玉簪大父的组培快繁技术

詹 菁，王 健，周 洋，马广莹

(1.杭州市萧山区高级技工学校，浙江 杭州 311200； 2.萧山棉麻研究所，浙江 杭州 311202)

玉簪大父的组培快繁技术

詹 菁1，王 健1，周 洋1，马广莹2

(1.杭州市萧山区高级技工学校，浙江 杭州 311200； 2.萧山棉麻研究所，浙江 杭州 311202)

以玉簪新品种大父的叶片、叶柄、幼芽3个部分为外植体，经升汞、次氯酸钠无菌处理后接种在添加植物组培抗菌剂的诱导培养基上，通过改变植物生长调节物质配比及浓度进行无菌苗的增殖、生根试验。结果表明，最佳外植体为幼芽，0.1% 升汞结合0.2% 的植物组培抗菌剂无菌化效果最佳；最适的增殖培养基为MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；最适的生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1。

玉簪； 大父； 组织培养； 快繁

玉簪又名白萼、白鹤仙，为百合科玉簪属多年生宿根草本植物[1]。因其花苞质地娇莹如玉，状似头簪而得名。性强健，耐寒冷，属于典型的阴性植物，喜阴湿环境，不耐强烈日光照射，否则叶片变黄，生长不良。要求土层深厚，排水良好且肥沃的砂质壤土，中国大部分地区均能露地越冬，是中国著名的传统香花，深受人们喜爱。

玉簪常见的繁殖方式有种子播种或分株繁殖。种子繁殖耗时较长，播后需2～3年才能开花；分株繁殖生产效率低，难以大批量生产，且周期相对较长。因此，运用组培繁殖技术进行大批量工厂化生产势在必行。目前，INN、紫萼、花叶玉簪等玉簪品种的组培繁殖技术已有报道。大父为直立高大型玉簪新品，叶片巨大，偏蓝色，观赏性状突出，其组培快繁技术尚无报道。作者结合前人的研究成果，选用不同的外植体[2]，通过改变植物生长调节物质配比及浓度进行无菌苗的增殖、生根实验，为建立玉簪大父的组培快繁体系和进一步相关的研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试玉簪品种大父取自浙江省农业科学院萧山花卉研究开发中心。选取生长旺盛、无病虫害的植株，分别剪取其幼嫩的叶片、叶柄、幼芽为外植体，开展组培快繁试验。用海绵和清洁剂溶液轻轻擦洗除去表面污物，再用自来水冲洗干净备用。

1.2 方法

1.2.1 无菌处理试验

将清洗干净的叶片用剪刀剪去外缘，然后剪成长宽约为3 cm的小块，叶柄剪成5 cm左右的小段和幼芽作为外植体备用。在无菌条件下将3种外植体用75%酒精浸泡30 s，用灭菌水冲洗2遍后，再进行6种无菌处理，A1～A6分别为用0.1%升汞处理5、10、15 min，2%次氯酸钠处理10、15、20 min。处理后用无菌水冲洗3次。灭菌及冲洗时需间歇性摇晃，以增大接触面积，提高消菌效率。灭菌结束后将外植体转移到滤纸上吸去多余水分，将叶片剪成长宽约1.5 cm的小块，将叶柄剪成长约1.5 cm的小段，剥去幼芽外层叶片，将3种处理好的外植体接种在诱导培养基MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+3%蔗糖+0.7%琼脂粉(pH值5.5)上，每个处理40瓶，一半添加0.2%植物组培抗菌剂(PPM)，每瓶接种3个外植体，于培养室进行培养，10 d 后统计污染率，统计成活数(外植体转绿且无污染视为成活)。

1.2.2 增殖培养基试验

为了提高增殖效率，设计9种不同激素配比处理，B1～B9分别为6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 2.0 mg·L-1+α-萘乙酸(NAA) 0、0.2、0.5 mg·L-1；6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0、0.2、0.5 mg·L-1；6-BA 5.0 mg·L-1+NAA 0、0.2、0.5 mg·L-1；力求外植体直接再生，省略愈伤组织形成阶段。将成功无菌化的3种外植体转接到增殖培养基上进行增殖试验。增殖培养基以MS培养基为基础培养基，进行增殖试验。每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体。培养基中添加3% 蔗糖和0.7% 琼脂粉，pH值5.5左右，经121 ℃ 高温灭菌20 min。培养温度为(25±2)℃，每天光照时间为16 h·d-1，光照强度约为75 μmol·m-2·s-1。30 d后调查出芽数。

1.2.3 生根培养基试验

将长度在4 cm 以上，形态健全的芽体转接到生根培养基上进行生根培养。生根培养基以1/2MS为基础培养基，附加3种 NAA浓度处理，C1～C3分别为0.1、0.2、0.5 mg·L-1。每瓶接种4芽，每个处理20瓶。生根培养基中添加3% 蔗糖和0.7% 琼脂粉，pH值5.5左右，经121 ℃ 高温灭菌20 min。培养25 d后调查出根率、出根数。

2 结果与分析

2.1 外植体无菌处理

表1结果表明，以玉簪大父的叶片、叶柄、幼芽为外植体时，升汞和次氯酸钠均能起到较好的杀菌效果，处理时间增加，无菌化效果增强，但时间过长时，外植体损伤过度，不利于后期芽体的分化，其中以升汞10 min 或次氯酸钠15 min 效果最佳。PPM能在一定程度上降低污染率。

表1 不同杀菌剂对玉簪大父3种外植体无菌处理的效果

2.2 增殖培养基

3种外植体转接到增殖培养基30 d 后发现，叶片、叶柄外植体仅在剪切伤口与培养基接触处产生愈伤组织，且随着6-BA浓度的增加，愈伤组织形成的速度加快，当6-BA浓度达5.0 mg·L-1时，愈伤组织出现玻璃化，全程没有形成完整的幼苗。幼芽为最佳增值材料，可以直接增殖，B5培养基增殖效果最佳，达4～5倍(表2)。

表2 不同激素配比对玉簪大父3种外植体的增殖效果

2.3 生根培养基

从表3可以看出， NAA浓度影响玉簪大父的生根，出根率和平均出根数随着激素浓度的增加而增大。当NAA浓度为0.1 mg·L-1时，虽然玉簪的出根率也有 80%，但生根速度慢，出根数少，不利于后期移栽与批量生产；浓度为0.2和0.5 mg·L-1时，生根情况较好，两者差异不明显。最适的生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1。

表3 不同NAA浓度对玉簪大父生根的影响

3 小结

试验研究结果表明，玉簪大父幼芽是组培繁殖最适的外植体。洗净的幼芽先后经75% 酒精浸泡30 s、0.1% 升汞浸泡10 min 后，用灭菌水冲洗干净，接种在添加0.2% PPM的诱导培养基上无菌效果最好，无菌率可达93%以上。最适的增殖培养基为MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；最适的生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1。

[1] 李钱鱼．玉簪属(Hosts)植物的品种资源及其花叶嵌合体特性研究[D].杭州：浙江大学，2004．

[2] 蒋素华，田云芳，黄萍，等．紫萼的组培快繁技术研究[J]．北方园艺，2013(18)：94-96．

(责任编辑：张才德)

2017-05-12

杭州市科技局种子种苗项目(20150932H13)；杭州市萧山区高级技工学校课题

詹 菁(1984—)，女，湖北武汉人，农艺师，硕士，从事园林植物种质资源的引进与繁育研究工作，E-mail；365712408@qq.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170822

S68

B

0528-9017(2017)08-1362-02

文献著录格式：詹菁，王健，周洋，等. 玉簪大父的组培快繁技术[J].浙江农业科学，2017，58(8)：1362-1363.