乳腺癌组织中ZNF217和p53的表达及其临床意义
2017-09-20陶德友朱文波
陶德友 朱文波
●临床研究
乳腺癌组织中ZNF217和p53的表达及其临床意义
陶德友 朱文波
目的 探讨乳腺癌组织中锌指蛋白217(ZNF217）和p 53蛋白的表达特点及其临床意义。方法 采用免疫组化En Vision法检测80例乳腺癌（乳腺癌组）和对应癌旁组织（对照组）中ZNF217和p 53蛋白的表达情况，分析上述指标与临床病理因素（年龄、肿瘤大小、分型、组织学分级、临床分期及淋巴结转移）的关系，以及乳腺癌组织中ZNF217与p 53表达的相关性。结果 乳腺癌组织中ZNF217和p 53蛋白阳性表达率分别为71.25%（57/80）和73.75%（59/80），高于对应癌旁组织的20.00%（16/80）和10.00%（8/80），差异均有统计学意义（均P＜0.01）；ZNF217和p 53蛋白表达均与乳腺癌临床分期及淋巴结转移有关（均P＜0.01），而均与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型及分级无关(均P＞0.05）；乳腺癌组织中ZNF217与p 53的表达呈正相关（P＜0.05）。结论 乳腺癌组织中ZNF217和p 53蛋白表达明显升高，其异常表达与乳腺癌的发生、发展及转移有关。
锌指蛋白 p53 乳腺癌
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率逐年上升，发病年龄呈年轻化趋势[1-2]。乳腺癌的发生、发展是涉及多基因、多蛋白的复杂生物学过程，因此，发现针对乳腺癌治疗的有效靶基因具有重要临床意义。锌指蛋白217（ZNF217）是新发现的候选癌基因，在多种正常组织中都有低表达，而在肿瘤组织中存在过度表达，且与肿瘤的侵袭、转移有关[3-4]。ZNF217作为卵巢癌基因，其不利于正常人卵巢表面上皮细胞（OSE）的衰老，通过灭活OSE中 p53/成视网膜细胞瘤基因（retinoblastoma gene, RB）而促进肿瘤进展[5]。本研究采用免疫组化En Vision二步法检测乳腺癌组织中ZNF217和p53蛋白表达情况，分析上述指标与乳腺癌临床病理因素的关系以及ZNF217与p53的关系，现报道如下。
1 对象和方法
1.1 对象 选择本院2010年2月至2015年3月手术切除的具有完整临床资料的80例乳腺癌患者的手术标本（乳腺癌组），均经病理明确诊断，患者术前未接受放疗、化疗或者内分泌治疗。患者均为女性，年龄32～81（65.6±10.8）岁，＜46岁35例，≥46岁45例；肿瘤直径＜2cm 30例，≥2cm 50例；组织学分级：Ⅰ级20例，Ⅱ级38例，Ⅲ级22例；TNM分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期35例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例；伴腋窝淋巴结转移25例，无淋巴结转移55例。同时将距离肿块边缘5cm外的对应癌旁正常组织80例作为对照（对照组）。
1.2 方法
1.2.1 实验试剂 ZNF217兔抗人多克隆抗体（sc-67223）购自美国Santa Crua公司（工作浓度1∶100），p53鼠抗人即用型单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司，免疫组化检测试剂盒购自北京中杉金桥生物有限公司。
1.2.2 实验方法 所用标本均采用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片、染色。取石蜡组织常规连续切片，厚约4μm，采用免疫组化En Vision二步法，实验步骤按照试剂盒说明书操作。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性组织作阳性对照。
1.2.3 结果判定 ZNF217表达主要定位于细胞质，细胞膜有少量阳性表达，出现淡黄色或棕黄色颗粒者为阳性表达。p53表达定位于细胞核，呈现淡黄色或棕黄色颗粒分布为阳性细胞。在光学显微镜下，观察＞5个高倍视野，计数≥1 000个细胞中的阳性细胞数，阳性细胞数＜10%为阴性，≥10%为阳性。
1.3 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，ZNF217和p53表达的相关性分析采用Spearman等级相关。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组乳腺组织中ZNF217和p53的表达 见图1、2和表1。
图1 乳腺癌组织中ZNF217表达（EnVision法，×400）
图2 乳腺癌组织中p53蛋白表达（EnVision法，×400）
表1 两组乳腺组织中ZNF217和p53的表达[例（%）]
由图1、2及表1可见，ZNF217分布于细胞质中，p53分布于细胞核中为主，可见棕黄色颗粒。乳腺癌组ZNF217和p53蛋白表达阳性率均高于对照组，差异均有统计学意义（χ2=42.349、66.788，均P＜0.01）。
2.2 乳腺癌组织中ZNF217和p53的表达与临床病理因素的关系 见表2。
表2 乳腺癌组织中ZNF217和p53的表达与临床病理因素的关系[例（%）]
由表2可见，不同乳腺癌临床分期及有无淋巴结转移患者ZNF217和p53蛋白阳性表达率差异有统计学意义（均P＜0.01），而不同年龄、肿瘤大小、组织学类型及组织学分级患者ZNF217和p53蛋白阳性表达率差异均无统计学意义（均P＞0.05）。
2.3 乳腺癌组织中ZNF217与p53表达的相关性 见表3。
表3 乳腺癌组织中ZNF217与p53表达的相关性
由表3可见，乳腺癌组织中ZNF217和p53表达共阳性者51例，共阴性者15例，乳腺癌组织中ZNF217与p53表达呈正相关（rs=0.563，P＜0.05）。
3 讨论
ZNF217是新进发现的候选癌基因，属于锌指蛋白家族成员之一，定位于人染色体20q13.2，编码Krupple样转录因子，拥有8个C2H2锌指结构和富含脯氨酸的转录激活区[6]。ZNFs可通过对下游多种基因表达的调控，参与恶性肿瘤的侵袭转移、增殖和凋亡过程[7]。ZNF217除了参与乳腺癌的进展，还在大肠癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤浸润和转移过程中发挥重要作用[8-9]。将ZNF217-HA转染到p53/pRB表达缺失的卵巢上皮细胞，可以获得永生化的细胞系，表明ZNF217对细胞的作用主要依赖于p53和pRB的表达情况。p53-p21-pRB通路在细胞循环抑制和细胞衰老过程中起关键调节作用[5]。p53基因包括野生型和突变型，野生型p53基因定位于染色体17p13.1，是一个重要的细胞周期调控基因。研究证实，当细胞受到损伤时，野生型p53可抑制细胞周期由G1期进入S期，诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡，使细胞在新的周期复制或程序性细胞死亡中得到修复或恢复，从而抑制肿瘤的发生[10]。野生型p53蛋白半衰期较短，免疫组织化学技术不容易检测到，在肿瘤组织中检测到的是突变型的p53蛋白[11]。
本研究结果表明，乳腺癌组织中ZNF217和p53蛋白阳性率分别为71.25%和73.75%，明显高于癌旁正常乳腺组织的20.00%和10.00%。表明ZNF217和p53蛋白表达升高在乳腺癌发生过程中起作用，与文献报道一致[12]。有研究认为，ZNF217调节野生型p53基因发生突变，p53基因突变能通过加强细胞转化促进恶变进展，并在抗肿瘤治疗时起抵制作用[13]。ZNF217和p53蛋白与乳腺癌临床病理因素关系的分析显示，随着乳腺癌患者临床分期进展及淋巴结转移，ZNF217和p53蛋白阳性表达率升高。提示ZNF217和p53蛋白表达与乳腺癌的临床分期和淋巴结转移有关。相关性分析显示，在乳腺癌组织中，ZNF217与 p53表达呈正相关，表明ZNF217和p53协同作用参与乳腺癌的发生、发展过程。体外研究显示，将ZNF217转染到缺乏p16INK4a表达的人类乳腺上皮细胞后，人类乳腺上皮细胞的生命得以延长。p16INK4a是p53和pRB上游分子。因此，pRB和p53可能是ZNF217介导的无限增生的下游因子[5]。
综上所述，ZNF217和突变型p53过表达与乳腺癌的发生、发展及转移密切相关，本研究为乳腺癌的早期检测、预后评估及靶向治疗提供了一定的理论基础和实验依据，ZNF217和p53在乳腺癌发生、发展中相互调节的具体机制还有待于进一步研究。
[1]Yan S,Jiao X,Zou H,et al.Prog nostic sig nificance of c-Met in b reast cancer:a meta-analysis of 6010 cases[J].Diag n Pathol, 2015,10:62.
[2]O'Brien K M,Fei C,Sand ler D P,et al.Hormone therap y and young-onset breast cancer[J].Am J Ep id emiol,2015,181(10): 799-807.
[3]Ven d rellJ A,Thollet A,Nguyen N T,et al.ZNF217 is a marker of poor prognosis in b reastcancer thatd rives epithelia mesenchymaltransition and invasion[J].Cancer Res,2012,72(14):3593-3606．
[4]黎静,宋兰林,钟梅.锌指蛋白217基因对人卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞HO-8910生物学行为的影响[J].中华肿瘤杂志,2013,35(3): 170-174.
[5]Li P,Maines-Bandiera S,Kuo W L,et al.Multiple roles of the candidate oncog ene ZNF217 in ovarian epithelialneoplastic progression[J].IntJ Cancer,2007,120(9):1863-1873.
[6]Cohen P A,DoniniC F,Ng uyen N T,etal.The dark sid e of ZNF-217,a key regulator of tumorigenesis with powerful biomarker value[J].Oncotarg et,2015,6:41566-41581.
[7]Sun H Y,Wei S P,Xu R C,et al.Sphing osine-1-p hosp hate ind uces human end othelialVEGF and MMP-2 p rod uction via transcription factor ZNF580:novelinsig hts into angiogenesis[J].Biochem Bio p hys Res Commun,2010,395(3):361-366.
[8]Zhang Z C,Zheng L Q,Pan L J,et al.ZNF217 is overexp ressed and enhances cellmig ration and invasion in colorectalcarcinoma [J].Asian Pac J Cancer Prev,2015,16(6):2459-2463.
[9]Szczyrb a J,Nolte E,Hart M,et al.Identification of ZNF217,hn-RNP-K,VEGF-A and IPO7 as targets for micro RNAs that are d ownreg ulated in prostate carcinoma[J].Int J Cancer,2013,132 (4):775-784.
[10]Reinhardt H C,Schumacher B.The p 53 network:cellular and systemic DNA d amage responses in aging and cancer[J]. Trend s Genet,2012,28(3):128-136.
[11]Liang Y W,Chang C C,Hung C M,et al.Preclinical activity of simvastatin induces cellcycle arrest in GI via b lockad e of cyclin D-Cd k4 exp ression in non-smallcelllung cancer(NSCLC) [J].IntJ MolSci,2013,14(3):5806-5816.
[12]范广民,曹学全,杨朝晖,等.Pokemon和p53在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义[J].浙江医学,2015,37(3):219-221.
[13]Yan W,Liu S,Xu E,etal.Histone deacetylase inhib itors suppress mutant p 53 transcription via histon edeacetylase 8[J]. Oncog ene,2013,32(5):599-609.
Expression of ZNF217 and p53 in breast cancer and its clinical significance
TAO Deyou,ZHU Wenbo.Department of Oncology, Luqiao Hospital,Taizhou Enze Medical Center,Taizhou 318050,China
Zinc fing er p rotein p 53 Breastcancer
2017-01-09）
（本文编辑：马雯娜）
10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.14.2017-71
台州市科技计划项目（102KY13）
318050台州恩泽医疗中心（集团）路桥医院肿瘤外科
陶德友，E-mail：9890830@qq.com
【 Abstract】 Objective To investig ate the exp ression of zinc fing er p rotein ZNF217 and p 53 in b reast cancer and its sig nificance. Methods The exp ression of ZNF217 and p 53 p rotein in 80 cases of b reast cancer(b reast cancer g roup)and corresp ond ing ad jacent tissues(control g roup)were d etected b y immunohistochemical En Vision method.The associations b etween exp ression of those p roteins and clinicop atholog icalfactors(ag e,tumor size,typ ing,histolog ical g rad e,clinical stag e and lymp h nod e metastasis)was analyzed,the correlation b etween the exp ression of ZNF217 and p 53 in b reast cancer tissues was also analyzed. Results The p ositive rates of ZNF217 and p 53 exp ression were sig nificantly hig her than those in non-cancerous ad jacent b reast tissues(P＜0.05).The exp ression of ZNF217 and p 53 p rotein was correlated with clinicalstag e and lymp h nod e metastasis,b utnotcorrelated with ag e,tumor size,histolog icaltyp e and g rad ing(P＞0.05).There was a p ositive correlation b etween ZNF217 and p 53 exp ression in b reastcancer(P＞0.05). Conclusion The exp ression of ZNF217 and p 53 is sig nificantly increased in b reast cancer,which is closely correlated with occurrence,d evelop ment and metastasis of b reast cancer.
