桑皮中1—脱氧野尻霉素的提取技术研究

唐满生+吴新+周锦云

【摘 要】1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）是桑皮提取物中的一种功能性成分。1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）是一种哌啶生物碱，其化学名称是3，4，5-三羟基- 2-羟甲基四氢吡啶，分子式为C6H13NO4，分子量为163。DNJ作为α-葡萄糖苷酶的抑制剂，具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤转移等作用。目前工业化生产大多采用沸水提取的方法，此法虽然简单易操作，但提取物中1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）的含量都在1.5%以下。本文分别采用不同浓度乙醇、提取温度和提取时间进行三水平三因素正交试验，经过脱溶脱水和干燥粉碎后，气相色谱法检测各正交试验粉未1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）的含量分别为2.53%、2.85%、2.75%、2.68%、3.28%、2.86%、2.77%、2.84%、2.71%。得到的最优工艺提取条件为：浓度乙醇60%，提取温度60℃，提取时间2小时。

【关键词】桑皮提取物；1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）；提取技术

【Key words】Mulberry extract； 1-DNJ； Gas chromatography

桑皮提取物中1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）是提取物中的一种功能性成分，具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤转移等作用，另外还是α-葡萄糖淀粉酶的有效抑止剂。目前工业化生产大多采用沸水提取的方法，本文就桑皮1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）的提取和含量检测进行研究，为工业化生产提供依据。

1 测定方法

1.1 气相色谱法

1.1.1 仪器和试剂

GC-14C气相色谱仪（FID检测器）（日本岛津制作所）；氢气发生器（北京中兴汇利科技发展有限公司 GH-300）；低噪音空气泵（北京中兴汇利科技发展有限公司 GA5000A）；高纯氮气（99.99%）；电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司 EA-200）；高速离心机（长沙凯达科学仪器公司TG16G）。

1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）标准储备液：称取1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）（安譜 99.39% 约10mg），用2mL吡啶30min溶解后，加入10 mg氢氧化钠混匀，即得5.0mg/mL的1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）标准储备液。

吡啶（AR），氢氧化钠（AR）。

N，0-双（三甲基硅烷基）乙酰胺（BSA）

离心管（5mL、2mL）。

1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）标准样系列：取1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）标准储备液用吡啶稀释成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL标准样系列各0.2 mL于2mL离心管。

1.1.2 试样制备

称取桑皮提取物样品约0.5g（精确至少数点后四位）于5mL离心管中，加入10 mg氢氧化钠，加吡啶定容，混匀，放置离心机（8000r/min）中离心6 min，取上清液0.2 mL于2mL离心管，与以上标准系列液分别加入0.2 mL BSA，在60℃条件下水浴5 min发生衍生反应，放入4℃冰箱保存待测。

1.1.3 气相色谱分析条件

色谱柱：OV-275（广州菲罗门），30m×0.25mm×0.25μm；汽化室（INJ）温度：200℃，检测器（DET）温度：210℃，程序升温条件：初始柱（COL）温：120℃，保持3 min，每分钟20℃升温到180℃，保持4 min；氮气流量：30mL/min，氢气流量：50 mL/min，空气流量：400 mL/min；进样量：1μL。

1.1.4 实验方法

取配制好的标准样和样品，按1.1.3的分析条件，进行测试。

2 结果与分析

2.1 单因素试验

2.1.1 不同温度对提取粉未1-DNJ含量的影响

称取桑皮粉未3份，每份50g，提取液浓度60%，提取时间1.5小时，在1（55℃）、2（60℃）、3（65℃）温度下，按料液比1：10进行提取，提取2次，合并提取液，回收乙醇、脱水和干燥粉碎后得到棕黄色粉未。按1.1.3的分析条件，进行测试，含量分别为2.85%、3.23%、3.02%，结果见图1。

2.1.2 不同乙醇浓度对提取粉未1-DNJ含量的影响

称取桑皮粉未3份，每份50g，提取温度60℃，提取时间1.5小时，在1（55%）、2（60%）、3（65%）浓度下，按料液比1：10进行提取，提取2次，合并提取液，回收乙醇、脱水和干燥粉碎后得到棕黄色粉未。按1.1.3的分析条件，进行测试，含量分别为2.68%、3.23%、3.06%，结果见图2。

2.1.3 不同提取时间对提取粉未1-DNJ含量的影响

称取桑皮粉未3份，每份50g，提取温度60℃，提取浓度60%，在1（1.0小时）、2（1.5小时）、3（2.0小时）时间下，按料液比1：10进行提取，提取2次，合并提取液，回收乙醇、脱水和干燥粉碎后得到棕黄色粉未。按1.1.3的分析条件，进行测试，含量分别为2.96%、3.23%、3.28%，结果见图3。

2.2 正交试验

为筛选最优工艺，结合以上单因素试验，以桑皮提取粉未1-DNJ含量为考察指标，通过气相色谱法测定来考察不同浓度乙醇、提取温度和提取时间对桑皮提取粉未1-DNJ含量的影响，设2次重复，采用L9（33）三因素三水平，正交试验见表1和表2。

3 结论与工业化生产

通过表1表2可知，最优的工艺条件为试验5，即浓度乙醇60%，提取温度60℃，提取时间2小时。按最优的工艺条件进行工业化生产，每批次投料量为1吨，前10批棕黄色粉未中1-DNJ含量为3.08%、3.03%、2.99%、3.16%、3.08%、3.12%、3.07%、3.03%、3.13%、3.15%，平均值为3.08%，所得产品提取物中1-DNJ含量显著增加。

【参考文献】

[1]作者：杨文宇，等.《桑树总生物碱分析方法与提取方法的探讨》.时珍国医国药2008年第9卷第5期.

[2]作者：王鹏，等.《桑树DNJ提取、纯化和检测的研究进展》.实验室研究与探索 2011年12月第30卷第12期.

[3]作者：蒋小飞，等.《桑叶中生物碱脱氧野尻霉素（DNJ）的最佳提取工艺探讨》 .西昌学院学报2010年12月第24卷第4期.

[责任编辑：张涛]endprint