荧光定性PCR法检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学指标的相关性

李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

荧光定性PCR法检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学指标的相关性

李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

目的 针对ELISA法乙肝免疫学指标与荧光定性PCR法检测HBV-DNA间相关性进行分析。方法 以我站在2016年1月-2017年3月期间所检测的168份HBsAg反应性的献血为观察对象，均给予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫学指标检测，针对检测结果进行分析。结果 本组献血者中50例在ELISE检测中为大三阳，其HBV-DNA阳性率连同Ct值与小三阳组存在有显著差异，且HbeAg（+）患者检测阳性率以Ct值平同样较HbeAg（-）高（P＜0.05），差异具备统计学意义。结论 乙肝免疫学检测结果与HBV-DNA检测情况存在有一定关联，临床可借此对乙肝患者进行诊断。

ELISA法；乙肝免疫学指标；HBV-DNA

0 引言

乙肝属于危害性较大一种传染病，在我国存在有极高的病发率，在一定程度上影响着居民健康。为实现对该症病发率的有效控制，乙肝检测工作就显得格外重要。当前，临床主要依据乙肝免疫学指标进行筛查与诊断。就检测方法而言，以ELISA法与荧光定性PCR法存在有极高的使用率[1]。本次我站就针对上述两种检测方式与乙肝免疫学指标间的联系情况进行探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以我站在2016年1月-2017年3月期间所检测的168份HBsAg反应性的献血样本为观察对象，均给予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫学指标检测。本组患者中存在有男性100例，女性68例，年龄于15-55岁间，均值为（46.45±1.45）。所有患者HbsAg均表现为阳性。结合检测结果，将本组患者划分为大三阳组50例，小三阳组30例，A组 [AbsAg（+）、HbcAg（+）]40例，B组 [AbsAg（+）、HbcAg（-）]20例，以及C组[AbsAg（+）、HbcAb（+）]28例。均接受ELISA法与荧光定性PCR法检测。年龄、性别组成等方面对比，5组患者无显著差异（P＞0.05）无统计学意义。

1.2 方法

ELISA法检测中所使用设备为全自动酶免分析仪（深圳爱康公司生产，型号为AE280，校验周期为1年），检测中所用试剂，一检由厦门英科新创科技有限公司生产，弱阳性质控品浓度为0.5 IU/ ml，二检试剂由北京万泰生物药业有限公司生产，弱阳性质控品浓度为0.2 IU/ml。以上试剂为ELISA法进行血清学检测用试剂，采用两个不同厂家的试剂进行两次检测，两次检测均合格，此项结果合格，双试剂反应性直接判定为该项目不合格；单试剂反应性时需进行双孔复试，任意一孔反应性则判断为不合格；不合格样本直接淘汰，不再进行NAT检测，合格样本进行NAT检测；NAT检测采用定性实时荧光PCR法，采用8混模式，混检阳性，下一工作日进行拆分检测（单检）。

荧光定性PCR法检测中，所用设备为，科华核酸检测系统：Hamiltion Star（样本处理系统）+ABI 7500（扩增仪）校验周期为半年。所用试剂由上海科华生物工程股份有限公司生产，质控品浓度为HBV DNA200IU/ml、HCV RNA 2000IU/ ml、HIV RNA 2000 IU/ml。各项操作均严格按照流程进行。

1.3 统计学方法

本次研究中各类数据均按照SPSS19.0进行处理，采用%对计数数据表示，以χ2检测，而计量数据则以表示，以t检测，若（P＜0.05）则表明数据间存在有显著差异，具备统计学意义。

2 结果

2.1 大三阳与小三阳组HBV-DNA对比

结合检测可知，大三阳组献血组检测阳性率为94.00 %（47/50），而小三阳组为53.33 %（16/30），且大三阳组Ct值为（37.01±0.05），而小三阳组为（32.14±0.25），两项对比（P＜0.05）具备统计学意义，如表1、2所示。

表1 两组患者阳性率对比[n(%)]

表2 两组患者Ct值对比

表2 两组患者Ct值对比

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2.2 其他组检测阳性率与HBV-DNA对比

结合检测可知，A组、B组与C组检测阳性率与HBV-DNA对比存在有显著差异（P＜0.05），差异具备统计学意义，详见下表3。

表3 A、B、C三组患者检测情况对比

3 讨论

乙型肝炎为世界所关注的病症，存在有较强的传染性，且病发率较高，将直接使得患者病发肝硬化以及肝癌等病症的几率增加。结合临床实际可知，我国一直属于乙肝高发国家，乙肝携带率高达10 %以上，在很大程度上威胁着居民健康。因此，采用高效、安全的方式对乙肝进行检测，帮助患者尽早确诊，对于延缓病症发展以及传播率均有着重要意义[2]。

当前，临床用于乙肝的检测方式较多，常见有化学发光法、实时荧光定性PCR法以及酶联免疫法（ELISA）等。其中ELISA因存在有操作简单，出结果快以及成本较低、具备极高的灵敏度等优势迅速在临床得到推广。但该检测方式仅仅能达到定性检测的效果，能为HBV感染情况提供有效诊断，而无法实现对患者体内病毒复制情况及时、动态反应的效果。而实时荧光定性PCR法，则能有效对HBV-DNA在患者体内的复制情况加以测定，以了解乙肝病毒在患者体内的复制情况，因其操作较为简单，在临床存在有极高的使用率。而该检测方式确无法对非复制状态感染进行检测。基于上述两方面因素，临床将上述两种方案联合的方式运用于乙肝患者的检测中[3-4]。

结合本次研究可知，大三阳献血组在PCR检测中存在有极高的准确率，且Ct值较高，可见该类患者体内乙肝病毒极为活跃，存在有较强的传染性。同时也能证明ABsAg（+）、HBcAg（+）等可准确对乙肝病毒感染、传染情况加以反应。且通过将A、B、C组对比可知，HbeAg的在乙肝患者体内存在和HBV-DNA存在有极强的联系。早在凌利芬等[5]报道中已经指出，临床可以将HbeAg作为乙肝病毒在患者体内进行复制的主要依据，若该指标转为阴性，则表明患者HBV-DNA复制水平得到显著下降，能为临床治疗工作以及病症监测提供有效指导。同时，上述三组患者对比也可以发现，若HbeAg表现为阳性，则患者体内乙肝病毒复制量减少，其传染性也相对减弱。

结合上述研究可以发现，采用荧光定性PCR法与ELISA法对乙肝患者进行检测，能更加准确的对患者体内乙肝病毒复制情况进行定性进行表示，能有效克服上述两种检测方式在单独使用中的局限性，能帮助乙肝患者尽早得到确诊。

[1] 罗燕春,李勇,郑惠兰,等.荧光定量PCR检测主要性病病原体的临床应用[J].海南医学,2006,17(9):148-149.

[2] 何昕,姜惠民,张艳,等.荧光定量pcr检测高危型hpv的方法及其试剂盒:中国,CN101886137A[P].2010.

[3] 刘扬,吴孟超,陈汉,等.巢式RT-PCR定性检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA表达[J].中国肿瘤临床,2000,27(9):695-696.

[4] 石伍华,王海清,许艾明,等.荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA方法测定乙肝五项指标相关性分析[J].临床和实验医学杂志,2009,8(01):87-88.

[5] 凌利芬,陆学东,吴正林,等.乙肝病毒大蛋白与HBV-DNA相关性研究及在不同性别、年龄群体中的差异分析[J].现代检验医学杂志,2008,23(04):30-32.

Correlation between HBV-DNA and Immunological Indexes of Hepatitis B by ELISA Method by Fluorescence Qualitative PCR

LI Chun-fang

(The Central Blood Station of Langfang, Langfang,Hebei, 065000, China)

Objective To analyze the correlation between ELISA immunology index and fluorescence qualitative PCR method for detecting HBV-DNA. Methods In our station detected during the period of January 2016 to March 2017 of 168 copies of the HBsAg reaction of blood as the object of observation, HBV-DNA and ELISA were given the detection method of hepatitis B immune indicators, according to the analysis of test results. Results This group of blood donors in 50 cases in ELISE detection for HBeAg positive rate of HBV-DNA, which together with small Sanyang group there were significant differences in the values of Ct and HbeAg (+) patients with the positive rate detected by Ct value of flat than HbeAg (-) is high (P＜0.05) , the difference has statistical significance. Conclusion The immunological test results of hepatitis B are related to the detection of HBV-DNA, which can be used to diagnose the hepatitis B patients.

ELISA method; Hepatitis B immunology index; HBV-DNA

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.08.58