干式融浆机和水浴式融浆机溶解冷沉淀及溶解时间的长短对冷沉淀中凝血因子生物活性的影响

杨庆文+李广莹+丁文

[摘要]目的 探讨使用干式和水浴式融浆机两种方式融解冷沉淀以及融解时间长短对冷沉淀中凝血因子生物活性的影响，为达到更好的融浆效果提供依據。方法 选取2016年2月3～7日我院宝安中心血站提供的120袋冷沉淀（规格1.0 U/袋），采集时间相近，均不能超过5 d，将120袋冷沉淀随机分为两组，每组60袋，编为1组和2组。1组采用干式融浆机溶解，2组采用水浴式融浆机溶解，对120份置于不同融浆机37℃融解10、20、30 min的冷沉淀样品，分别测定FⅧ、VWF抗原、PT、TT、APTT及Fib。结果 两组的融浆效果及各个检测指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）。但随着融浆时间的延长，会导致APTT延长，FⅧ、VWF抗原活性下降，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 融浆时间延长会导致凝血因子FⅧ、VWF抗原活性下降，APTT延长，为达到更好的临床输血疗效，推荐融解冷沉淀的最佳时间为10 min。

[关键词]不同融浆方式；冷沉淀凝；血因子；融浆时间

[中图分类号] R457.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）08（c）-0118-03

[Abstract]Objective To investigate the use of dry and water-bath blood soluble machine for cryoprecipitation dissolution and the effect of length of dissolution time on the biological activity of coagulation factors in cryoprecipitate，in order to provide the basis for better results.Methods Altogether 120 bags of cryoprecipitate （Specification：1.0 U/Bag） with similar blood collection dates （less than 5 days） that were provided by our Central Blood Station of Baoan from February 3rd to February 7th in 2016 were selected and randomly divided into two groups （group 1 and group 2），with 60 bags in each group.group 1 adopted dry blood soluble machine for cryoprecipitation dissolution；while，group 2 adopted water-bath blood soluble machine for cryoprecipitation dissolution.FactorⅧ （FⅧ），von Willebrand factor antigen （vWF-Ag），prothrombin time （PT），thrombin time （TT），activated partial thromboplastin time （APTT） and plasma fibrinogen （Fib） of 120 cryoprecipitate samples that were placed in different blood soluble machines at 37℃ for 10，20 min and 30 min were determined.Results There was no statistically significant difference between group 1 and group 2 in the effects of blood plasma dissolution and all the indexes （P>0.05）；however，with the prolonging of dissolution time，prolonged APTT as well as decreased activity of FⅧ and VWF antigen were seen，with statistically significant difference （P<0.05）.Conclusion Prolonged blood plasma dissolution time will lead to decreased activity of FⅧ and VWF antigen as well as prolonged APTT，with statistically significant difference.To achieve better efficacy of clinical blood transfusion，the best time for cryoprecipitation dissolution is recommended to be 10 min.

[Key words]Different blood plasma dissolution methods；Cryoprecipitation；Coagulation factor，Dissolution time

冷沉淀是新鲜冰冻血浆在控制的温度下（0～4℃）融化后收集的冷不溶成分，为白色沉淀物[1]，加热至37℃时呈溶解状态，1 U血浆分离出的冷沉淀虽然只有几十毫升，但却含有大量的（约100 U）FⅧ和纤维蛋白原，冷沉淀可用于预防和治疗出血性疾病和凝血功能障碍性疾病，如儿童及轻型成人甲型血友病、弥散性血管内凝血、严重创伤、烧伤、感染和肝功能衰竭等的疾病[2-3]。由于冷沉淀中的FⅧ极不稳定，血管性假性血友病因子（von willebrand factor，VWF）的抗原稳定性也较差，所以，研究在冷沉淀的制作、保存及融解过程中如何保护凝血因子及VWF活性显得尤为重要，为保障临床输血疗效提供重要的理论依据[4]，本次实验选取我院中心血站提供的120袋冷沉淀，分别采用干式融浆机和水浴式融浆机对两组冷沉淀进行融解，探讨不同融浆方式对凝血因子活性的影响，同时比较在37℃融解过程中融浆时间的长短对凝血因子活性的影响，找到融浆的最佳方式及时间，从而更好地保护凝血因子的活性，减少凝血因子的损失，现将结果报道如下。endprint

1资料与方法

1.1一般资料

选取2016年2月3～7日我院宝安中心血站的冷沉淀120袋，规格为1 U/袋，冷沉淀的来源均为经过体检的健康人，无任何血液系统疾病。将其随机分为两组，每组60袋，分别编为1组和2组，1组采用干式融浆机进行融浆，2组采用水浴式融浆机。

1.2主要仪器和试剂

美国美德声科学技术公司生产的Barkey博科微电脑干式血浆速溶机；PT、TT、APTT、FⅧ及Fib检测系列试剂盒；武汉贝索医疗器械有限公司生产的Baso全温控监测智能化血浆解冻仪；全自动血凝仪ACL TOP 700；AIR TE CH无菌操作台；VWF抗原检测采用ELISA法。

1.3标本留样

分别在37℃溶解10、20、30 min时在超净工作台上使用无菌操作取出1、2组冷沉淀0.5 ml留样待检。

1.4操作方法

干式融浆法：将冷沉淀血袋放在2个融水膜袋之间，盖好顶盖，按“Start”键启动设备，开始融浆；水浴式融浆：将冷沉淀置于解凍槽内，盖好顶盖，按“Start”键启动设备，开始融浆。

1.5检测项目

检测两种融浆方式以及溶解10、20、30 min 3个时间段对所采集样本的FⅧ、VWF抗原、PT、TT、APTT及Fib进行检测。

1.6统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

两组各时间点PT、TT、APTT及FⅧ、VWF抗原、Fib等各项指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；与10 min时比较，1组20、30 min的PT、TT、APTT时间均延长，VWF抗原、FⅧ的含量下降，差异有统计学意义（P<0.05）。3个时间段两组Fib含量未出现明显变化。与10 min时比较，2组20、30 min的PT、TT、APTT时间均延长，VWF抗原、FⅧ的含量下降，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

3讨论

本研究结果可见，采用干式及水浴式二种不同的融浆仪器溶解冷沉淀后，PT、APTT、TT、Fib、FⅧ及VWF抗原检测值的差异无统计学意义（P>0.05），且融浆效果均已达标（冷沉淀溶解后外观呈淡黄色澄清液体，无色泽异常，无纤维蛋白析出），因此日常工作中可采用干式或水浴式溶浆机进行冷沉淀的解冻。

干式和水浴式融浆机的大致原理如下：干式融浆机主要采用微电脑控制，数字显示温度、时间，血液置于恒温水囊之间解冻，血浆不接触到水；水浴式融浆机利用37℃恒温水循环的摆动功能，能够使融浆更加快速、充分，瞬间温度差很小[5-6]。

解冻的温度与时间可以影响冷沉淀的解冻质量[7]，本研究采用固定溶浆温度37℃下，观察冷沉淀中凝血因子活性在不同融浆时间段活性如何变化的平行实验进行研究，结果提示，在37℃温度条件下溶浆时间越长，融浆效果越好。但随着融浆时间的延长，尤其达到30 min时，冷沉淀中的VWF抗原、FⅧ活性会大幅度降低，APTT时间明显延长，差异有统计学意义（P<0.05）。

目前，随着成分输血在临床上的大力推广，静脉输注冷沉淀的应用范围和用量呈逐年上升的趋势[8-9]，主要体现在以下几个方面：F缺乏患者；弥散性血管内凝血的患者；FⅫ因子缺乏的患者；纤维蛋白原缺乏患者[10-11]。冷沉淀中大量纤维结合蛋白，能有效清除体内非毒性物质，较好地解决细胞粘连、炎症等病理现象，同时可促进创伤愈合，尤其对于大面积烧伤、创伤和严重感染的患者效果较为显著[12]。同时，冷沉淀可用于治疗FⅡ、FⅤ、FⅦ缺乏的患者，或者作为血浆容量扩张剂使用，还可以用做分离其他蛋白的原料[13-14]。为保证冷沉淀的输注疗效，冷沉淀从制备、保存、融浆到临床输注的各环节，都应进行严格质量控制，尽可能在保障融浆效果佳的情况下，缩短融浆时间，以减少不稳定因子的失活，从而确保临床用血安全有效。

综上所述，本研究可以看出，从冷沉淀的制作、储备、融解到临床使用的整个过程，作为输血科的工作者应牢固树立保护凝血因子、减少流失的意识。同时笔者查阅相关文献，得知在冷沉淀经过低温冰冻后，若再加温融化，当融化时间太短时，会出现血浆纤维蛋白析出，不能用于临床输注的现象，也即温度对冷沉淀中有效成分活性的影响是一种不可忽略的因素[15]。因此，本研究在冷沉淀的解冻过程中应注意在融浆时间和温度之间找到一个平衡点，这样既能保证凝血因子流失最小化，又可以减少纤维蛋白的析出。

[参考文献]

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（收稿日期：2017-06-15 本文編辑：任 念）endprint