上海市一起蛋鸡心包积水-肝炎综合征的紧急流行病学调查

杨德全，朱九超，齐新永，鞠厚斌，周锦萍，刘春国，王靖飞

（1. 上海市动物疫病预防控制中心，上海 201103；2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001）

上海市一起蛋鸡心包积水-肝炎综合征的紧急流行病学调查

杨德全1，朱九超1，齐新永1，鞠厚斌1，周锦萍1，刘春国2，王靖飞2

（1. 上海市动物疫病预防控制中心，上海 201103；2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001）

2016年7月1日，上海市某蛋鸡场62日龄蛋鸡出现发病和死亡现象，多次用抗生素治疗无效。为详细了解鸡场发病情况，分析导致疫病发生的风险因素，以便及时提出行之有效的防控建议，通过询问、现场调查和实验室诊断等方式开展了紧急流行病学调查；采用描述性流行病学方法，对疫情特点、发病风险因素进行了分析。实验室诊断结果显示，|群血清4型腺病毒核酸阳性。调查发现：发病的前一周，该地气温波动剧烈，造成鸡只应激；鸡场生物安全体系不健全，无针对车辆和人员的消毒措施。结合临床症状、病理剖检和实验室诊断结果，确诊该鸡场暴发了心包积水-肝炎综合征，是由∣群血清4型腺病毒引起的。通过注射特异性卵黄抗体及对症治疗，对可能引起此次暴发的风险因素进行控制，疫情得到了有效控制。

蛋鸡；心包积水-肝炎综合征；∣群血清4型腺病毒；暴发调查；风险因素

心包积水-肝炎综合征（Hydropericardiumhepatitis syndrome，HHS）也叫安卡拉病，是由∣群血清4型腺病毒感染鸡等家禽引起的一种疾病，其典型症状是感染鸡突然死亡，并伴有心包积水和肝炎[1]。该病于1987年3月首先报道于巴基斯坦卡拉奇附近的安卡拉地区，安卡拉病因此而得名[2]。2013 年我国鸡群陆续暴发以肝脏坏死为特征的鸡包涵体肝炎，死亡率为10%～30%。2014年突然出现典型的，以心包中出现淡黄色液体或凝胶样物为特征的心包积水综合征。随后，该病在我国鸡群中大面积暴发，死亡率达30%～90%。本病主要发生于3～5周龄肉鸡。产蛋鸡特别是产蛋高峰期的鸡也有发病，死亡率一般不超过10%，但可引起产蛋率下降10%～30%[3]。研究发现，我国目前的∣群腺病毒流行毒株以血清4型为主[4]。

2016年7月21日，本中心门诊接收一起病例。经询问，该场62日龄蛋鸡于7月1日开始零星发病。经病理剖检、实验室检测，确诊该病为近年来给养禽业造成重大损失的心包积水-肝炎综合征。为控制该病的流行，详细了解鸡场发病情况，分析导致疫病发生的风险因素，以便及时提出行之有效的防控建议，开展了紧急流行病学调查。

1 方法

1.1 病例定义

疑似病例：2016年7月1日至27日，该鸡场内出现精神沉郁、闭目嗜睡、羽毛蓬乱，排黄绿色稀粪，突然倒地，两腿在空中划动等症状，并在短时间内死亡的鸡。

确诊病例：符合疑似病例，且经病原学检测为∣群血清4型腺病毒阳性的鸡。

1.2 调查方法

1.2.1 现场调查。对该场的布局、周边环境、饲养管理模式，以及蛋鸡的发病情况、临床症状等进行调查。

1.2.2 座谈。与鸡场负责人、饲养员座谈，详细了解鸡场发病前和发病过程中的有关情况，包括历史发病情况、发病前的饲养管理行为、免疫情况、用药情况等。

1.2.3 查阅资料。查阅该场生产记录、免疫档案以及饲料和兽药使用记录等。

1.3 实验室诊断

随机剖检5只病死鸡。每只鸡无菌采集肝脏、脾脏和肺脏，混样进行禽流感、新城疫和∣群腺病毒病的病原学检测，同时进行细菌分离培养。对禽流感和新城疫，采用商品化荧光RT-PCR试剂盒（凯杰生物工程（深圳）有限公司）进行检测；对∣群腺病毒，按照参考文献[5]采用 PCR方法进行检测。将PCR 产物胶回收后连接pMD18-T 载体，然后将连接产物转化大肠杆菌DH5α，37 ℃ 培养16 h ；挑取单菌落，经 PCR 鉴定，将阳性菌送上海桑尼生物公司测序。

1.4 数据分析整理

对收集的数据，利用 Excel 进行整理，采用描述性流行病学方法进行分析。

2 结果

2.1 现场调查结果

2.1.1 基本情况。该鸡场位于上海市崇明区某村，周边3 km内没有其他养殖场，场内没有其他畜禽；场内管理粗放、布局简单，不分生产区和生活区；鸡场紧靠乡村公路，旁边有河流。鸡场的地理位置和周边环境及布局见图1。全场共有4栋鸡舍，每栋舍存栏约8 000羽；采用棚内网上养殖，不分区；场内设施简陋，卫生条件差，无生物安全措施。饲养的蛋鸡品种为新杨黑，2016年4月30日从上海市某家禽育种公司购入。据了解，该场之前一直饲养从江苏省引进的肉用种鸡，在经3 d的空舍消毒后，又饲养了该批蛋鸡。

图1 鸡场地理位置和周边环境及布局

2.1.2 临床表现。初期，长势良好的鸡只先发病，无明显先兆症状，突然发病。病鸡呈卷曲姿势，表现精神沉郁、闭目嗜睡、羽毛蓬乱，排黄色稀粪便，两腿在空中划动，数分钟内倒地死亡。

2.1.3 剖检变化。剖检发现病鸡有明显的心包积液特征。心包内有10～30 mL的淡黄色清亮水样或胶冻样液体（时间长者呈胶冻样），病死时间越长心包积液越多；肝脏肿大，外观呈红黄条纹状，边缘区域有黄白色坏死灶；肺水肿、充血；肾脏苍白、肿大、出血（图2）。

图2 病鸡剖检变化

2.1.4 时间分布。7月1日开始，有2栋鸡舍的鸡出现零星死亡；7月18日开始，病死数量急剧增加；7月21日、22日，达到病死高峰；7月23日，病死数量逐渐减少（图3）。经禽流感和新城疫二联活疫苗免疫和多次用药诊治，无明显效果。

2.2 座谈情况

通过与鸡场负责人和1名饲养员座谈，了解到病死鸡只仅在第2栋和第4栋鸡舍出现，而其他2栋的鸡只无任何异常，具体情况如下：

2.2.1 历史发病情况。此前鸡只没有出现类似病症及死亡情况。本场所有蛋鸡均购自上海市某家禽育种公司，且该公司也无此病发生。

2.2.2 饲养管理情况。场内饲料是由预混料混合玉米、麸皮等制成的，无霉变异常。场内管理较混乱，具体表现为：饲养员定期离场回家；对进场车辆和人员无消毒措施；将病死鸡直接弃于垃圾桶，待收集满后送无害化处理中心进行无害化处理。

图3 2栋鸡舍病死鸡数量变化趋势

图4 上海市崇明区2016年6月下旬至7月份气温走势

2.2.3 免疫情况。鸡只免疫由乡镇兽医站防疫员完成。第2栋和第4栋鸡只分别于2016年7月7日和8日免疫禽流感-新城疫重组二联活疫苗。

2.2.4 用药治疗情况。发病后第3天，鸡场用盐酸多西环素可溶性粉进行拌料；期间用过青霉素、阿莫西林等，但均没有治疗效果。用保肝、利尿药治疗，效果也一般。7月22日对每只鸡注射2 mL腺病毒特异性卵黄抗体，3 d后效果明显。

2.2.5 天气情况。舍内保温效果差，受外界气温影响大。据了解，7月1日发病的前一周，该地多为阴雨天气，且气温变化剧烈。2016年6月下旬至7月的气温走势如图4所示。

2.2.6 周边情况。周围3 km 范围内没有养禽场；3 km 范围外的养殖场和3 km 范围内的农户散养禽均未出现类似病症。

2.3 实验室检测结果

对采集的病料进行禽流感病毒、新城疫病毒、∣群腺病毒检测和细菌培养，结果显示：采集的5份病料中，禽流感病毒和新城疫病毒均为阴性；4份病料中，∣群腺病毒PCR电泳出现 1 319 bp 的目的片段，为阳性（图5）。5份病料中，均未分离培养出细菌。对其中的1份阳性产物测序，经hexon基因序列分析，结果显示，该场的毒株与2015年我国分离的两株毒株（KU587519.1、KX364099.1）亲缘关系最近，同属于∣群血清4型腺病毒（图6），与∣群腺病毒其他11个血清型位于同一大分支，而与FAV-Ⅱ（AY849321.1、AF074946.1）和FAV-Ⅲ（Y09598.1）两个分支亲缘关系较远。

图5 禽腺病毒电泳图谱

图6 FAV hexon基因核苷酸序列系统进化树

2.4 干预治疗实施效果

确诊后，指导该鸡场于7月22日对每只鸡注射2 mL腺病毒特异性卵黄抗体，停止使用抗生素；使用葡萄糖、维生素C、活力健、龙胆泻肝散等保肝通肾药品。做好生物安全措施：加强对进出车辆及人员的消毒，及时清除病死鸡尸体、垃圾等；对鸡舍内外进行消毒。采取措施3 d后，两栋舍的鸡群死亡数量显著降低，至7月30日场内疫情得到有效控制。

3 讨论

3.1 场址

此鸡场紧靠乡村道路和河道，管理水平较差，存在暴发各种传染病的潜在威胁因素。

3.2 天气

发病的前一周，该地一直是阴雨天气，且温度波动剧烈。该天气因素可能造成鸡只应激，导致机体抵抗力下降，鸡只很容易感染发病。因而，天气原因可能是造成本次疫病暴发的诱因。

3.3 生物安全体系

此鸡场生物安全体系不健全，无消毒池，对进出鸡场的车辆和人员无消毒措施，且出现发病的第2栋和第4栋鸡舍紧挨走廊，车辆和人员进出频繁，增加了疫病传入的风险。据文献报道，2014—2015年江苏、河南、山东、安徽等地暴发了高死亡率的心包积水-肝炎综合征，并蔓延至全国大部分鸡场[4，6]，因此推测造成本次疫情暴发的主要原因可能是未执行严格的生物安全措施。

4 结论及建议

通过流行病学调查、临床症状、病理剖检及PCR检测，确诊此次鸡场发生的疫情是由Ⅰ群血清4型腺病毒引起的心包积水-肝炎综合征。

建议健全生物安全体系，提高场区内的饲养管理水平，改善舍内外的卫生状况，及时清理垃圾、病死鸡等，做好带鸡喷雾消毒和空舍彻底消毒；在气温波动剧烈时，提高风险管理意识，提前采取保护措施，以减少对鸡群造成的应激伤害；有针对性地合理用药，不盲目滥用药物治疗，避免病情拖延；发病时及时对鸡群进行腺病毒特异性卵黄抗体治疗，5 d 后接种腺病毒疫苗，防止疫情复发。

[1] SAIF Y M. 禽病学[M]. 12 版. 苏敬良，高福，索勋，主译. 北京：中国农业出版社，2012：289-300.

[2] JAFFERY M S. A treatise on Angara disease（hydropericardium pulmonary oedema-hepa tonephritis syndrome）[J]. J Pakistan Vet Med Asso，1988，34：1-33.

[3] 王慧，程小果，郭建友，等. 近期鸡群I群禽腺病毒的流行与防治[J]. 上海畜牧兽医通讯，2016（2）：62-63.

[4] LI H X，WANG J，QIU L Y，et a1. Fowl adenovirus species C serotype 4 is attributed to the emergence of hepatitishydropericardium syndrome in chickens in China[J]. Infect Genet Evol，2016，45：230-241.

[5] RAUE R，HESS M. Hexon based PCRs combined with restriction enzyme analysis for rapid detection and differentitation of fowl adenoviruses and egg drop syndrome virus [J]. Journal of virological methods，1998，73（2）：211-217.

[6] 史玉颖，刘玉山，于可响. 解析当前流行的安卡拉病[J].家禽科学，2016（11）：33-35.

（责任编辑：朱迪国）

An Emergency Epidemiological Investigation of Hydropericardium-hepatitis Syndrome in a Chicken Layer Farm of Shanghai City

Yang Dequan1，Zhu Jiuchao1，Qi Xinyong1，Ju Houbin1，Zhou Jinping1，Liu Chunguo2，Wang Jingfei2
（1. Shanghai Animal Disease Control Center，Shanghai 201103；2. State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology，Harbin Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Harbin，Heilongjiang 150001）

The morbidity and mortality of 62-day-old laying hens in a certain layer farm occurred on July 1st，2016，in Shanghai City. No obvious effect was obtained by repeatedly antibiotic treatment. In order to know the morbidity in detail，to analyze the possible risk factors of the disease，and to put forward prevention and control measures timely，an emergency epidemiological investigation on this outbreak was carried out by field investigation in combination with laboratory diagnosis. Results showed that group serotype 4 nucleic acid was positive. It was found that the temperature fluctuated sharply a week before the onset of the disease，which caused the chicken to be stressed. In addition，the biosafety system in this poultry farm was not perfect，and there was no vehicle and personnel disinfection measures，which increased the risk of adenovirus infection. According to the clinical symptoms，pathological examination and laboratory diagnosis，diagnosis of the chicken farm in the hydropericardium hepatitis syndrome was caused by group serum adenovirus type 4. By injecting specific yolk antibody and symptomatic treatment，the risk factors that might cause the outbreak were controlled，and the epidemic situation was effectively controlled.

laying hen；Hydropericardium-hepatitis syndrome；Fowl adenovirus group ∣ serotype 4；outbreak investigation；risk factors

S852.65

A

1005-944X（2017）09-0007-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.09.003

上海市农业基础性项目（沪农科攻字〔2014〕第7-3-3号）

周锦萍、刘春国、王靖飞