牛奶和蛋白类饮料防腐剂采取SPE—HPLC法检测的效果分析

王林++许凌

摘要：目的 研究牛奶和蛋白类饮料防腐剂测定中采取固相萃取-高效液相色谱法（SPE-HPLC）的效果。方法 将牛奶和蛋白类饮料中提取的防腐剂作为研究对象，分别采用两种检测方式完成牛奶和蛋白类饮料中防腐剂的测定，对照组采用常规的TLC（薄层色谱法）进行检测，观察组则采用固相萃取-高效液相色谱法进行检测，两组均进行0.2 g样品量的称取，对这两种检测方式的检测结果与产品回收率进行对比分析。结果 对照组乳饮品、蛋白、牛奶中的纯度与分离率显著高于对照组；观察组的样品回收率为99.80%，显著高于对照组的82.00%（P<0.05）。结论 固相萃取-高效液相色谱法测定牛奶和蛋白类饮料防腐剂的效果显著，具有简单、快捷、回收率高等优点，值得广泛推广。

关键词：牛奶；蛋白类饮料；防腐剂测定；固相萃取-高效液相色谱法

中图分类号：R740 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）19-0080-03

Analysis of the Effect of SPE-HPLC Test on Preservatives in Milk and Protein Drinks

WANG Lin，XU Ling

（Chenghua District Center for Disease Control and Prevention，Chengdu 610051，Sichuan，China）

Abstract：Objective To study the effect of solid-phase extraction and high performance liquid chromatography（SPE-HPLC）on the determination of preservatives in milk and protein drinks.Methods The preservatives used in milk and protein beverage were used as the research object.The determination of preservatives in milk and protein beverage was carried out by two kinds of detection methods.The control group was tested by conventional TLC（thin layer chromatography），the observation group was treated by SPE-HPLC detection，the two groups were 0.2 g sample weighing， test results of the two kinds of detection methods and product recovery rate were analyzed.Results In the control group，milk drinks，protein purity and separation rate in milk was significantly higher than the control group；the sample recovery rate was 99.8% in the observation group，significantly higher than 82% in the control group（P<0.05）.Conclusion By SPE-HPLC method for the determination of the effect of milk and protein beverage preservatives significantly，has the advantages of simple，fast，high recovery and is worthy of extensive promotion.

Key words：Milk；Protein beverage；Preservative determination；Solid phase extraction-high performance liquid chromatography

現阶段，在饮料分析过程中，固相萃取-高效液相色谱法得到了广泛应用，这种检测方式具有高效、快捷等特点[1]。随着科学技术的不断进步与发展，固相萃取-高效液相色谱法水平也在很大程度上得到提升，其分离效能、检测灵敏度、分析速度与操作自动化水平均得到改善[2]。虽然现阶段的固相萃取-高效液相色谱法得到了较大发展，但是这种检测方式依旧保留了经典液相色谱法的一些优点，例如流动相较多、样品适用范围较广、方便色谱制备等。在制药工业、食品工业、生物工程以及石油化工等诸多领域，这种检测方式均得到了广泛应用[3]。研究显示，固相萃取-高效液相色谱法在牛奶和蛋白类饮料防腐剂测定中的效果显著。本研究对此也进行了研究，总结如下。

1 仪器与试剂

1.1试剂分析

选取市场上销售的蛋白饮料、乳制饮料以及液体乳作为研究样品；羟基苯甲酸酯（TCI-GR公司提供）、脱氢乙酸（fluka公司提供）、山梨酸、甲酸（DR公司提供）、磷酸二氢钾、色谱纯、磷酸、乙腈为主要的试剂。

1.2仪器分析

ALC-110.4电子天平；美国Waters 1525型高效液相色谱仪，配备Kromasil C18柱，2996型二极管阵列检测器；XT-SPE-1固相萃取仪；PEP-SPE6cc固相萃取柱；上海科哲KH-3100薄层色谱系统；杭州奥盛KD200氮吹仪。endprint

1.3试验方法

将从市面上销售的牛奶和蛋白类饮料中提取的防腐剂作为研究对象，将其分为对照组与观察组，两组均进行0.2 g样品量的称取，对照组采用常规的TLC（薄层色谱法）进行检测，观察组则采用固相萃取-高效液相色谱法进行检测，对这两种检测方式的检测结果与产品回收率进行对比分析。

1.4样品制备分析

称取10 ml提取物，将其加入到25 ml的比色管中，然后再将乙腈加入，使其一直到刻度，进行二十分钟的超声处理，对样品进行提取，并且将蛋白进行科学合理的沉淀，然后再对其进行过滤处理。完成过滤操作之后，在鸡心瓶中放置5 ml滤液，将其进行多次旋转，蒸发到接近干，然后再将5ml甲酸水加入，对其进行超声洗涤，然后再对体上已经进行活化的PEP-SPE6cc固相萃取柱采用5 ml 10%的乙醇进行净化，同时采用5 ml水进行净化处理，进行甲醇脱洗之后，将其定容到5 ml，氮吹到2 ml，过0.45 μm滤膜上机，对色谱进行分析。

1.5高效液相色谱方法条件分析

①波长：230 nm、254 nm；②进样的体积：10 μl；③柱温：25 ℃；④流速：1.0 ml/min；⑤流动相：乙腈与0.4%磷酸溶液（30：60）；⑥色谱柱：5 μm，4.6 mm×250 mm。

1.6统计学方法

将数据进行录入，然后采用SPSS19.0统计学软件进行数据库的建立，计数资料进行方差齐性检查之后，进行？字2检验；计量资料则采用（x±s）进行表示。

2 结果

2.1两组检测方式检测结果对比

通过对比分析可知，对照组乳饮品、蛋白、牛奶中的纯度与分离率显著高于对照组，其中观察组中乳饮品的纯度99.80%，分离率为 98.80%；蛋白饮料的纯度99.80%，分离率为99.20%；牛奶的纯度99.70%，分离率为99.90%；对照组中乳饮品的纯度89.00%，分离率为 87.00%；蛋白饮料的纯度90.00%，分离率为88.00%；牛奶的纯度90.00%，分离率为88.00%。其次，观察组的样品回收率为99.80%，显著高于对照组的82.00%（P<0.05）。

2.2固相萃取-高效液相色谱法测定结果分析

选取乙腈作为液体乳、乳饮料和植物蛋白饮料中的萃取溶剂，选择 Agela Cleanert PEP-SPE 6cc固相萃取柱，目标化合物被萃取柱吸附后，分别采用5 ml10%甲醇与5 ml水淋洗净化，对目标化合物采用乙醇进行洗脱处理。图1代表对植物蛋白饮料进行加标处理之后，经过PEP-SPE 6cc固相萃取柱处理、乙腈提取沉淀过滤后检测波长为230 nm时的色谱图，图2则代表检测波长为254 nm时的色谱图。

采用紫外光谱仪进行扫描，发现脱氢乙酸与苯甲酸在230 nm处吸收较大，对羟基苯甲酸酯、山梨酸在254 nm处吸收较大。

2.3固相萃取-高效液相色谱法回收率与精密度

在同一种液体乳、含乳饮料、蛋白饮料中分别定加入苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸与羟基苯甲酸酯，添加量分别10、50、250 mg/kg，对其进行测定。通过分析可知，液体乳、含乳饮料、蛋白饮料的回收率均较高。

3 讨论

高效液相色谱法也叫“近代柱色谱”、“高分离度液相色谱”、“高速液相色谱”、“高压液相色谱”。这一检测方式主要是将液体作为流动相，采用高压输液系统来完成整个检测过程，这种检测方式属于色谱检测方法中一个重要组成部分[4]。实际上，固相萃取-高效液相色谱法的采用了选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理，通常是将液体样品溶液通过吸附剂，将其中被测物质保留，然后再将杂质采用适当强度的溶剂冲去，最终达到快速分离净化与浓缩的目的。固相萃取-高效液相色谱法这一检测方式中采用了敏感度较高的检测器、新型高压输液泵与高效微粒固定相，所以其检测效果更加显著[5]。其次，固相萃取-高效液相色谱法中使用了小口径柱与细小的高效液相色谱填料，在高压输液泵的作用下，溶液能够以较快的速度从色谱柱流过[6]。相对于以往的经典柱色谱法而言，这种检测方式的速度更快，同时还具备有高速、高效、高壓与高灵敏度等优点。

本研究主要采用固相萃取-高效液相色谱法对牛奶和蛋白类饮料中的防腐剂进行测定，结果显示出对照组乳饮品、蛋白、牛奶中的纯度与分离率显著高于对照组；观察组的样品回收率为99.80%，显著高于对照组的82.00%（P<0.05）。由此可知，牛奶和蛋白类饮料防腐剂测定中采取固相萃取-高效液相色谱法的效果显著，这种检测方式不仅能够对饮料含量进行准确、有效的测定，而且能够将饮料中的相关物质检测出来，有利于对饮料中的防腐剂进行有效检测[7]。

综上所述，固相萃取-高效液相色谱法具有重复性高、灵敏度高、纯度高等诸多优点，在临床上具有良好的推广价值。

参考文献：

[1]丁俭，李培武，李光明，等.在线固相萃取富集-高效液相色谱法快速测定牛奶中黄曲霉毒素M1[J].食品科学，2013，34（10）：289-293.

[2]赵清华，王伟，包凤琳，等.高效液相色谱法测定牛奶中氯羟吡啶的残留量[J].中国乳品工业，2016，44（6）：52-54.

[3]王伟，张鹏飞，王丹慧，等.高效液相色谱法测定牛奶中十二种磺胺类药物残留[J].中国乳品工业，2015，43（5）：54-56.

[4]闫子龙.固相萃取-高效液相色谱法测定绿茶中微量邻苯二甲酸酯[J].山东化工，2017，46（4）：73-74.

[5]张林祥，刘静，张敏莉，等.乳及乳制品中黄曲霉毒素M1检测方法的比较--固相萃取柱法和免疫亲和柱法[J].宝鸡文理学院学报（自然科学版），2016，36（3）：33-39.

[6]余婧，周彬彬.固相萃取-气相色谱-质谱法检测食品中腐霉利的残留量[J]. 食品安全质量检测学报，2017，8（2）：516-520.

[7]郑俊旦，朱杰丽.固相萃取-气相色谱法测定水果、蔬菜中的氯丹[J].化学试剂，2017，39（3）：263-265.

编辑/成森endprint