鹅副粘病毒病感染的诊断与防治

柴 华，孙德君，孙晓峰，武 啸，杨朋欣，秦立鑫

（哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

鹅副粘病毒病感染的诊断与防治

柴 华，孙德君，孙晓峰，武 啸，杨朋欣，秦立鑫

（哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

鹅副粘病毒病是由禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）引起的急性病毒性传染病，对养鹅业危害极大，文章从发病情况、临床症状、病理变化、实验室诊断几个方面对鹅副粘病毒病作出诊断，并提出了相应的防治措施，以减少该病的发病率和死亡率。

鹅副粘病毒病；主要病变；防治

鹅新城疫是由新城疫病毒引起的鹅的急性、烈性和高度接触性传染病[1-3]。在国际病毒分类委员会（ICTV）第七次报告中，把新城疫病毒归入禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1），副粘病毒科；副粘病毒亚科的腮腺炎病毒属。禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1）仅有一个血清型，即新城疫病毒。新城疫病毒可引起鸡、鸭、鹅等家禽和个别鸟类发病。本病具有很高的发病率和死亡率，一旦发生，会给养殖业带来巨大的经济损失，是危害养禽业的主要传染病之一[4-8]。世界动物卫生组织（OIE）将新城疫列入A类动物疾病，同时我国将其列入一类动物疫病。

禽副粘病毒（AMPV）共有9个血清型，AMPV1～AMPV9，禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1）是禽类感染的主要病原体，其典型代表为新城疫病毒。新城疫（ND）可以引起多种禽类发病，在世界历史上经历了4次大流行，给全球经济带来了巨大损失。1997年江苏省首次出现鹅群爆发类似鸡新城疫疫情。此后我国南方其他各省相继出现此疫情，最后确诊为副粘病毒感染，给当地养鹅业造成严重影响[9-11]。本病主要通过消化道及呼吸道传播，不呈现明显的季节性流行，各种品种及日龄的鹅均容易感染。此外，由于我国水禽养殖规模的扩大，发生鹅感染禽副粘病毒的情况也越来越常见，该病在临诊症状、组织学变化、病理变化等方面都表现出一定的特点，并且该病毒毒力可能有不断增强的趋势。

1 发病情况

2016年山东省某鹅场饲养了5 000多只30日龄肉鹅，病鹅初期表现精神不振、萎靡、体温升高、行动无力，常蹲地不动。采食量和饮水量都减少，粪便呈灰白色。

临床症状：病鹅初期表现精神不振，采食、饮水减少，有时勉强采食或饮水又随即甩头吐出；拉白色稀粪或水样腹泻，部分病鹅时常甩头，并发出“咕咕”的咳嗽声。病情加重后，病鹅双腿无力，蹲伏地上，不愿行走。后期病鹅极度衰弱，浑身打颤，眼睛流泪，眼眶及周围羽毛被泪水浸湿，有时鼻孔流出清亮水样液体，头颈颤抖，呼吸困难。最后常见病鹅相互拥挤在一起，远离其他尚能行动的鹅，体重迅速下降，并渐渐衰竭而死，重症病鹅及病死鹅泄殖腔周围羽毛常沾有大量白色粪便。

2 病理剖检病变

病死鹅剖检肠、胰腺、肝、肾的病理变化见图1。

病死鹅剖检以肠道出血，肠黏膜呈糠麸样，有溃疡，但无栓塞为特征。直肠更加明显，可见散在的溃疡灶，并有红色结痂。肝脏肿大，质地变硬，胆囊肿大，充满胆汁；胰腺出血、有粟粒大小白色坏死灶；肾略肿大，输尿管扩张。患病雏鹅以肠黏膜出血为主，并伴有散在的溃疡灶为特征性病理变化。

3 病理组织学变化

病鹅的肠、肝、心、胰腺、肾、脾病理切片见图2。

病死鹅肝细胞、肾小管上皮细胞、心肌细胞等常表现颗粒变性或空泡变性，气管黏膜上皮细胞坏死脱落，纤毛消失。病鹅肠道黏膜多发生凝固性坏死，肠黏膜病变深入到黏膜下层和肌层，黏膜下层常见严重的充血、出血。胰腺腺泡结构大部分破坏，常见大小不一的坏死灶。脾脏淋巴组织严重变性坏死和空泡化，淋巴细胞显著减少，白髓结构大部分消失，并可见均匀红染的血浆渗出物。

图1 病死鹅剖检肠、胰腺、肝、肾病理变化

4 实验室诊断

4.1 引物的设计合成

根据GenBank发表的NDV的F基因序列设计引物如下。

上游引物为P1：5'GCTCATTCAGGACGCAATA 3'；

下游引物为P2：5'TGTGATAATCCGTCGGTGACT 3'。

引物由吉林库美生物工程技术有限公司合成。

4.2 病毒分离与鉴定

取疑似鹅副黏病毒的肝脏剪碎，按1∶5（W/V）比例加入灭菌PBS进行匀浆处理，将匀浆液反复冻融3次，4 000 r·min-1离心30 min，取上清液备用。上清液中加双抗（青霉素、链霉素）各3 000 U·mL-1，置4℃过夜，以8 000 r·min-1离心10 min，取制备的上清液以尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚，0.1 mL·胚-1，于37℃孵育，每日观察两次，收获120 h内死亡的鸡胚尿囊液，收集死胚尿囊液，进行HA试验及PCR鉴定。

4.3 病毒DNA的提取及PCR扩增

鹅副粘病毒F基因的PCR产物电泳结果见图3。

图2 病鹅的肠、肝、心、胰腺、肾、脾病理切片

图3 鹅副粘病毒F基因的PCR产物电泳结果

病毒液采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0提取试剂盒，按说明书进行病毒DNA的提取。

RT-PCR反应：RNA模板14.5 μL，随机引物2 μL混合，70℃水浴5 min，-20℃5 min；加入下列液体：5×Buffer 5 μL，dNTP 2 μL，RNAi 0.5 μL，MLV 1 μL；37℃水浴1 h，取出放入96℃水浴5 min，取出。PCR反应采用25 μL体系，灭菌双蒸水17 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL、DNA溶液2.0 μL、dNTP（2.5 mmol·μL-1）2 μL、上下游引物1 μL、Taq酶0.5 μL。95℃变性5 min，1个循环，95℃变性1 min，67℃退火50 s，72℃延伸50 s，30个循环后，72℃延伸10 min。PCR反应完毕后，取出PCR产物5 μL，进行1%琼脂糖凝胶电泳，于紫外灯下观察电泳结果。电泳结果表明，待检样本中可扩增出1条约500 bp的目的条带（图1）。再结合发病情况和剖检变化，诊断为鹅副黏病毒感染。

5 防治措施

鹅副粘病毒病是一种急性、病毒性传染病，目前尚缺乏特效药物可以控制本病的发生。因此，平时应加强鹅群的饲养管理，调整鹅群的饲养密度，注意搞好环境卫生，经常消毒鹅舍及用具，对4～8周龄的仔鹅可全群喂服维生素和抗菌药物，或在饲草中添加自制大蒜酊。应坚持预防为主的原则，及早接种疫苗，对已发病鹅群，要分病鹅和假定健康鹅区别对待，已发病鹅用抗血清治疗，未发病鹅使用疫苗紧急接种：10～14日龄雏鹅每只肌注0.3 mL，青年鹅每只肌注0.5 mL，大鹅每只肌注1 mL，或种鹅产蛋前20 d时肌注0.5 mL·只-1。疫苗可在常温下避光保存，使用方便，免疫效果好。全场清除粪便、污物、彻底消毒，不要随便到外地引种，以防带回疫病，已引进的鹅要隔离饲养观察。

对病鹅用抗鹅副粘病毒血清注射，同时用百毒杀带鹅消毒和洗刷饮水槽、料槽等用具。用强力霉素或替米考星和百毒克等抗病毒类药合用5～7 d，效果较好，还要供给足量多种维生素、电解质多维等。加强饲养管理，降低鹅群密度，注意搞好环境卫生，勤打扫粪便，定期消毒，对病死鹅要做深埋处理。养鹅户最好不要同时养鸡、鸭，以免交叉感染，同时要特别注意做好预防工作。

[1]王学理,武迎红,龚团莲,等.鹅副粘病毒病的研究进展[J].吉林畜牧兽医,2005（5）:14-17,19.

[2]吴虎,赵太云.鹅副粘病毒的分离与鉴定[A].中国畜牧兽医学会传染病学分会第五届全国会员代表大会暨第九次学术研讨会论文集[C].烟台:中国畜牧兽医学会传染病学分会,2001.

[3]王永坤,严维巍,周继宏,等.鹅副粘病毒病的病理变化[A].中国畜牧兽医学会传染病学分会第五届全国会员代表大会暨第九次学术研讨会论文集[C].山东烟台,2001.

[4]叶曼曼.鹅副粘病毒病研究进展[J].中国禽业导刊,2011,28（15）:50.

[5]鲜思美.鹅副黏病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及应用[J].生物技术通报,2012（11）:150-154.

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[7]杜宗沛,吴植,徐小琴,等.江苏中部地区鹅副粘病毒的分离与鉴定[J].安徽农业科学,2013,41（9）:3 901-3 904.

[8]辛朝安,任涛,罗开健,等.疑似鹅源新城疫感染诊断初报[J].养禽与禽病防治,1997,16（1）:5．

[9]王永坤,田惠芳,周继宏,等.鹅源新城疫病的研究[J].江苏农学院学报,1998,18（1）:50-62．

[10]董国英.鹅副粘病毒病研究进展[J].现代畜牧兽医,2006（12）: 61-66．

[11]李文良,冯太兰,戴亚斌,等.鸡新城疫疫苗对鹅副粘病毒病免疫效果观察[J].中国预防兽医学报,2008,30（6）:470-481．

Diagnosis and Treatment of Goose Paramyxovirus Infection

CHAI Hua,SUN Dejun,SUN Xiaofeng,WU Xiao,YANG PengXin,QIN Lixin

（Harbin Pharmaceutical Group Biological Vaccine Co.,Ltd.,Harbin 150069,China）

Goose paramyxovirus disease is acute viral infectious disease caused by avian paramyxovirus(APMV-1).It is great harm to the goose industry.This paper reviewed the incidence,clinical symptoms,pathological changes,laboratory diagnosis aspects of goose paramyxovirus disease,and put forward the corresponding control measurestoreducethemorbidityandmortalityofthedisease.

goose paramyxovirus disease;main lesion;prevention and treatment

S835；S852.65+9.5

：A

：1001-0084（2017）07-0030-03

2017-05-16

柴华（1978-），男，黑龙江佳木斯人，硕士，高级兽医师，主要从事于兽用生物制品研究。