培养相同。大约半个月左右，幼苗便可以生根。

2.7炼苗 幼苗具有2-3条根，根长1-2cm时，幼苗的形体已显健壮，便可将幼苗取出转移至温室或塑料大棚内。用清水清洗附在幼苗根上的残留培养基（注意：一定要清洗干净，否则会导致烂根）。将洗干净的幼苗整齐地排好，用清水喷湿，在温度15-25℃、湿度60%-80%的条件下炼苗24h，也可视情况而定缩短为12h。当幼苗茎叶颜色加深，根系颜色变为黄褐色并延长、伴有新根长出时表示炼苗成功。

2.8移栽 炼苗后，将幼苗进行移栽。先在由蛭石组成的驯化苗圃中进行驯化，每天定时给幼苗喷施培养液和清水，大约15-20d后，便可移栽至基质以过筛的沙壤土：草粪=2：1的苗圃中。根据幼苗大小在苗圃中划出深1-3cm的小沟，深度以叶片不接触基质为宜，株距以苗不相互接触为宜，以细雾状喷水，基质表面不积水为度。成活率达90%以上。

3结果分析

3.1丛生芽的诱导

把2-3cm的玉露幼芽接种于6种不同增殖培养基内，20d基部变黑，出现淡黄色幼芽原基，30d以后发育成芽，50d左右可以分切，进行继代培养。表1为接种50d的结果。结果表明，玉露分化增殖培养中，以MS为基本培养基，添加6-BA浓度1.0mg/L，NAA 0.5mg/L为宜，丛生芽多而壮，是玉露最佳的分化增殖培养基，单芽增殖了17个，苗高为5.2cm，6号培养基的幼苗有玻璃化现象。

3.2玉露生根培养 将丛生芽分切成单芽，接种于6种培养基内，每瓶接种4个芽，每种培养基接种30瓶，并观察其生根情况。在接种后10d、15d、50d观察玉露生长发育情况。结果表明，3号和5号培养基生根最快，4号培养基生根最晚；1号、2号、3号培养基苗长势一般，4号、5号6号培养基苗较键壮。说明玉露生根培养要求营养元素以MS为宜，1/2MS表现营养不足，添加生长素NAA的浓度不宜超0.3mg/L较好，浓度过高会抑制根的分化生长。最佳的生根培养基为1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L，接种10天生根率达86%。

3.3移栽后的管理 苗床基质保持湿润，避免积水，以防烂根。每月施1次腐熟的稀薄液肥和0.1%多菌灵混合液。施肥时注意肥水不要溅到叶上，否则会形成斑点，影响观赏。夏季高温时植株呈半休眠状态，生长缓慢或停滞，可移至通风、凉爽处养护，避免暴晒和长期淋雨，不可浇水过多，停止施肥。玉露对光线较敏感，若光照较强会导致叶片生长不良呈浅红褐色；栽培场所太过于荫蔽，又会造成株形松散、不紧凑，叶片透明度变差；在半阴处生长的植株，叶片相对会比较肥厚、饱满，透明度也会增高，因此可以放在光线明亮，无直射阳光的地方进行养护，入秋天气凉爽后可恢复正常的肥水管理。冬天要求充足的光照，如果最低温度不低于13℃，可以继续浇水，让植株生长，但是不要施肥。

4讨论与结论

玉露分化增殖培养中，以MS为基本培养基，添加6-BA 1.0mg/L，NAA 0.5mg/L为宜，丛生芽多而壮。

玉露较易生根，有无激素均能长根，但生根的快慢和多少各不相同。试验结果表明，玉露生根培养以MS为基本培养基，1/2MS表现营养不足，添加生长素NAA的浓度不宜超0.3mg/L，过高抑制根的分化生长。最佳的生根培养基为1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L，接种10天生根率达86%。玉露试管苗移栽基质以过筛的沙壤土：草粪=2：1为宜，栽后少浇水并遮荫，移栽成活率达90%以上。