脂肝宁胶囊大黄素含量测定方法学研究

张艳丽，丁慧玲，张红梅

(山东步长制药股份有限公司，山东 菏泽 274000)

脂肝宁胶囊大黄素含量测定方法学研究

张艳丽，丁慧玲，张红梅

(山东步长制药股份有限公司，山东 菏泽 274000)

目的：改进脂肝宁胶囊含量测定方法。方法：采用液相色谱法，色谱柱型号为ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250mm,5.0μm)，以甲醇-1%磷酸水溶液(90:10)为流动相，流速1mL/min，检测波长为254nm，柱温为25℃。结果：大黄素在15.46～77.30μg/mL范围内线性关系良好(R=0.9998)，平均回收率为100.07%，RSD=1.27%(n=6)。结论：该方法操作简便，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

脂肝宁胶囊；大黄素；含量测定；高效液相色谱法

脂肝宁胶囊是在多年临床应用确有疗效方剂基础上开发的中药新药，全方由9味中药组成，为治疗和预防脂肪肝较好的药物[1]。大黄素是臣药虎杖的主要活性成分[2]，本文结合虎杖药材的含量测定法定方法[3]将前处理过程相对于文献[1]中方法简化，耗时短，操作相对简单，结果准确可靠，可用于脂肝宁胶囊中大黄素的含量测定。

1 仪器与试剂

1260液相色谱仪(安捷伦，紫外检测器，Chemstation色谱工作站)，SQP型电子天平(赛多利斯)，MSA-225S-1CE-DU型电子天平(赛多利斯)，KQ-300VDE型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)，FDY4002-UV型底有机物超纯水机(青岛富勒姆科技有限公司)。

大黄素(110756-200110)，购自中国食品药品检定研究院；脂肝宁胶囊(自制样品，批号为150501、150502、150503)，水为超纯水，甲醇为色谱纯，三氯甲烷、硫酸、磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250mm,5.0μm)，以甲醇-1%磷酸水溶液(90:10)为流动相，流速为1mL/min，检测波长为254nm，柱温为25℃，进样量为10μL。理论塔板数按大黄素峰计应不低于7500，大黄素与相邻峰的分离度应大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取大黄素对照品约10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备溶液；吸取3mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度制成浓度为30.92μg/mL的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品内容物，混匀，精密称取本品0.25g，精密称定，精密加入三氯甲烷25mL和2.5mol/L的硫酸溶液20mL，称定重量，置80℃水浴中加热回流2小时，冷却至室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀。分取三氯甲烷溶液，精密量取10mL，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。

2.3 干扰试验

图1 脂肝宁胶囊HPLC图谱

按脂肝宁胶囊处方制备不含虎杖药材的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，按上述色谱条件注入液相色谱仪，见图1。结果供试品溶液出现对照品色谱峰，阴性则无对照品峰出现，表明阴性对照无干扰，方法专属性强。

2.4 线性关系考察

分别精密量取大黄素贮备溶液1,2,3,4,5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密量取上述溶液注入液相色谱仪，按上述色谱条件操作，记录峰面积，见表1。以大黄素浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=18.968X-4.7698,相关系数R=0.9998，线性范围为：15.46μg/mL～77.30μg/mL。

表1 大黄素浓度与峰面积

2.5 精密度试验

取脂肝宁胶囊(批号150501)，按上述方法制备供试品溶液，并按上述条件操作，重复进样6次，记录峰面积，见表2，其RSD为0.4%，表明精密度良好。

表2 精密度试验结果

2.6 稳定性试验

取上述脂肝宁胶囊(批号150501)供试品溶液，按上述色谱条件操作，分别于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h进样，记录峰面积，见表3，其RSD为0.4%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

表3 稳定性试验结果

2.7 重复性试验

取脂肝宁胶囊(批号150501)样品6份，按上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件操作，记录峰面积，计算含量，见表4，其RSD为1.2%，表明本方法重复性良好。

表4 重复性试验结果

2.8 加样回收率试验

取已知含量的胶囊内容物6份，各约0.12g，精密称定，分别加入一定量的大黄素对照品溶液(浓度220.32μg/mL)，使大黄素的加入量为脂肝宁胶囊中大黄素含量的50%，100%。按上述方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件操作，记录峰面积，计算结果见表5。结果表明大黄素平均回收率为100.07%，RSD为1.27%。

表5 加样回收率试验结果

2.9 样品测定

按上述方法测定脂肝宁胶囊的含量，结果见表6

表6 测定脂肝宁胶囊的含量结果

3 结果和讨论

改进了液相色谱法测定脂肝宁胶囊大黄素含量测定的方法，结果线性关系良好，大黄素平均回收率为100.07%，表明方法准确、灵敏、重复性好，可用于脂肝宁胶囊的质量控制。

[1] 姜少灏，蒋 晔，郝晓花.非水反相液相色谱法测定脂肝宁胶囊中大黄素、大黄素甲醚的含量[J].中国药物分析杂志,2003,23(6)：437-439.

[2] 姚树坤，蒋 晔，郝晓花，等.虎杖及其复方中大黄素在大鼠体内的药代学研究[J].中国中药杂志.2005,30(6)：463-465.

[3] 国家药典委员会.《中华人民共和国药典：2015年版.一部》[S].1版.北京:中国医药科技出版社，2015：208-209.

(本文文献格式：张艳丽，丁慧玲，张红梅.脂肝宁胶囊大黄素含量测定方法学研究[J].山东化工，2017，46(08)：80-81,84.)

Methodological Research on the Determination of Rhein in Zhiganning Capsules

ZhangYanli,DingHuiling,ZhangHongmei

(Shandong Buchang Pharmaceutical Co.,Ltd.,Heze 274000,China)

Objective：To determine the content of rhein in Zhiganning capsules.Methods The ZORBAX SB-C18 column(4.6×250mm,5.0μm).The mobile phase was methanol-1%orthophosphoric acid (90:10).The flow rate was 1.0mL/min,and the wavelength used for detection 254nm.The column temperature was 25℃.Result::A good linear relationship was obtained in the concerntration of 15.46μg/mL～77.30μg/mL(R=0.9998).The average recovery was 100.07%,with RSD of 1.27%(n=6).Conclusion:The method is simple,accurate,and reproducible to be used in quality control.

Zhiganning capsules; rhein;determination of content;HPLC

2017-03-08

张艳丽(1985—)，女，山东菏泽人，药师，主要从事药物分析研究。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)08-0080-02