针刺对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂肪炎症的影响

张思依

湖北中医药大学针灸骨伤学院2014级研究生 湖北武汉 430061

针刺对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂肪炎症的影响

张思依

湖北中医药大学针灸骨伤学院2014级研究生 湖北武汉 430061

目的：观察针刺对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪炎症的影响。方法：将40只雄性C57BL/6小鼠随机抽取10只做为正常组，普通饲料喂养。其余30只给予高脂饲料喂养16周，16周后形成肥胖模型。将造模成功的小鼠随机分为3组，分别为模型组、非穴位组、穴位组，每组各10只小鼠，继续给予高脂饮食喂养8周。正常组继续给予普通饲料喂养8周。穴位组选取小鼠特定穴进行针刺，非穴位组选取尾部非穴位针刺，每日一次，每次针刺15min，连续治疗8周。末次治疗后第二天纪录各组小鼠体质量; 取材后，免疫组化法检测小鼠脂肪中白细胞介素1β（IL-1β）的表达情况。结果：16周后给予高脂饮食的小鼠体质量较给予普通饲料的小鼠明显上升（P＜0.05）。治疗8周后穴位组小鼠较正常组体质量明显下降（P＜0.05），IL-1β的表达明显下。非穴位组小鼠体质量和IL-1 β的表达下降不明显（P＞0.05）。结论：针刺穴位可以改善肥胖小鼠脂肪的炎症反应。

针刺；肥胖；炎症因子；小鼠

肥胖（obesity）是一种由多种因素引起的慢性代谢性疾病，其典型表现是脂肪在内脏，皮下组织中大量累积。随着社会的发展，饮食结构的变化，肥胖作为一个严重的社会问题，已广泛引起人们的注意。而研究者对于肥胖的机制研究也更加深入，近年来研究显示，肥胖是一种慢性炎症性疾病，脂肪组织中的 caspase1对于肥胖的发展有至关重要的影响［1］,caspase1是一种半胱氨酸蛋白酶,会被炎症小体激活，并促进下游 IL-1β的成熟和分泌［2］。我们通过针刺干预高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6小鼠，观察针刺对脂肪组织中的IL-1β的含量的影响，探讨针刺通过改善脂肪炎症来改善肥胖的作用。

1 材料与方法

1.1 动物

8周龄SPF级C57BL／6雄性小鼠40只，小鼠体质量（22±2）g，购于南京大学-南京生物医药研究所。动物许可证：SYXK（苏）2014-0002。

1.2 饲料

普通饲料购于华中科技大学同济医学院实验动物中心，高脂饲料购于江苏美迪森生物医药有限公司，型号MD12032（45%fat Kcal%）

1.3 主要材料与试剂

戊巴比妥钠（sigma）；SP检测试剂盒、DAB试剂盒（北京中衫金桥生物技术有限公司）； IL－1β一抗（santa cruz）；中性树胶（北京索莱宝科技有限公司）；荧光显微镜（日本尼康）；针灸针（苏州医疗用品厂有限公司）；苏木素、二甲苯、乙醇（武汉谷歌生物有限公司）

1.4 动物模型制备及分组

40只小鼠普通饲料适应性喂养1周后，随机抽取10只做为正常组，用于空白对照，其余30只给予高脂饮食16周， 16周后形成肥胖模型［3］，当高脂饲料喂养的小鼠体质量明显高于正常组（P＜0.05）为造模成功。将造模成功的小鼠随机分为3组，分别为模型组、非穴位组、穴位组，每组各10只小鼠，继续给予高脂饮食喂养8周。正常组继续给予正常饲料喂养8周。所有小鼠在同一动物房饲养，温度（22±2）°C ，相对湿度（50±10）%，12小时明暗交替，自由进水进食，每天更换饮水，垫料。定时清洁鼠笼和饮水器。

1.5 干预方法

针刺治疗组采用标本配穴法用0.5寸毫针(1cm),在小鼠的关元穴斜刺1.5mm,双侧足三里穴直刺3mm，胰俞斜刺3mm。留针10min。隔天一次，治疗8周。针刺非穴位组取小鼠尾部距离根部 0.5 cm 和 1 cm 各一点，用0.5寸毫针，45度进针2～3mm。第12周开始针刺治疗，连续治疗8周。

1.6 取材

治疗结束后，给予小鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠（0.1ml/10g）麻醉，眼眶采血，在冰上取附睾脂肪。用多聚甲醛固定组织后包埋，切片，备用。

1.7 观察与检测

1.7.1 体重检测

用电子称称量各组小鼠16周和24周后的体质量。

1.7.2 IL-1β检测

用免疫组化检测各组小鼠附睾脂肪组织中IL-1β的表达水平。

1.8 统计学方法

采用SPSS21.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方法分析，方差齐用LSD分析，方差不齐用Dunnett T3分析,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 体质量

表1 各组小鼠体质量（x ± s, g ）

如表1所示，16周后，与正常组比较，模型组小鼠体质量明显上升（P＜0.05）,穴位组体质量明显上升（P＜0.05），非穴位组体质量明显上升（P＜0.05），高脂饲料持续16周喂养可成功形成肥胖小鼠模型；24周后，与模型组比较，穴位组体质量明显降低（P＜0.05），非穴位组体质量下降不明显。

2.2 脂肪组织IL－1β的表达

图1 各组小鼠脂肪组织IL－1β的表达

如图1所示，与正常组比较，模型组小鼠脂肪组织中IL-1β的表达明显升高。与模型组比较，穴位组脂肪组织中 IL-1β的表达明显降低，非穴位组脂肪组织中IL-1β的表达下降不明显。

3 讨论

肥胖是一种复杂的疾病，是诱发胰岛素抵抗、2型糖尿病的危险因素之一，与代谢性疾病、心血管疾病以及慢性炎症性疾病等密切相关［4］。多项调查显示［5］［6］，肥胖的发病率逐年攀升,已成为不容忽视的社会问题。长期营养过剩的条件下，脂肪组织为应对高营养水平会改变其形态，功能，数量，而后肥大增生［7］，其功能失调以及引起脂肪的炎症反应，进而引起其他组织如肝脏，骨骼肌的炎症，诱导一系列疾病。

本实验，我们通过高脂饮食诱导小鼠肥胖模型。中医学认为肥胖的病机有痰湿、气虚、阳虚、血瘀等，因此我们采用标本配穴法，选取关元、足三里、胰俞等穴位，对肥胖小鼠进行特定穴位针刺治疗，以固本培元，和胃化湿，达到减肥和改善炎症水平的作用。IL-1β是一个主要的炎症细胞因子，主要由巨噬细胞产生，与肥胖导致的胰岛素抵抗密切相关［8］。还有研究表明［9］［10］，无论是在巨噬细胞或是脂肪细胞中，都有 IL-1β的产生，从而降低肥胖患者的胰岛素敏感性，糖耐量，进而诱导胰岛素抵抗的发生和加重 2型糖尿病。研究发现［11］，在人类脂肪细胞和小鼠3T3-L1细胞中，IL-1β影响葡糖糖的转运和脂肪酸的摄取。肥胖时出现的炎症反应的一个重要特征在于它被启动的最初主要位于脂肪组织，故我们检测脂肪组织中I L-1β的表达来检测炎症水平。研究发现模型组小鼠体质量较正常组明显上升，脂肪组织中 IL-1β的表达明显上升。穴位组小鼠较模型组体质量明显下降，脂肪组织 IL-1β的表达明显降低。非穴位组小鼠较模型组体质量和脂肪组织 IL-1β的表达有所下降，但变化不明显。提示针刺特定穴位可以改善肥胖和肥胖时脂肪组织的炎症状态。大量研究表明，针刺对肥胖小鼠具有良好的减肥效果［12］［13］［14］。针刺干预肥胖可能与纠正脂代谢紊乱有关，也可能直接抑制炎症因子或通过降低血糖水平减轻体重，解除糖脂毒性作用［15］。针刺对于肥胖的治疗作用可以说时毋庸置疑，而炎症与肥胖密切相关，炎症因子水平在肥胖患者脂肪组织中表达水平明显上升，但具体通过何种途径使得炎症因子水平上调尚不清楚。但抑制 IL-1β的产生可能是治疗肥胖和胰岛素抵抗的一个新靶点，对于肥胖和炎症关系的新认识可能为防治肥胖提供新途径，针刺特定穴可以改善炎症从而调节肥胖及其并发症显示出了良好的前景。

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Effects of Acupuncture on Inflammation of Liver in Mice on a Chronic High-Fat-Diet

Objective To observe the effects of acupuncture on inflammation of eWAT in mice on a chronic high-fat diet. Methods 40 male C57BL/6 mice were randomly divided into the control group(n=10), others were fed for 16 weeks a high-fat-diet. After 16 weeks, the model mice were divided into three group: model group(n=10)、sham acupuncture group(n=10)、acupuncture group(n=10). The mice of acupuncture group to acupuncture on “Guanyuan”、“Zusanli” of both sides、“Yishu” of both sides with 15 minutes. The mice of sham acupuncture group to acupuncture tail. After 8 weeks of treatment, at the second day of the last acupuncture , to observe body weight. IL-1β expression of mice were determined with IHC. Results Compared with the control group, there’s an increase in body weight in the mice on a chronic high-fat diet; Compared with the model group, there’s a decrease in body weight from the acupuncture group (P＜0.05), and in the IL-1β level; There’s no significant differency on the results of body weight and the IL-1β level between the sham acupuncture group and the model group (P＞0.05). Conclusions Acupuncture can improve inflammation of eWAT in obese mice.

Acupuncture; Obesity; Inflammation; Mice

R711.3

A

1672-5018（2017）01-023-02