扶正化瘀方对慢性肝损伤大鼠慢加急性肝衰竭形成的预防作用*

汪增秀廉亚男谭善忠，△孙薇薇沈建军肖 倩梁重锋蒋淑莲

（1.南京市第二医院，江苏 南京 210003；2.南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210006）

扶正化瘀方对慢性肝损伤大鼠慢加急性肝衰竭形成的预防作用*

汪增秀1廉亚男1谭善忠1，2△孙薇薇2沈建军2肖 倩2梁重锋2蒋淑莲2

（1.南京市第二医院，江苏 南京 210003；2.南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210006）

目的 观察扶正化瘀方干预治疗对于慢加急性肝衰竭（ACLF）形成及严重程度的影响。方法 66只雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组（6只）、急性肝衰竭组（8只）、慢性肝炎模型组（6只）、慢性肝炎干预组（6只），ACLF模型组（20只）、ACLF干预组（20只），采用50%CCl4植物油溶液腹腔注射建立慢性肝炎模型，干预组予扶正化瘀方灌胃干预治疗，第9周用D-氨基半乳糖急性攻击正常大鼠、慢性肝炎模型大鼠和慢性肝炎干预组大鼠建立急性肝衰竭或ACLF模型，12 h后观察各组死亡率、肝功能及肝脏病理等变化。结果 大鼠造模9周，慢性肝炎模型组大鼠较正常组大鼠肝体比显著升高，肝功能指标明显恶化；病理显示肝细胞损伤，炎细胞侵润。慢性肝炎干预组肝体比和肝功能指标较慢性肝炎模型组有明显改善；病理上炎症明显减轻。急性损伤后12 h，急性肝衰竭组、ACLF模型组、ACLF干预组死亡率分别为0%、100.00%、25.00%。急性肝衰竭组、ACLF模型组肝功能指标较正常组明显恶化，病理见大量肝细胞坏死和炎细胞浸润。而ACLF干预组较ACLF模型组肝功能指标和肝细胞坏死和炎细胞浸润明显减轻。结论 扶正化瘀方明显减轻ACLF形成时的严重程度，降低死亡率，对于ACLF有着积极的预防作用。

扶正化瘀方 慢加急性肝衰竭 防治

尽管目前研究识别了慢加急性肝衰竭 （ACLF）重要的诱发因素及预后标志物，但ACLF仍然是一个高死亡率的疾病。ACLF防与治的关键是诱发ACLF突发事件的早期识别、更接近于实际的潜在发病机制的研究以及有效的积极救治［1-2］。实际上，ACLF既是一个急性严重肝损伤，又有着一个慢性肝损伤过程，那么，慢性肝损伤过程的积极干预，对不可预测而发生的急性严重肝损伤是否有着积极意义呢？本研究选择已应用于临床、对慢性肝炎和肝硬化有较好疗效，尤其抗肝纤维化作用突出的扶正化瘀方［3-4］，干预治疗CCl4慢性肝损伤模型大鼠，探讨扶正化瘀方对于ACLF形成时的严重程度和高死亡率产生的预防作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 扶正化瘀方：丹参、虫草菌丝、绞股蓝、桃仁、五味子及松花粉，由上海黄海制药厂提供。其浸膏干粉由上海现代中医药技术发展公司提供，以双蒸水稀释成含生药460 mg/mL的药液［5］。D-氨基半乳糖购自江苏省启东市久丰工贸有限公司。50%CCl4植物油溶液，法玛西亚-普强公司产品。

1.2 实验动物 雄性Wistar大鼠，SPF级，66只，体质量120～150 g，购自北京维通利华（证书号：中科动管第003），饲养于南京墨迹生物科技发展有限公司实验动物中心，自由饮食。

1.3 模型与分组 66只大鼠随机分为正常组6只、急性肝衰竭组8只、慢性肝炎模型组6只、慢性肝炎干预组（6只），ACLF模型组（慢加急肝衰模型组）20只、ACLF干预组（慢加急肝衰干预组）20只。慢性肝炎模型组、慢性肝炎干预组，ACLF模型组、ACLF干预组每周两次皮下注射50%CCl4植物油溶液建立慢性肝炎模型，共注射9周。剂量：前4周1.5 mL/kg体质量，以后2 mL/kg体质量。正常组、急性肝衰竭组皮下注射同等剂量植物油。同时慢性肝炎干预组和ACLF干预组每天灌胃扶正化瘀浸膏4.6 g/kg体质量。正常组、急性肝衰竭组、慢性肝炎模型组和ACLF模型组每天灌胃0.9%氯化钠注射液4.6 g/kg体质量。9周后急性肝衰竭组、ACLF模型组和ACLF干预组给予腹腔注射0.5 g/kg D-氨基半乳糖急性攻击致肝衰竭，正常组、慢性肝炎模型组、慢性肝炎干预组腹腔注射同等剂量生理盐水以对照。大鼠肝衰竭攻击后，12 h内连续观察，大鼠出现濒死症状（呼吸微弱，不能站立）时处死计数，至ACLF模型组最后1只出现濒死症状时处死全部大鼠，每只大鼠留取血清及肝组织标本。

1.4 指标检测 肝体比：称大鼠体质量与肝湿质量，肝体比＝肝湿质量/体质量；以“mg/g”表示。肝功能：检测血清总胆红素（TBil）、白蛋白（Alb）、丙氨基转移酶（ALT）；肝组织炎症：肝组织标本采用中性缓冲甲醛液固定，石蜡包埋，作HE染色，光镜下观察。

1.5 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠体质量、肝体比和死亡率比较 见表1。正常组大鼠活动自如，毛发光亮。慢性肝炎模型组大鼠消瘦无力、毛无光泽，较正常组、急性肝衰竭组体质量下降，肝体比上升，差异有统计学意义（P<0.05）。慢性肝炎干预组较慢性肝炎模型组体质量增加，肝体比下降，差异有统计学意义（P<0.05）。急性损伤后12 h，急性肝衰竭组、ACLF模型组、ACLF干预组肝体比均见增加。ACLF模型组各指标较急性肝衰竭组增加明显，差异有统计学意义（P<0.05）。而ACLF干预组各指标较ACLF模型组有显著降低，差异有统计学意义（P< 0.05）。急性肝衰竭组、慢加急肝衰模型组、慢加急肝衰干预组死亡率分别为0%、100.00%、25.00%。ACLF干预组较ACLF模型组死亡率下降，差异有统计学意义（P<0.05）。

表1 各组大鼠体质量、肝体比和死亡率比较（±s）

表1 各组大鼠体质量、肝体比和死亡率比较（±s）

与正常组比较，*P＜0.05；与慢性肝炎模型组比较，#P＜0.05；与急性肝衰竭组比较，△P＜0.05，与ACLF模型组比较，▲P＜0.05。下同。

组别 n 死亡率（%）正常组 6 0（0）慢性肝炎模型组 6 0（0）慢性肝炎干预组 6 0（0）519.35±21.53 3.92±0.29 ACLF模型组 19 414.21±27.28△7.02±0.87△19（100.00）△ACLF干预组 20 445.22±23.25▲5.80±1.17▲5（25.00）▲体质量（g） 肝体比（mg/g）507.32±22.25 3.60±0.09 415.18±16.43*△6.44±0.46*△446.88±26.98#4.77±0.38#急性肝衰竭组 8 0（0）

2.2 各组大鼠肝功能变化比较 见表2。正常组大鼠肝功能指标处于正常范围。慢性肝炎模型组较正常组TBil、ALT上升，Alb减少，差异有统计学意义（P<0.05）。慢性肝炎干预组较慢性肝炎模型组TBil、ALT均有下降，Alb上升，差异有统计学意义（P<0.05）。急性损伤12 h后，急性肝衰竭组、ACLF模型组、ACLF干预组TBil、ALT均明显恶化。其中ACLF模型组较急性肝衰竭组上升明显，差异有统计学意义（P<0.05），而ACLF干预组较ACLF模型组有显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）。

表2 各组大鼠肝功能变化比较（±s）

表2 各组大鼠肝功能变化比较（±s）

组别 n ALT（IU/L）正常组 6 153.83±83.23慢性肝炎模型组 6 357.67±101.12*慢性肝炎干预组 6 230.17±28.56#3.40±1.52 33.63±2.00 ACLF模型组 19 4.48±2.96△33.78±3.42 1552.89±1481.62△ACLF干预组 20 3.10±2.74▲30.43±2.76 1123.29±965.94▲TBil（μmol/L） Alb（g/L）1.23±0.67 42.67±1.51 1.47±0.39*34.50±1.52*1.28±0.34#38.50±1.87#急性肝衰竭组 8 1352.63±849.04

2.3 各组大鼠肝组织炎症情况比较 见图1。HE染色显示：正常组大鼠肝组织未见肝细胞变性、坏死等改变；慢性肝炎模型组较正常组肝组织肝细胞呈气球样变、脂肪变性、炎性细胞浸润及中央静脉分布的肝细胞点状坏死，而慢性肝炎干预组及慢性肝炎模型组肝细胞脂肪样变、炎性细胞浸润、肝细胞点状坏死程度均较轻。急性损伤12 h后，急性肝衰竭组、慢加急肝衰模型组、慢加急肝衰干预组均见肝细胞大块坏死，炎症细胞显著浸润。ACLF模型组较急性肝衰竭组程度尤为严重。ACLF干预组较急性肝衰竭组肝细胞坏死、炎性细胞浸润有明显改善。

图1 各组大鼠肝组织炎症的情况（HE染色，400倍）

3 讨 论

ACLF是在慢性肝炎或肝硬化基础上发生的肝衰竭，是一个独特的临床疾病［6-8］，尽管识别了ACLF重要的诱发因素及预后标志物，ACLF仍然是一个伴随着高死亡率的疾病。目前病因治疗绝大多数研究并没有显示任何显著地改善生存［9-10］，肝脏支持系统——分子吸咐再循环系统（MARS）的治疗对于改善肝衰竭患者存活率也没有明显的效果，且MARS作为慢加亚急性肝衰竭患者过渡到肝移植的一个治疗手段仍有待确定［11］。肝移植是治疗慢乙肝ACLF最后的治疗方法［12］，由于肝源缺乏和费用高昂，对于大多数发展中国家患者来说是奢侈的，因此，对于慢性肝病患者，在其病程中，如何减少ACLF的发生、减轻严重程度显得尤为重要。

扶正化瘀方由丹参与虫草等组成，功能补虚养阴，活血化瘀，既往研究发现对肝纤维化有良好作用［13-15］，其作用机制与改善肝脏炎症、促进过度增生沉积的肝脏ECM降解有关。另有研究发现，扶正化瘀方可以显著改善患者中医症状评分，从而改善患者生存质量［16］。

本实验显示扶正化瘀方能显著降低有CCl4诱导的慢性肝炎模型大鼠肝体比、改善其肝功能，病理提示扶正化瘀方能减轻肝组织炎症，有着良好的抗肝脏炎症作用。急性损伤12 h结果提示，急性肝衰竭组、ACLF模型组、ACLF干预组死亡率分别为0%、100.00%、25.00%。ACLF干预组较ACLF模型组死亡率明显下降；表明大鼠慢性肝损伤病程中扶正化瘀方预防性用药可明显降低ACLF死亡率。肝功能检测和病理染色也显示，ACLF模型组较急性肝衰竭组肝细胞炎症、坏死明显，ACLF干预组较ACLF模型组炎症、坏死均有明显减轻，表明大鼠慢性肝损伤病程中扶正化瘀方预防性用药可明显减轻ACLF损伤程度。

总之，CCl4大鼠肝损伤形成过程中，予以扶正化瘀方干预治疗明显减轻炎症形成，这对于ACLF预防的意义在于：一旦ACLF不可避免而形成，由于扶正化瘀方的干预治疗，可以明显减轻ACLF形成时的严重程度，明显降低其死亡率。

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The Prevention Effect of Fuzheng Huayu Decoction（FZHY）on the Formation of Acute on Chronic Liver Failure in Rats Suffering From Chronic Liver Injury

WANG Zengxiu，LIAN Ya′nan，TAN Shanzhong，et al. The Second Hospital of Nanjing，Jiangsu，Nanjing 210003，China.

Objective：To explore the prevention effect of FZHY recipe on the formation of acute on chronic liver failure.Methods：66 male Wistar rats were randomly divided into normal control group（6），acute liver failure group（8），chronic hepatitis model group（6），chronic hepatitis intervention group（6），acute on chronic liver failure model group（20），cute on chronic liver failure intervention group（20）.50%carbon tetrachloride vegetable oil solution was intraperitoneally injected to establish liver injury models，FZHY recipe was dosed to intervention group. After 9 weeks，D-galactosamine was simultaneously intraperitoneally injected to normal rats of chronic hepatitis，chronic hepatitis model rats and the intervention group to establish acute liver failure or acute on chronic liver failure models.In 12 hours after the acute attack，the mortality，liver function，liver pathological changes were observed.Results：In the ninth week，chronic hepatitis model group had higher liver/body rate and worse liver function than the normal group and pathologically liver cell injury，inflammatory cells invasion were detected in the chronic hepatitis model group.Compared with chronic hepatitis model group，liver/body rate and liver function in chronic hepatitis intervention group had been improved obviously，including liver cell injury and inflammatory cells invasion.In 12 hours after the acute injuries，the mortality rates in acute liver failure group，chronic on acute hepatic failure model group and chronic on acute hepatic failure intervention group were 0%，100%and 25%respectively.Acute liver failure group and acute on chronic hepatic failure model group had significantly worse liver function，pathologically massive necrosis of liver cells and infiltration of inflammatory cells than the normal group. Compared with chronic on acute hepatic failure model group，liver function had been improved significantly in chronic on acute hepatic failure intervention group，including necrosis of liver cells and infiltration of inflammatorycells pathologically.Conclusion：FZHY recipe can reduce severity and mortality of acute on chronic liver failure significantly，has significant prevention effect in the formation of acute on chronic liver failure in rats suffering from chronic liver injury.

FZHY Recipe；Acute on chronic liver failure；Prevention and treatment

R285.5

A

1004-745X（2017）08-1333-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.08.006

2016-08-16）

江苏省中医药领军人才项目（LJ200922）；江苏省南京市医学科技发展重点项目（DYY056；ZKX13018）；南京市科技计划项目（201503030）

△通信作者（电子邮箱：doctor_tsz@hotmail.com）