推拿对压力性尿失禁大鼠耻尾肌肌纤维的影响*

吴致力王 钲易 锦陈 默王 虹

（1.北京按摩医院治未病门诊部，北京 100010；2.北京中医药大学针推学院，北京 100010；3.北京百奥易康科技有限公司，北京 100010）

·实验报告·

推拿对压力性尿失禁大鼠耻尾肌肌纤维的影响*

吴致力1王 钲1易 锦1陈 默2王 虹3

（1.北京按摩医院治未病门诊部，北京 100010；2.北京中医药大学针推学院，北京 100010；3.北京百奥易康科技有限公司，北京 100010）

目的观察推拿对压力性尿失禁大鼠耻尾肌肌纤维的影响，探讨推拿治疗女性压力性尿失禁的机理。方法将产后SD大鼠40只随机分为推拿治疗组、模型对照组，另设健康未生育大鼠20只为空白对照组。选用阴道球囊扩张术加双侧卵巢切除术进行造模，对推拿组施以腰骶部和腹部手法治疗，每日1次，共30次。然后处死所有大鼠，取耻尾肌组织，经HE染色，在光镜下采集并分析图像，比较各组耻尾肌肌纤维的差异。结果推拿治疗组耻尾肌肌纤维宽度、面积、直径更接近空白对照组，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P<0.001），推拿治疗组及空白对照组比较无显著性差异（P>0.05）。结论推拿治疗组可使耻尾肌肌肉纤维增粗，从而使控尿能力有所提高，这为推拿治疗SUI提供了理论依据。

推拿 压力性尿失禁 大鼠 耻尾肌

压力性尿失禁（SUI）［1］是女性常见疾病，在中老年女性中发病率较高，根据国际控尿协会（ICS）的定义，女性SUI是指腹压大于最大尿道压时，在没有膀胱逼尿肌节律收缩的状态下，尿液不自主地由尿道外口漏出，并常在腹压增高如（咳嗽、打喷嚏、大笑或运动）时发生。有很多学者研究发现SUI存在盆底神经损伤和肌肉的改变［2-3］。当盆底神经损伤后，周围尿道肌肉组织逐渐出现失神经支配状态，盆底肌群逐渐变得薄弱，并出现了肌纤维数量、密度和直径的下降［4-5］，随之支持力也下降，不能维持膀胱颈倾角，当腹压增加时无法有效地传递压力，使尿液溢出。中医推拿治疗SUI时对漏尿量和漏尿次数均有明显的改善，但缺乏相应的机理研究［6］。在此基础上笔者对压力性尿失禁进行了初步的动物模型实验研究，观察推拿手法对大鼠盆底耻尾肌形态产生的影响，并为推拿治疗本病提供新的可能的理论依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 北京维通利华实验动物技术有限公司提供健康成年雌性SD大鼠60只，饲养于北京中医药大学实验室动物中心（SPF级实验室）。动物自由饮水进食，统一常规饲养。

1.2 分组与造模 1）分组。将实验健康未生育雌性SD大鼠随机分为3组。Ⅰ组为空白对照组（20只），体质量（346.44±34.15）g；Ⅱ组为模型对照组（17只），体质量（346.38±51.55）g；Ⅲ组为推拿治疗组（18只），体质量（330.70±21.02）g。在实验过程中受大鼠Y型子宫影响，造成造模术后流产共死亡5只（其中Ⅰ组2只，Ⅱ组2只，Ⅲ组1只）。以上为存活并完成实验观察大鼠数量情况。2）动物模型建立方法。除Ⅰ组外，其他两组按以下步骤进行造模［7］。（1）阴道球囊扩张：雌鼠产后1～3 d，以10%水合氯醛（上海江莱生物科技有限公司，规格100mL）腹腔注射（0.3mg/kg）将大鼠麻醉，取仰卧位，并将大鼠四肢固定，将8 Fr弗莱氏尿管插入大鼠阴道2～3 cm，气囊中注入5mL无菌生理盐水，8 h后取出水囊导尿管，局部消毒。（2）双侧卵巢切除：球囊扩张2周后，行双侧卵巢切除术。先以10%水合氯醛腹腔注射（0.3 mg/kg）麻醉，将大鼠俯卧位固定，备皮，消毒取腰部（L3水平）后正中线皮肤切口，分离肌肉及周围组织，暴露坐骨直肠窝，分别找到双侧卵巢后结扎并剪除，缝合，消毒。（3）术后处置：注射用青霉素钾（重庆市先锋动物药业有限公司，规格2.5 g/400万单位），每次8万U腹腔注射，每日1次，连续注射7 d，并常规饲养1个月。（4）动物模型：喷嚏试验［8］。先排空大鼠膀胱，将硬膜外导管经尿道插入大鼠膀胱，用微泵（购自长沙健源医疗科技有限公司）向膀胱内注入最大膀胱容量一半的美蓝生理盐水。将胡椒粉撒入大鼠鼻孔内，刺激出现喷嚏反射。仔细观察喷嚏时有无蓝色液体从尿道口流出，有尿液溢出为阳性，无则为阴性。Ⅱ组和Ⅲ组大鼠均为喷嚏试验阳性，Ⅰ组大鼠为阴性。

1.3 干预方法 Ⅲ组予推拿治疗：1）大鼠取俯卧位，施术者的左手轻轻放至在大鼠后背部，以起到固定作用，右手持棉签置于大鼠下腹关元穴行震颤手法3 min，然后用右手的中指和无名指顺时针方向按揉下腹部5 min。2）施术者右手食指和中指顺时针方向按揉腰骶部3 min，用棉签点按双侧次髎穴各1 min，最后用食指、中指和无名指3指并拢在腰骶部做横行擦法3min。每日治疗1次，共治疗30次。Ⅰ组和Ⅱ组均进行普通饲料喂养，不予推拿治疗。

1.4 观察指标 取材与切片制备 Ⅲ组治疗30次结束后，将3组大鼠处死取材。取耻尾肌组织（0.5 cm× 0.5 cm）放置于10.0%中性甲醛中固定12 h，进行脱水，石蜡包埋，将3μm厚切片裱于涂有多聚赖氨酸的清洁玻片上，并放置80℃烤箱内1 h，随后将其低温保存备用。HE染色切片进行脱蜡至水，苏木素浸染1min，然后用盐酸酒精脱去多余的苏木素，并在饱和碳酸锂溶液浸泡1 min，伊红染色2 min；在50%、75%、95%、 100%的酒精中分别浸泡1min脱水，二甲苯两次脱水总共10 min，再用中性树脂封片，在光镜下进行观察。切片及染色由北京百奥易康科技有限公司协助。图像采集与分析：利用OLYMPUS-DP72显微镜数码成像系统，分别在10×40倍光镜下观察耻尾肌组织切片，采集图像，在纵切面测量耻尾肌肌纤维宽度，在横切面测量耻尾肌肌纤维横截面积和直径。

1.5 统计学处理 应用SPSS15.0统计软件。计量资料以（±s）表示，均数间采用单因素方差分析判定组间差异性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠耻尾肌肌纤维宽度比较 见表1，图1。通过观察Ⅲ组与Ⅰ组耻尾肌肌纤维组织更接近，镜下可见肌纤维平行排列较均匀，肌纤维紧密相连，染色较均匀，与Ⅰ组比较，肌纤维宽度差异无统计学意义（P> 0.05）；而Ⅱ组镜下可见耻尾肌肌纤维排列紊乱，宽度变窄，萎缩，着色不均，并可见部分肌原纤维走行有弯曲甚至断裂，Ⅲ组肌纤维宽度与Ⅱ组比较，差异有统计学意义（P<0.001）；Ⅲ组与Ⅰ组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

表1 各组大鼠耻尾肌肌纤维宽度、横截面积和直径组织数据比较（±s）

表1 各组大鼠耻尾肌肌纤维宽度、横截面积和直径组织数据比较（±s）

与Ⅲ组比较，*P＜0.001。

组 别 n 肌纤维宽度（μm） 肌纤维横截面积（μm2） 肌纤维直径（μm）Ⅰ组 20 209.81±69.84Ⅱ组 17 116.03±20.05*51.63±9.08 2346.90±1224.49 42.24±6.52*693.23±264.53*Ⅲ组 18 215.36±47.02 51.19±9.77 2458.84±866.26

图1 各组大鼠耻尾肌肌纤维比较（HE染色，400倍）

2.2 耻尾肌肌纤维横截面积和直径 见表1，图2。Ⅲ组与Ⅰ组肌肉组织的形态接近，镜下可见肌纤维为染色均匀的粉红色，细胞核位于肌纤维的周边，肌纤维横截面积及直径差异无统计学意义（P>0.05）；Ⅱ组镜下可见耻尾肌肌纤维排列稀疏，着色不均匀，而且可见有很多的核中心移位，横截面积变小，Ⅲ组与Ⅱ组比较，差异有统计学意义（P<0.001）；Ⅰ组与Ⅱ组比较，差异有统计学意义（P<0.001）。

3 讨 论

女性控尿机制包括主动机制、尿道黏膜闭合机制和盆底解剖结构支持。被多数专家认可的关于SUI发病机制“完整理论［9］”和“吊床假说［10］”都说明了盆底肌群在维持控尿过程中的重要作用。组成盆底肌群的重要部分为肛提肌，肛提肌收缩，向上牵拉“吊床结构”关闭了膀胱颈，而耻尾肌又是肛提肌的重要组成部分，所以当耻尾肌变得薄弱或出现萎缩时则会导致SUI的发生［3］。

中医推拿手法，对SUI患者症状有很好的改善［6］，但理论研究匮乏。因此，本实验通过模拟分娩以及卵巢去势等女性SUI的发生机制，选用SUI大鼠模型耻尾肌作为观察对象，观察腰腹部推拿手法的干预对尿道组织形态变化的影响。实验结果表明，腰腹部推拿治疗后的SUI模型大鼠与SUI模型大鼠对照组相比，HE染色表现为耻尾肌肌纤维排列较齐，染色也较均匀，宽度、横截面积及直径指标更接近空白对照组，而未进行治疗的SUI模型大鼠对照组耻尾肌肌纤维排列紊乱，宽度变窄，着色不均，较多的核中心移位，横截面积及直径变小，提示推拿治疗对SUI大鼠耻尾肌组织形态有其改善作用。

进行腹部推拿治疗SUI时手法重点作用于关元穴及下腹部。关元穴及下腹部均为任脉所过之处。任脉为阴脉之海，禀受全身阴气，且主干循行于腹部，故在下腹部采用补益类手法振法和顺时针揉法，从而起到温肾壮阳、补虚固摄之功用。进行腰骶部推拿时重点施术区域位于足太阳膀胱经，足太阳膀胱经与膀胱的生理、病理密切相关。因为本病是膀胱气化功能失调所致，而这些膀胱之气输注于相应的膀胱经背俞穴，通过对腰骶部手法治疗可调节膀胱的气化功能，振奋膀胱经阳气，通调下焦水道，从而使得膀胱得以开阖有制。从现代医学神经肌肉组织解剖学来看，Barber等［11］认为肛提肌神经支配来源于骶3～5的骶神经分支。现代研究也表明，通过对骶部穴位的刺激可以兴奋骶神经分支的阴部神经，改善控尿能力［12］。与储尿有关的交感神经发出的神经冲动下传至腹下神经丛［13-14］，当对下腹部进行有效刺激后，交感神经传出纤维通过下腹神经和盆腔内脏神经传至膀胱和尿道，并释放去甲肾上腺素，兴奋α肾上腺能受体，使得盆底肌群肌肉节律性收缩，尿道阻力随之增加，从而改善控尿能力［15］。所以推测对腰骶部和腹部推拿治疗的SUI大鼠是通过改善耻尾肌纤维形态和功能从而增强了其控尿能力。

本研究分析了腰骶部及腹部推拿治疗对SUI组织形态学的影响，但肌肉取材标本例数有限，需进一步积累样本量进行论证，同时应设立尿动力学检测进行研究对比，进一步研究推拿对女性SUI的作用。

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Effect of M assage on Pubococcygeus M uscle Fibers of Stress Urinary Incontinence Rats

WU Zhili，WANGZheng，YIJin，et al. Outpatient Department for Preventive Treatment of Diseases，Beijing Massage Hospital，Beijing 100010，China.

Objective：To observe the effect ofmassage on pubococcygeusmuscle fiber of stress urinary incontinence rats，and to explore themechanism ofmassage on female stress urinary incontinence.M ethods：40 postpartum SD ratswere random ly divided into themassage treatment group and themodel group，and 20 healthy rats without birth were used as the blank group.Themodels weremade with the vaginal balloon dilatation plus bilateral oophorectomy.Themassage treatment group was treated withmanipulation of the lumbosacral region and abdomen，once a day，30 times.Then all the ratswere killed；the pubococcygalmuscle tissue was taken.Pubococcygalmuscle sections were stained with HE，and under the lightmicroscope image collected and analyzed，and the differences of the pubococcygeusmuscle fibers in all groupswere compared.Results：The width，area and diameter of pubococcygeusmuscle fiber of themassage treatment group were close to those of the blank group and compared withmodel group，the differencewas statistically significant（P<0.001）.There was no significant difference between themassage treatmentgroup and the blank group（P>0.05）.Conclusion：Massage can make the pubococcygeusmuscle fiber thickening，so as to improve the urine control ability，and provide a theoretical basis for themassage treatmenton SUI.

Massage；Stress urinary incontinence；Rats；Pubococcygeusmuscle

R244.1

A

1004-745X（2017）07-1215-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.07.027

2017-03-27）

北京市自然科学基金资助项目（7143187）