LPS诱导THP—1细胞释放蛋白表达的调节

欧明涛 邓玉冉 彭兴辉

摘要：目的：探讨LPS诱导THP-1细胞释放蛋白表达的调节。方法：LPS（1 μg/ml）诱导不同时间后，THP-1细胞上清液中蛋白含量变化及不同浓度LPS诱导THP-1细胞释放蛋白的表达和NF-κB的活性，LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白核转位变化。结果：LPS 组TNF-α 的含量均显著低于 LPS 组，处理LPS诱导THP-1细胞细胞上清液NF-κB的活性表达量呈明显下降趋势。结论：LPS可诱导 THP-1细胞TNF-α表达增多及NF-κB活化，导致蛋白表达增多及核转位，能抑制THP-1细胞TNF-α表达及NF-κB活化，调节蛋白的表达及核转位。

关键词：LPS；THP-1细胞；NF-κB（P-65）；核转位

前言

HMGB1为高迁移率族蛋白（high mobility group protein，HMGB1）为细胞核内蛋白，主要参与DNA复制、转录稳定核小体结构等作用[1，2]。HMGB1也是一种在脓毒症晚期引起多器官衰竭的重要炎性介质，其自身毒性和结合促炎因子相互作用是参与和加重脓毒症晚期器官衰竭的病理生理过程，从而介导了内毒素致死效应[3，4]。中药银杏叶提取物（extract of Ginkgobiloba，EGb761）是从银杏叶中提取的天然活性物质，其主要有效成分为黄酮糖苷类（24 %）和菇烯内醋类（6 %），EGb761是一类纯天然抗氧化剂，调节多种抗氧化酶活性，具有抗炎、抗癌、抑制血小板聚集、抗衰老等多种药理活性。已有研究表明EGb761对早期炎症因子TNF-α的抑制作用，在觀察银杏叶提取物EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节。

材料与方法：脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）；银杏叶标准提取物EGb761，THP-1，HMGB1抗体、核因子KBp65 抗体及辣根过氧化物酶标山羊抗鼠IgG 为Sigma产品。IL-1 β、IL-6 、TNF-α检测试剂盒。THP1 细胞培养，检测炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达，检测NF-κB的活化、检测不同时间点HMGB1蛋白的表达，检测不同浓度EGb761对HMGB1表达的影响，各组数据采用均数±标准差（mean ± SD）表示并应用统计学软件SPSS13.0进行处理。

结果：LPS诱导THP-1细胞可分泌大量的TNF-α炎性因子，THP-1细胞培养液中TNF-α浓度较LPS明显降低，检测THP-1细胞经LPS诱导后，NF-κB表达增高，THP-1细胞培养液中NF-κB含量随着EGb761干预时间延长，LPS诱导THP-1细胞蛋白含量升高，LPS诱导THP-1细胞蛋白含量降低，HMGB1蛋白含量随着EGB761浓度增加呈下降趋势

讨论：结果显示LPS诱导THP-1细胞，HMGB1表达量，结果显示EGb761可抑制HMGB1的核转位。HMGB1的中和抗体或其抑制剂丙酮酸乙酯的应用对上述病理损伤有明显减轻的作用，提高脓毒症动物的活率，表明HMGB1可作为临床治疗炎症性疾病的新靶点，通过探讨药物EGB761对HMGB1表达调节的研究为炎症性疾病提供新的治疗途径。认为EGB761能够通过下调核转录因子NF-κB的活化来抑制HMGB1蛋白的表达及核转位，但EGb761是直接还是间接作用于核转录因子NF-κB还不是很清楚，有待深入研究。

参考文献：

[1]. 朱光明，常雅萍.高迁移率族蛋白 B1的致炎细胞因子作用研究进展[J].国 际免疫学杂志，2006，29（4）：257-260.

[2]. 孙芳，王璐，闫兵等.银杏叶提取物活性成分及其药理作用[J].山东中医杂志，2012，3（33）：221-223.

[3]. 汪素娟，康安，狄留庆等.银杏叶提取物主要活性成分药动学研究进展[J].中草药，2013，3（5）：626-630.

[4]. Ying Ju Chen，Keh Sung Tsai，Chen Yuan Chiu，et al. EGb761 inhibits inflammatory responses in human chondrocytes and shows chondroprotection in osteoarthritic rat knee[J]. Journal of Orthopaedic Research，2013，31（7）：1032-1038 .