蛋氨酸锌对蛋鸡生产性能、肠道形态、组织学结构及盲肠微生物菌群的影响

陈娜娜，马莲香，侯川川，何俊娜，郭 阳，刘 兵，余东游

（浙江大学动物科学学院，农业部华东动物营养与饲料重点实验室，浙江杭州 310058）

蛋氨酸锌对蛋鸡生产性能、肠道形态、组织学结构及盲肠微生物菌群的影响

陈娜娜，马莲香，侯川川，何俊娜，郭 阳，刘 兵，余东游*

（浙江大学动物科学学院，农业部华东动物营养与饲料重点实验室，浙江杭州 310058）

本试验旨在研究饲粮中添加蛋氨酸锌对蛋鸡蛋品质、肠道形态、组织学结构及盲肠微生物菌群的影响，以确定蛋氨酸锌在蛋鸡饲粮中的科学用量。选择健康的20周龄海兰白蛋鸡540只，随机分成6个组，每个组6个重复，每个重复15只鸡。I组为对照组，饲喂基础饲粮，试验II、III、IV、V、VI组分别在基础饲粮中添加70、140、350、700、1 400 mg/kg蛋氨酸锌。正试期8周。结果表明：与对照组相比，II、III组产蛋率和日产蛋重显著提高（P＜0.05），料蛋比和不合格蛋率显著降低（P＜0.05），蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位显著提高（P＜0.05），十二指肠、回肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度显著提高（P＜0.05），盲肠内容物中双歧杆菌、乳杆菌数量显著增加（P＜0.05），大肠杆菌数量显著减少（P＜0.05）；而VI组产蛋率和日产蛋重极显著降低（P＜0.01），料蛋比和不合格蛋率极显著升高（P＜0.01），蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位极显著降低（P＜0.01），十二指肠、回肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度极显著降低（P＜0.01），双歧杆菌和乳杆菌数量极显著减少（P＜0.01），大肠杆菌数量极显著增加（P＜0.01）；VI组蛋鸡十二指肠和回肠结构发生损伤。由此可见，适量的蛋氨酸锌可提高蛋鸡产蛋性能和蛋品质、改善肠道形态、优化盲肠微生物区系，但继续提高添加水平会降低其对蛋鸡产蛋性能、蛋品质和肠道健康的正面效应，甚至会引起负面效应。根据二次曲线拟合模型得出蛋氨酸锌在20～27周龄蛋鸡玉米—豆粕型饲粮中的适宜添加水平为50～100 mg/kg。

蛋氨酸锌；蛋鸡；生产性能；肠道形态；组织学结构；微生物菌群

蛋氨酸锌是由蛋氨酸与无机锌在特定条件下反应生成的具有独特环状的金属螯合物，具有很好的化学稳定性和较高的生物学效价，是一种高效的有机微量元素[1]。许多研究报道，蛋氨酸锌不仅可以提高蛋鸡生产性能、提高肉鸡生长性能、改善蛋品质，而且可以增强家禽的抗应激、免疫和抗氧化能力等[2-3]。前人研究[4-5]表明，氨基酸螯合锌可提高断奶仔猪、肉仔鸡生产性能，改善肠道形态、优化盲肠微生物区系等，但关于蛋氨酸锌对蛋鸡肠道影响的研究还鲜见报道。蛋氨酸锌的适宜添加量与蛋鸡品种、生理阶段、试验条件、研究方法和评定指标等有关，为此，本试验以海兰白蛋鸡为研究对象，探讨蛋氨酸锌对蛋鸡生产性能、蛋品质、肠道形态、组织学结构及盲肠微生物菌群的影响，旨在确定蛋氨酸锌在蛋鸡饲粮中的科学用量，为生产实践提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 蛋氨酸锌由山东济宁和实生物科技有限公司提供，产品批号为2014080701，锌的含量≥17.72%，蛋氨酸含量≥79.34%。

1.2 饲养管理与试验设计 选取采食（89.17±1.27）g/d正常、体重、（1.36±0.03）kg相近、产蛋率（80.23%±0.98%）一致的健康海兰白蛋鸡540只，20周龄，采用封闭式鸡舍3层阶梯式笼养。依鸡场常规方法进行饲养管理，自由采食、饮水。

本试验采用单因子试验设计，随机分成6个组，每组6个重复，每个重复15只鸡。预试期2周，正试期8周。预试期饲喂玉米—豆粕型基础饲粮（锌含量为34.21 mg/kg）。I组为对照组，饲喂基础饲粮，试验II、III、IV、V、VI组分别在基础饲粮中添加70、140 、350 、700、1 400 mg/kg蛋氨酸锌（以锌计）。基础饲粮参照美国NRC（1994） 《鸡的营养需要》和 《鸡的饲养标准》 （NY/T33-2004），并结合海兰白蛋鸡饲养手册配制，基础饲粮组成及营养成分见表1，以粉料形式饲喂蛋鸡。

1.3 样品采集与制备 以重复为单位，每个重复、每周末同时采蛋5枚，于12 h内进行蛋品质测定。试验第8周末，每个重复随机选取1只健康且体重相近的蛋鸡进行屠宰。在十二指肠和回肠中段各取2 cm的肠管，用生理盐水小心冲洗后迅速置于4%中性甲醛中固定。用经消毒的绳子于盲肠与回肠接连处打结，剪下盲肠，得到整段盲肠及内容物，切口处消毒，立即放入液氮中，以备微生物菌群分析用。

1.4 测定指标与方法

表1 基础饲粮组成及营养成分

1.4.1 蛋品质 使用全自动蛋品质分析仪（DET 6 000，日本Nabel公司）测定蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位等蛋品质指标。

1.4.2 肠道形态、组织学结构 经固定的标本经水洗、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋等处理后，用德国Leica RM2255石蜡切片机制成6 μm的切片，经苏木精-伊红（HE）染色后，在Eclipse 80i光学显微镜（4×10）下选择3个典型视野（绒毛完整、走向平直），用DigiLab II-C图像分析软件测量每个视野中的10根绒毛高度、隐窝深度，并计算绒毛高度/隐窝深度。

1.4.3 肠道组织学结构 在Eclipse 80i显微镜下观察十二指肠和回肠的组织学结构，并用DigiLab II-C图像采集系统采集相应的组织切片图像。

1.4.4 盲肠微生物菌群 在超净台内采集盲肠内容物0.5 g于灭菌带玻璃珠的三角瓶中，加入灭菌生理盐水49.5 mL，震荡5 min，此菌液稀释度为10-2，用移液枪吸取稀释度为10-2的菌液1 mL置于盛有9 mL灭菌生理盐水的试管中，震荡5 min，制成稀释度为10-3的菌液，依次进行10-4、10-5、10-6、10-7倍比稀释。每种细菌选择3个适宜的稀释度，每个稀释度3个重复，吸取100 μL接种于选择性培养基（大肠杆菌：麦康凯培养基；肠球菌：EC培养基；双歧杆菌：BS培养基；乳杆菌：LBS培养基）上，用灭菌曲玻棒小心推匀。大肠杆菌于37℃有氧培养24 h，双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌于37℃厌氧培养48 h。根据菌落可数性原则，选择合适的浓度梯度进行平板菌落计数，最后用每克盲肠内容物所含细菌数的对数[lg（CFU/g）]表示。培养基购自杭州百思生物技术有限公司。

1.4.5 基础日粮中锌含量测定 称取基础饲粮0.5 g置于消化管中，加入6 mL浓硝酸，置于CEMMARS5微波消解仪中消解，消解完成后于DV4 000型精确控温电热消解器中赶酸，冷却后用去离子水定容至100 mL。利用ICE 3 000原子吸收光谱仪测定试样中锌含量。

1.5 统计分析 采用SPSS 18.0软件的单因素方法分析（One-Way ANOVA）程序进行统计分析。用Bonferroni法进行差异显著性检验。结果均以平均值和集合标准误（SEM）表示，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。利用曲线估计模型，以产蛋率、日产蛋重、料蛋比、不合格蛋率等作为评价指标，进行二次曲线拟合分析，计算蛋氨酸锌的适宜添加水平。

2 结 果

2.1 蛋氨酸锌对蛋鸡产蛋性能的影响 由表2可知，与对照组相比，II、III组产蛋率、日产蛋重显著提高（P＜0.05），料蛋比、不合格蛋率显著降低（P＜0.05）；IV、V组与对照组差异不显著（P＞0.05）；而VI组产蛋率、日产蛋重极显著降低（P＜0.01），料蛋比、不合格蛋率极显著升高（P＜0.05）。

以产蛋率为评价指标，建立二次曲线方程：Y=-0.000007X2+0.0007X+89.683（R2=0.8692，Y=产蛋率，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为50 mg/kg时，产蛋率最高。以日产蛋重为评价指标，建立二次曲线方程：Y= -0.00005X2+0.007X+722.12（R2=0.8561，Y=日产蛋重，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为70 mg/kg时，日产蛋重最大。以料蛋比为评价指标，建立二次曲线方程：Y= 0.0000001X2－ 0.00002X+2.0282（R2=0.8235，Y=料蛋比，X=蛋氨酸锌添加水平），预期蛋氨酸锌添加水平为100 mg/kg时，料蛋比最低。以不合格蛋率为评价指标，建立二次曲线方程：Y=0.000001X2－0.00016X+0.488（R2=0.862 2，Y=不合格蛋率，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为80 mg/kg时，不合格蛋率最低。

2.2 蛋氨酸锌对蛋鸡蛋品质的影响 由表3可知，饲粮中添加蛋氨酸锌对鸡蛋的蛋黄颜色无显著影响（P＞0.05）。与对照组相比，II、III组显著提高了鸡蛋的蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位（P＜0.05），IV、V组与对照组差异不显著（P＞0.05），而VI组蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位极显著降低（P＜0.01）。

以蛋壳强度为评价指标，建立二次曲线方程：Y=－0.0000007X2+0.00007X+3.6526（R2=0.7615，Y=蛋壳强度，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为50 mg/kg时，蛋壳强度最大。以蛋壳厚度为评价指标，建立二次曲线方程：Y=－0.0000003X2+0.00006X+0.3617（R2=0.7394，Y=蛋壳厚度，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为100 mg/kg时，蛋壳厚度最大。以蛋白高度为评价指标，建立二次曲线方程：Y=－0.000 001X2+0.0002X+8.3246（R2=0.788 2，Y=蛋白高度，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为100 mg/kg时，蛋白高度最高。

2.3 蛋氨酸锌对蛋鸡肠道形态的影响 由表4可知，饲粮中添加蛋氨酸锌对蛋鸡十二指肠、回肠隐窝深度无显著影响（P＞0.05）。与对照组相比，II、III组显著提高了十二指肠、回肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度（P＜0.05），IV、V组与对照组差异不显著（P＞0.05），而VI组十二指肠、回肠的绒毛高度/隐窝深度极显著降低（P＜0.01）。

表2 蛋氨酸锌对蛋鸡产蛋性能的影响

表3 蛋氨酸锌对蛋鸡蛋品质的影响

表4 蛋氨酸锌对蛋鸡肠道形态的影响

以十二指肠绒毛高度为评价指标，建立二次曲线方程：Y=-0.0003X2+0.03X+12 44.8（R2=0.818 9，Y=十二指肠绒毛高度，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为50 mg/kg时，十二指肠绒毛高度最高。以十二指肠绒毛高度/隐窝深度为评价指标，建立二次曲线方程：Y=-0.000 001X2+0.000 2X+7.3455（R2=0.7871，Y=十二指肠绒毛高度/隐窝深度，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为100 mg/kg时，十二指肠绒毛高度/隐窝深度最大。以回肠绒毛高度/隐窝深度为评价指标，建立二次曲线方程：Y=-0.000002X2+0.0004X+6.755（R2=0.7652，Y=回肠绒隐比，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为100 mg/kg时，回肠绒毛高度/隐窝深度最大。

2.4 蛋氨酸锌对蛋鸡肠道组织学结构的影响 如图1所示，在十二指肠部分，I、II、III、IV、V组的十二指肠组织结构正常，肠壁由黏膜、黏膜下层、肌层和外膜4层结构构成。黏膜包括黏膜上皮、固有层、黏膜肌层，其中黏膜上皮与固有层向肠腔内隆起形成指状的肠绒毛。肠绒毛结构较完整，排列较整齐，肠上皮细胞轮廓清晰，染色鲜明，排列规则。但VI组有2例出现十二指肠肠绒毛大量脱落，固有层裸露，绒毛排列杂乱无章。

在回肠部分，I组回肠组织结构正常，黏膜、黏膜下层、肌层和固有层构成了完整的回肠肠壁。肠上皮细胞染色鲜明，排列整齐，且肠绒毛排列较规则。II、III、IV、V组观察结果与I组相似。但VI组有3例出现肠绒毛变稀疏、严重断裂，肠绒毛大量脱落。

以上结果表明，饲粮中添加1 400 mg/kg蛋氨酸锌会对蛋鸡十二指肠、回肠造成一定程度的损伤，对肠上皮结构的完整性和肠道形态造成负面影响。

图1 蛋氨酸锌对蛋鸡肠道组织学结构的影响（4×10）

2.5 蛋氨酸锌对蛋鸡盲肠微生物菌群的影响 由表5可知，饲粮中添加蛋氨酸锌对蛋鸡盲肠内容物中的肠球菌无显著影响（P＞0.05）。与对照组相比，II、III组显著提高了蛋鸡盲肠内容物中的双歧杆菌、乳杆菌数量（P＜0.05），显著降低了大肠杆菌数量（P＜0.05）；IV、V组与对照组差异不显著（P＞0.05）；而VI组蛋鸡盲肠内容物中的双歧杆菌、乳杆菌数量极显著降低（P＜0.01），大肠杆菌数量极显著提高（P＜0.01）。

以双歧杆菌数量为评价指标，建立二次曲线方程：Y=-0.000001X2+0.0001X+8.7597（R2=0.7142，Y=双歧杆菌数量，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为50 mg/kg时，双歧杆菌数量最多。以乳杆菌数量为评价指标，建立二次曲线方程：Y=-0.000005X2+0.001X+8.0326（R2=0.8106，Y=乳杆菌数量，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为100 mg/kg时，乳杆菌数量最多。以大肠杆菌数量为评价指标，建立二次曲线方程：Y=0.000 004X2-0.0004X+6.6531（R2=0.6935，Y=大肠杆菌数量，X=蛋氨酸锌添加水平，P＜0.01），预期蛋氨酸锌添加水平为50 mg/kg时，大肠杆菌数量最少。

表5 蛋氨酸锌对蛋鸡盲肠微生物菌群的影响 lg(CFU/g)

3 讨 论

3.1 蛋氨酸锌对蛋鸡产蛋性能的影响 根据许甲平等[3]、王希国[6]报道，蛋鸡饲粮中添加40～70 mg/kg蛋氨酸锌可显著提高蛋鸡产蛋率，降低料蛋比和破壳蛋率。周海涛等[7]研究发现，蛋氨酸锌在产蛋后期蛋鸡（50～58周龄）饲粮中的适宜添加量为35～70 mg/kg。杨自军等[8]、王安等[9]报道，蛋鸡饲粮中添加3 000～4 000 mg/kg 硫酸锌可显著降低蛋鸡产蛋率，提高料蛋比。本试验结果显示，适量的蛋氨酸锌可提高蛋鸡产蛋性能，而添加过量会对产蛋性能造成负面影响。原因可能是适量的蛋氨酸可提高蛋鸡体内锌依赖酶活性，促进蛋白质、碳水化合物等营养物质的吸收和利用[1-2]，从而提高蛋鸡产蛋率，降低料蛋比和不合格蛋率，而过量的蛋氨酸锌可能会拮抗饲粮中钙、铜、铁等微量元素，降低饲粮中养分利用率，且过量添加可能会使蛋鸡卵巢发生损伤[2,8]，从而降低蛋鸡产蛋率，提高料蛋比和不合格蛋率。

3.2 蛋氨酸锌对蛋鸡蛋品质的影响 蛋品质是养殖者和消费者共同关注的重要指标，主要包括蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度、哈氏单位和蛋黄颜色等[10]。许甲平[3]、王希国[6]报道，蛋鸡饲粮中添加40～70 mg/kg蛋氨酸锌可显著提高蛋壳厚度、强度和蛋壳质量。本试验发现，适量的蛋氨酸锌会提高蛋品质，但添加过量反而会对蛋品质造成负面影响。可能原因有3个方面：第一，适量的蛋氨酸锌促进碳酸酐酶的产生，增加蛋壳腺中的碳酸氢根的浓度，促进碳酸钙的沉积，使得蛋壳变厚，但添加过量可能会对钙产生拮抗作用，使蛋壳变薄[11]；第二，蛋壳强度不仅与蛋壳厚度有关，还与基质薄膜和蛋壳超微结构有关，适量的蛋氨酸锌可提高蛋蛋壳腺内的锌指蛋白转录因子活性，促进蛋壳腺内某些基质蛋白表达，改善蛋壳超微结构[12]，从而提高蛋壳强度，而过量添加可能会引起锌指蛋白构象发生异常，影响基质蛋白的表达，从而降低蛋壳强度；第三，适量的蛋氨酸锌可以促进羧酸酶、氨基酰转移酶等的合成，从而促进体内蛋白质的合成转运，使蛋白含量和蛋白粘稠度增加，提高蛋白高度和哈氏单位，但过量添加会使锌依赖酶构象发生变化，导致机体蛋白质的合成发生异常[13]，蛋白高度和哈氏单位下降。

3.3 蛋氨酸锌对蛋鸡肠道形态的影响 绒毛高度、隐窝深度、绒毛高度/隐窝深度是衡量小肠消化吸收功能的重要指标，绒毛高度和隐窝深度分别反映小肠的消化吸收能力和上皮细胞的成熟率，绒毛高度/隐窝深度综合反映小肠的消化吸收功能状态[14]。谢正军等[15]、Li[16]研究表明，畜禽饲粮中添加适量的锌可以改善肠道形态；但陈亮[17]、王希春[18]、高竞铎等[19]报道，长期饲喂高剂量的锌会对肠道结构造成负面影响。Ma等[4]报道，在肉鸡饲粮中添加90 mg/kg甘氨酸锌可显著提高十二指肠绒毛高度、降低回肠隐窝深度。王子旭等[20]报道，肉鸡饲粮中添加1 000 mg/kg硫酸锌显著降低肉鸡十二指肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度。本试验结果显示，适量的蛋氨酸锌可显著提高蛋鸡十二指肠、回肠的绒毛高度和回肠绒毛高度/隐窝深度，表明小肠的肠道形态得到改善，消化吸收功能增强，但添加过量会降低十二指肠、回肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度，降低消化吸收功能。原因可能是适量的蛋氨酸锌能提高肠上皮细胞锌依赖酶（DNA聚合酶、RNA聚合酶）的活性，增强锌指转录因子的稳定性，从而促进肠上皮细胞增殖，肠绒毛变高、绒毛高度/隐窝深度上升[21]；适量的蛋氨酸锌能提高肠道Cu/Zn-SOD活性、增加金属硫蛋白（MT）含量，从而提高肠道清除自由基的能力，保护肠上皮细胞的生物膜，维持肠上皮结构的完整性，改善肠道形态[1,10]，而过量添加可能会引起DNA聚合酶、RNA聚合酶、锌指蛋白Cu/Zn-SOD、金属硫蛋白构象的异常，肠上皮细胞增殖受阻，清除自由基的能力减弱[2,14]，造成肠绒毛变矮，绒毛高度/隐窝深度下降，肠黏膜受损。

3.4 蛋氨酸锌对蛋鸡肠道组织学结构的影响 动物肠道结构的完整性对动物健康状况、消化吸收、免疫有重要的生物学意义[22]。前人研究[15-19]表明，畜禽饲粮中适量的锌可以改善肠道形态，但长期饲喂高剂量的锌会对肠道结构造成负面影响。高竞铎等[19]报道，小鼠饲粮中4 000 mg/kg硫酸锌会引起十二指肠黏膜上皮细胞发生变性、坏死。罗治彬等[23]发现，在大鼠饲粮中添加1 500 mg/kg硫酸锌，试验第7周时会引起十二指肠黏膜上皮细胞高度水肿。王子旭等[20]报道，肉鸡饲粮中添加1 000 mg/kg硫酸锌，饲喂45 d后发现十二指肠黏膜上皮细胞萎缩，黏膜上皮脱落，纹状缘变薄，固有层裸露。本试验发现，蛋鸡饲粮中添加70～700 mg/kg对肠道组织学结构无负面影响，但添加水平达到1 400 mg/kg会引起蛋鸡十二指肠、回肠肠绒毛大量脱落、固有层裸露，严重破坏肠上皮结构的完整性和肠道的机械屏障，不利于肠道健康的维持。造成这一结果的原因可能是过量的蛋氨酸锌在肠上皮细胞大量沉积，造成锌中毒，使膜性结构的脂质双分子层的生理性稳态和细胞表面糖蛋白含量发生变化，ATP酶结构损伤，ATP生成减少、膜的主动运输障碍，细胞内水钠潴留，内质网和高尔基体水肿，线粒体嵴破坏，最终造成细胞损伤或坏死[24]。

3.5 蛋氨酸锌对蛋鸡盲肠微生物菌群的影响 动物肠道内存在一个复杂的微生态系统，肠道中的有益菌（双歧杆菌、乳杆菌等）与肠上皮紧密结合，形成肠道的生物屏障，通过占位作用竞争抑制病原菌与肠上皮结合，从而抵御病原微生物的入侵和定植，维持肠道微生态系统的平衡[25]。易力等[26]报道，乳鸽日粮中添加2 mg/L蛋氨酸锌有利于维持肠道菌群的微生态平衡，但当添加水平达到10 mg/L时，乳鸽肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌数量极显著减少。本试验结果显示，饲粮中添加70、140 mg/kg蛋氨酸锌可显著增加蛋鸡盲肠内容物中双歧杆菌、乳杆菌数量，显著减少大肠杆菌数量，表明盲肠微生物区系得到优化，调节和维持了肠道微生态平衡，但添加水平达到1 400 mg/kg反而极显著增加了大肠杆菌数量，减少了双歧杆菌和乳杆菌数量，表明蛋鸡肠道菌群失调，生物屏障遭到破坏。造成这一结果的原因可能是适量的蛋氨酸锌能促进肠道上皮中的淋巴细胞、杯状细胞以及固有层中的浆细胞增殖，提高肠道细胞和体液免疫水平[27]，肠道微生态处于平衡状态，有益菌成为优势菌群，而添加过量可能会造成杯状细胞、淋巴细胞以及浆细胞锌中毒，引起肠道黏液以及免疫蛋白A(IgA)合成和分泌减少，肠道免疫功能下降[28]，大肠杆菌等有害菌得以入侵和定植，打破肠道微生态平衡。

4 结 论

本试验结果表明，饲粮中添加适量的蛋氨酸锌可提高蛋鸡产蛋性能和蛋品质、改善肠道形态、优化盲肠微生物区系，但继续提高添加水平会降低其对蛋鸡产蛋性能、蛋品质和肠道健康的正面效应，甚至会引起负面效应。根据二次曲线拟合模型得出蛋氨酸锌在20～27周龄蛋鸡玉米—豆粕型饲粮中的适宜添加水平为50～100 mg/kg。

[1] 张伟, 陈志虹. 氨基酸螯合锌的营养及应用研究进展[J].饲料博览, 2001, (11): 10‐13.

[2] 苗静平. 蛋氨酸锌在动物生产上的应用研究[J]. 饲料广角, 2014, (19):42‐43.

[3] 许甲平, 鲍宏云, 冯一凡. 蛋氨酸锌对产蛋鸡产蛋性能和非特异性免疫功能的影响[J]. 饲料工业, 2012, 33(20): 58‐61.

[4] Ma W, Niu H, Feng J, et al. Ef f ects of zinc glycine chelate on oxidative stress, contents of trace elements, and intestinal morphology in broilers[J]. Biol Trace Ele Res, 2011, 142(3): 546‐556.

[5] 郑立鑫. 不同锌源对肉仔鸡肠道形态及金属硫蛋白表达的影响[J]. 中国饲料, 2013, (20): 7‐10.

[6] 王希国. 蛋氨酸锌对产蛋后期母鸡生产与非特异免疫性能的影响[D]. 哈尔滨: 东北农业大学, 2002: 34‐36.

[7] 周海涛. 复合氨基酸锌对蛋鸡生产性能和蛋品质影响的研究[D]. 成都: 四川农业大学, 2004: 8‐10.

[8] 杨自军, 王哲. 高锌日粮对鸡的急性毒性效应[J]. 豫西农专学报, 1992, (5): 31‐32.

[9] 王安, 单安山. 饲料中过量铜、锌对产蛋鸡生产性能和蛋品质的影响[J]. 饲料与畜牧, 1989, (1):15‐18.

[10] 张召付. 饲料级蛋氨酸锌的应用研究[J]. 中国饲料添加剂, 2015, 2(3): 5‐7.

[11] Tsai Y H. Ef f ects of nanosize zinc oxide on zinc retention, eggshell quality, immune response and serum parameters of aged laying hens[J]. Anim Feed Sci Tech, 2016, 213(4): 99‐107.

[12] Solomon S E. The eggshell: strength, structure and function[J]. Br Poult Sci, 2010, 51 (sup1): 52‐59.

[12] Hartwig A. Zinc fi nger proteins as potential targets for toxic metal ions:dif f erential ef f ects on structure and function[J]. Antioxid Redox Signal, 2001, 3(4): 625‐34.

[14] Hu Y. Effects of fermented rapeseed meal on antioxidant functions, serum biochemical parameters and intestinal morphology in broilers[J]. Food Agr Immunol, 2015, 27(2): 1‐12.

[15] 谢正军, 刘国花. 壳聚糖锌对断奶仔猪小肠组织学形态与功能的影响[J]. 中国畜牧杂志, 2012, 48(1): 32‐37.

[16] Li B T. Small intestinal morphology and bacterial populations in ileal digesta and feces of newly weaned pigs receiving a high dietary level of zinc oxide[J]. Can Vet J La R Vet Can, 2002, 81(4): 511‐516.

[17] 陈亮. 高锌日粮长期暴露对断奶仔猪影响的免疫病理学研究[D]. 合肥: 安徽农业大学, 2008: 34

[18] 王希春. 高锌日粮对断奶仔猪肠道黏膜免疫及黏膜上皮形态的影响[J]. 中国兽医学报, 2010, 30(10):1371‐1376.

[19] 高竞铎, 王改玲. 高锌饲料对小鼠消化道组织学结构的影响[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2016, 3(1): 214‐216.

[20] 王子旭. 日粮锌、硒水平对肉鸡肠道黏膜屏障结构的影响[J]. 动物医学进展, 2003, 24(4): 99‐102.

[21] Riordan J F. The role of metals in enzyme activity[J]. Anna Clin Lab Sci,1977, 7(2): 119‐129.

[22] Groschwitz K R, Hogan S P. Intestinal barrier function: molecular regulation and disease pathogenesis[J]. J Allergy Clin Immunol, 2009, 124(1): 21‐22.

[23] 罗治彬, 吴嘉惠, 史景泉, 等. 中毒剂量锌对 大鼠小肠粘膜超微结构的影响[J]. 营养学报, 1999, 2(1): 34‐37.

[24] 丁小波, 文利新, 牛同利. 微量元素锌的毒性研究[J]. 微量元素与健康研究, 2007, 24(6): 64‐66.

[25] Kahrstrom C. Intestinal microbiota in health and disease[J]. Nature, 2016, 535(70): 47.

[26] 易力, 汪洋, 范春永, 等. 不同浓度的蛋氨酸锌对乳鸽肠道菌群的影响[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2010, (5): 146‐147.

[27] Shen J, Chen Y, Wang Z, et al. Coated zinc oxide improves intestinal immunity function and regulates microbiota composition in weaned piglets[J]. Br J Nut, 2014, 111(12): 2123‐2134.

[28] Djoko K Y, Ong C L, Walker M J, et al. The Role of Copper and Zinc Toxicity in Innate Immune Defense against Bacterial Pathogens[J]. J Biol Chem, 2015, 290(31): 18954‐18961.

Ef f ects of Zinc-methionine on Performance, Intestinal Morphology, Histological Structure and Cecal Microbial Flora of Laying Hens

CHEN Na‐na, MA Lian‐xiang, HOU Chuan‐chuan, HE Jun‐na, GUO Yang, LIU Bing, YU Dong‐you*

(College of Animal Science, Zhejiang University, Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed in East China of MOA , Zhejiang Hangzhou 310058, China)

This experiment was conducted to investigate the effects of zinc‐methionine on egg quality, intestinal morphology and histological structure and cecal microbial flora to determine the scientific doses in laying hens. Five hundred and forty 20‐week‐old healthy Hyline White laying hens were randomly allocated to 6 groups with 6 replicates per group and 15 birds per replicate. Hens in group I were fed a basal diet as the control, and those in group II, III, IV, V and VI

the basal diets supplemented with 70, 140, 350 ,700 and 1 400 mg/kg zinc‐methionine, respectively. The trail lasted for eight weeks. The results showed as follows: Compared with the control group, laying rate, daily egg mass, the ratio of feed to egg were notably increased and unqualif i ed egg rate were signif i cantly decreased (P＜0.05), eggshell strength, eggshell thickness, albumin height and haugh unit were remarkably improved (P＜0.05), villus height and ratio of villus height to crypt depth were notably increased (P＜0.05), the number of Bif i dobacteria and Lactobacilli was remarkably increased and the amount of Escherichia coli was notably decreased (P＜0.05) in the cecal contents of laying hens in group II and III, however, laying rate, daily egg mass, the ratio of feed to egg were notably decreased and unqualif i ed egg rate were signif i cantly increased (P＜0.01), eggshell strength, eggshell thickness, albumin height and haugh unit were remarkably reduced (P＜0.01), villus height and ratio of villus height to crypt depth were notably decreased (P＜0.01), the amount of Escherichia coli was extremely increased (P＜0.01) and the number of Bifidobacteria and Lactobacilli was notably decreased (P＜0.01) in group VI. Damage occurred in duodenum and ileum of hens in group VI. The results indicated that dietary supplementation with optimal doses of zinc‐methionine upregulated laying performance and egg quality, improved the intestinal morphology, optimized cecal microbiota of laying hens, but continuously improving the supplemental levels would lower its positive effect and even trigger negative effects. According to the quadratic curve fi tting model, the optimal supplemental level of zinc‐methionine is 50～100 mg/kg in the corn‐soybean meal diet of laying hens during the peak period.

Zinc‐methionine; Laying hens; Performance; Intestinal morphology; Histological structure; Cecal microbial fl ora

S831.5

A

10.19556/j.0258-7033.2017-09-102

2016-11-29；修回时间：2017-01-13

“十二五”国家科技支撑计划（2013BAD20B02）；农业部饲料质量安全监管专项（2014）

陈娜娜（1990-），女，山东人，硕士，研究方向为动物营养与饲料添加剂，E-mail: nanachen1207@163.com

* 通讯作者：余东游（1967-），男，浙江人，研究员，主要从事动物营养与饲料科学的教研工作，E-mail: dyyu@zju.edu.cn