高效液相色谱法测定义乌南枣和新疆红枣中维生素C和芦丁的含量

龚宁++毛兰珍

本文采用反相高效液相色谱法测定义乌南枣及新疆不同品种红枣中维生素C和芦丁含量。方法采用JADE-PAKODS C18 色谱柱（250mm×4.6mm×5um），甲醇-0.02 mol/L乙酸铵（pH=4.0） （50∶50）为流动相；流速1.0 ml/min；检测波长为254 nm，柱温：35℃。上述色谱条件下义乌南枣和新疆红枣中维生素C和芦丁可完全分离，维生素C在13.1～262.4 mg/L范围内呈良好的线性关系，r=0.9971，平均回收率为97.1%，RSD=1.87%（n=5）；芦丁在1.4～69.2 mg/L范围内呈良好的线性关系，r=0.9990，平均回收率为88.6%，RSD=3.08%（n=5）。结论该方法简便、准确、重复性好，能同时测定义乌南枣和新疆红枣中维生素C和芦丁的含量。

义乌大枣系在1700年前由陕西、河南等枣产区居民迁徙义乌定居时引进栽培。以芦丁为代表的总黄酮化合物具有多方面的化学活性，具有抗氧化、抗肿瘤、抗动脉硬化以及防止冠心病等多种生理功能。枣中的维生素C具有很强的抗氧化能力。本实验在参考相关文献的基础上，建立了反相高效液相色谱法测定义乌南枣中维生素C与芦丁含量的方法，为义乌南枣保健食品的研究与开发提供一定的参考。

试验部分

仪器和试剂。仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪，附SPD-20A紫外检测器，C18色谱柱（250mm×4.6mm×5um）、Labsloustion色谱工作软件，超声波清洗器，高速离心机，超纯水器、电子天平。

试剂：维生素C对照品（Dr.Ehrenstorfer Gmbh LOT：50720）；芦丁对照品（上海安谱 批号：Z0810050）；甲醇（色谱纯）；乙酸铵（分析纯）。

仪器工作条件。JADE-PAKODS C18 0336-2546色谱柱（250mm×4.6mm×5um）；流动相：甲醇-0.02mol/.L乙酸铵（pH=4.0） （50∶50）：流速1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：10?l；检测波长：254nm；理论塔板数按维生素C峰计算不低于2500，；按芦丁峰计算不低于3500，维生素C与芦丁分离度大于15。

试验方法。（1）标准溶液的制备：精密称取维生素C标准品32.8mg置25ml容量瓶中，加水10ml超声使其溶解并用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液①；精密称取芦丁标准品17.3mg置于25ml容量瓶中，加50%甲醇10ml超声使其溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液②；精密量取贮备液①和贮备液②各5ml置于50ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合标准品溶液。（2）样品前处理：称取枣类样品100g，用研磨机研碎混匀，再精密称取样品10.00g，加50%甲醇30ml，超声萃取15min，入100ml容量瓶稀释定容至刻度，混匀，静置沉淀15min，取上清液，8000r/min离心10min，过0.45?m滤头，取续滤液为待测液。

结果与分析

色谱条件与系统适应性。流动相的选择，本实验采用乙酸与0.02mol/.L乙酸铵缓冲液按不同配比，在不同pH值进行试验，结果表明对两种流动相的选择pH值从3.6～6.6的范围内，峰形由拖尾慢慢地变为对称，最佳pH值为4.0；甲醇-0.02mol/.L乙酸铵 （70∶30）为最佳，但在实际试验中，干扰物质较多，故最终选择甲醇-0.02mol/.L乙酸铵（pH=4.0） （50∶50）。

线性范围及标准曲线。将两种标准溶液混合配制成不同浓度进行试验，以峰面积为横坐标X，以浓度为纵坐标Y，进行线性回归，得回归方程。其中两种标准被测物的线性范围及回归方程，相关系数，检出限（按仪器噪声两倍计算）如下。

维生素C：

线性范围13.1～262.4?g/ml，回归方程Y=3.207e+004-3.67e+00，相关系数为0.9986，检出限0.0855?g/ml

芦丁：

线性范围1.4～69.2?g/ml，回归方程Y=1.582e+004-3.05e+004，相关系数为0.9990，检出限0.18?g/ml

从中所可知，该方法的线性范围宽，一般的样品经过超声提取，过滤后即可直接进样，操作简便。

精密度试验。分别对维生素C和芦丁混合对照品重复进样6次，进样量为10?L，结果维生素C峰面积的RSD值为1.67%，芦丁峰面积的RSD为1.93%，精密度较好。

稳定性试验。取同一供试品溶液（义乌南枣），分别于0、2、4、8、12、24h进样10?L测定，结果维生素C峰面积的RSD值为1.09%，芦丁峰面积的RSD为1.24%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

重复性试验。精密称取义乌南枣3份，按“样品前处理”制成供试液，并在上述色谱条件测定维生素C与芦丁的峰面积。结果样品中维生素C峰面积的RSD值为1.53%，芦丁峰面积的RSD为1.67%，表明实验方法的重复性良好。

加标回收率试验。精密称取义乌南枣3份，每份加入浓度为1304?g/ml维生素C对照品溶液5.0ml和浓度为692?g/ml芦丁对照品溶液0.3ml，按“样品前处理”制成供试液，在上述色谱条件下进样10?L测定，结果见表1。试验表明，本方法准确性较好。

样品含量测定。供试品溶液10?l进样，每样平行测定3份，计算样品中维生素C和蘆丁的含量，结果如下：

义乌南枣：

维生素C 2.0g/kg，RSD 为1.53%；芦丁39.9mg/kg，RSD为1.67%。

骏枣：

维生素C 1.1g/kg，RSD 为1.23%；芦丁28.8mg/kg，RSD为1.50%。

阿克苏灰枣

维生素C 1.4g/kg，RSD 为1.60%；芦丁9.3mg/kg，RSD为1.55%。

本实验使用高效液相色谱法同时测定义乌南枣及红枣中维生素C与芦丁的含量，样品处理快速、简单、重现性好，回收率高。本实验结果显示，义乌南枣中维生素C与芦丁的含量均高于骏枣和阿克苏灰枣，有较高的食用价值，为义乌南枣保健食品的研究与开发提供一定的参考。