人脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6的表达变化及其意义

张绪美，徐政秀，张燕，陈敏，李晓蕾，王丹

(1潍坊医学院附属医院，山东潍坊261041；2日照市五莲县中医医院)



人脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6的表达变化及其意义

张绪美1，徐政秀2，张燕1，陈敏1，李晓蕾1，王丹1

(1潍坊医学院附属医院，山东潍坊261041；2日照市五莲县中医医院)

目的 观察人脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6的表达变化，并探讨其意义。方法 采用免疫组化SP二步法检测55例份脑胶质瘤组织和20例份正常脑组织中的Gab2、IgG、Integrinβ6。分析脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6表达的相关性，及Gab2、IgG、Integrinβ6表达与脑胶质瘤患者临床病理参数的关系。结果 脑胶质瘤组织中IgG、Gab2、Integrinβ6表达阳性分别为38(69.0%)、29(52.7%)、45(81.8%)例，正常脑组织中IgG、Gab2、Integrinβ6表达阳性分别为1(5.0%)、1(5.0%)、0例，脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达率均高于正常脑组织(P均<0.05)。脑胶质瘤组织中IgG与Gab2表达呈正相关(r=0.312 4，P<0.05﹚，IgG与Integrinβ6表达呈正相关(r=0.398 8，P<0.05﹚。脑胶质瘤未完整切除者Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达比例高于肿瘤完整切除者，肿瘤直径>5 cm者Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达比例高于直径≤5 cm者，肿瘤分级Ⅲ～Ⅳ级者Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达比例高于Ⅰ～Ⅱ级者(P均<0.05)。结论 人脑胶质瘤组织中IgG、Gab2、Integrinβ6呈高表达，并与肿瘤直径、肿瘤完整切除情况和肿瘤分级有关。IgG、Gab2、Integrinβ6可能协同参与了脑胶质瘤的发生发展。

脑胶质瘤；Gab2蛋白；免疫球蛋白G；整合素β6

脑胶质瘤起源于脑部神经胶质细胞，是最常见的颅内肿瘤，约占所有颅内肿瘤的45%，预后差。随着研究的深入，支架蛋白在肿瘤发生、发展过程中的作用渐渐引起学界关注。支架蛋白在胶质瘤发生发展中的作用成为研究的热点。Gabs家族蛋白是一类支架蛋白，是细胞信号系统的集合平台[1]。Gabs蛋白包括Gab1～4多个家族成员，其中Gab2调控细胞生长增殖、分化、凋亡、侵袭等生命过程，具有潜在的原癌基因特性，在人卵巢癌、肺癌、乳腺癌组织中高表达，并与肿瘤的侵袭转移相关[2～4]。免疫球蛋白G(IgG)是免疫球蛋白的一种，肿瘤源性IgG能够促进肿瘤细胞的生长[5]。整合素表达于恶性上皮性肿瘤组织[6]，与肿瘤的发生、发展和转移有着非常密切的关系。Integrinβ6是整合素家族分子之一。本研究观察了人脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6的表达变化，并探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取潍坊医学院附属医院、潍坊市人民医院2011年1月～2013年12月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤标本55例份。脑胶质瘤标本来源患者男30例，女25例；年龄11～74岁，中位年龄44岁；按WHO中枢神经系统胶质瘤分类标准，Ⅰ～Ⅱ级(低级别)25例，Ⅲ～Ⅳ级(高级别)30例。所有标本均用甲醛固定，石蜡包埋，做厚4 μm切片。另取20例正常脑组织(脑外伤患者减压术中取得)作为对照，标本来源患者男14例、女6例，年龄20～64岁(中位年龄46岁)。脑胶质瘤组与对照组患者的年龄、性别资料具有可比性。

1.2 试剂与材料 Gab2多克隆抗体购自Santa Cruz公司。IgG多克隆抗体购自Sigma公司。Integrinβ6抗体由潍坊医学院李文通博士提供。SP试剂盒、DAB试剂盒、AEC试剂盒均购自福州迈新生物公司，抗体均为工作液。

1.3 Gab2、IgG、Integrinβ6检测方法 采用免疫组化SP二步法检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中的Gab2、IgG、Integrinβ6。将石蜡标本做5 μm厚切片，常规脱蜡入水，热抗原修复，免疫组化SP法染色，Gab2、Integrinβ6两种抗体DAB镜下控制显色，IgG抗体AEC镜下控制显色。以PBS代替一抗作阴性对照。显微镜下随机观察10个高倍视野，每个视野计数100个细胞。以细胞质内出现红色颗粒为IgG阳性，以细胞膜和细胞质出现棕黄色颗粒为Gab2阳性，以细胞质出现棕黄色颗粒为Integrinβ6阳性。根据阳性细胞百分比和染色强度进行结果判定：阳性细胞百分比<5%计0分，5%～<25%计1分，25%～<50%计2分，≥50%计3分；细胞无着色计0分，浅棕黄色(淡红色)计1分，棕黄色(红色)计2分，棕褐色(深红色)计3分；两项得分相加，0～1分为蛋白表达阴性，≥2分为蛋白表达阳性。

1.4 统计学方法 采用SAS9.1统计软件进行统计分析。计数资料比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman等级相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6表达变化及其相关性 脑胶质瘤组织中IgG、Gab2、Integrinβ6表达阳性分别为38(69.0%)、29(52.7%)、45(81.8%)例，正常脑组织中IgG、Gab2、Integrinβ6表达阳性分别为1(5.0%)、1(5.0%)、0例，脑胶质瘤组织中Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达率均高于正常脑组织(P均<0.05)。脑胶质瘤组织中IgG与Gab2表达呈正相关(r=0.312 4，P<0.05﹚，IgG与Integrinβ6表达呈正相关(r=0.398 8，P<0.05﹚。

2.2 Gab2、IgG、Integrinβ6表达与脑胶质瘤临床病理参数的关系 肿瘤未完整切除者Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达比例高于肿瘤完整切除者，肿瘤直径>5 cm者Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达比例高于直径≤5 cm者，肿瘤分级Ⅲ～Ⅳ级者Gab2、IgG、Integrinβ6阳性表达比例高于Ⅰ～Ⅱ级者(P均<0.05)。详见表1。

3 讨论

弥漫浸润性生长是脑胶质瘤的显著特征，手术难以切除或根本无法手术。胶质瘤的浸润和复发是导致患者死亡的主要原因。因此，研究胶质瘤侵袭转移的机制，寻找有效的治疗靶点是胶质瘤治疗中迫切需要解决的问题。

近年来，支架蛋白的结构及功能成为人们关注的热点。支架蛋白是底物分子，它们能与酪氨酸激酶结合，发挥联系各种细胞内外信号蛋白之间交互调控的功能，并可以放大信号的传导，含有多个结构域和锚定位点[1]。作为一类支架蛋白，Gab2是Gabs家族中的重要成员。近年的研究发现，Gab2具有潜在的原癌基因特性，常在人类乳腺癌、卵巢癌、肺癌中高表达，并且其表达与恶性肿瘤的侵袭转移密切相关[7]。多项研究表明，Gab2调控着肿瘤细胞的生长增殖、侵袭迁移等过程。对肺癌细胞系的研究发现，Gab2可促进人肺癌细胞A549细胞的侵袭能力[8]。但是到目前为止，Gab2在脑胶质瘤中的表达及作用机制罕见报道。

表1 Gab2、IgG、Integrinβ6表达与脑胶质瘤临床病理参数的关系(例)

孙磊等[9]报道应用小RNA干扰技术降低Gab2表达使胶质瘤细胞系LN-229侵袭转移能力降低，说明Gab2与胶质瘤细胞的恶性生物学行为有关。另有研究[10]报道，肿瘤抑制因子miRNA-302a可通过抑制Gab2在胶质瘤中的表达，降低神经胶质瘤细胞的增殖、迁移和入侵能力。本研究结果显示，Gab2在正常脑组织中低表达，而在胶质瘤组织中高表达，并且随着临床分级增高、肿瘤直径增大其表达也增高，与文献报道一致，说明Gab2的表达与脑胶质瘤的发病、恶性进展有关，Gab2有望作为预测胶质瘤预后的指标，并可能成为一个抗胶质瘤治疗的新靶点。IgG是免疫球蛋白的一种。肿瘤细胞分泌的IgG是一种新发现的分子，主要来源于上皮源性肿瘤细胞，与肿瘤细胞分化、转移、局部侵入和患者的不良预后密切相关。Chen等[11]证实上皮来源的肿瘤细胞分泌的IgG能够促进肿瘤细胞的生长和生存。在结直肠癌组织中，IgG的表达与肿瘤的恶性程度(包括分化程度、Dukes分期)具有显著相关性，即结直肠癌分化程度越差、Dukes分期越高，IgG表达量越高[12]。最近，Lv等[13]发现涎腺腺样囊性癌细胞中IgG表达，并且IgG表达越高，肿瘤细胞之间的黏附性越低，其浸润侵袭能力越强。本研究中我们观察到，IgG在正常脑组织中低表达，在脑胶质瘤组织中高表达，且随着脑胶质瘤恶性度的增加，IgG表达水平逐渐升高，提示IgG异常高表达可促进胶质瘤的发生和恶性增殖[14]。另外，Xu等[15]在前列腺癌的研究中发现，IgG对肿瘤细胞的存活、增殖、迁移和入侵具有增强作用；通过小干扰RNA技术抑制前列腺癌细胞中IgG的表达后，细胞增殖标志物PCNA表达降低，凋亡标志物Caspase-3表达增高，认为IgG是前列腺癌治疗的潜在靶点。

整合素家族是细胞表面的黏附分子，常表达于肿瘤细胞表面，通过介导细胞之间及细胞与外界之间的信号传导而影响肿瘤细胞的生物学行为。赵艳霞等[16]报道整合素家族成员α6可能与胶质母细胞瘤的恶性增殖和侵袭等生物学行为密切相关。近年来，以Integrinβ6为靶点的靶向治疗为结肠癌的临床治疗提供了新的方向[17]。研究[18]证实，通过小干扰RNA技术抑制Integrinβ6基因表达后，可显著抑制结肠癌细胞的生长和增殖。本研究发现，Integrinβ6在正常脑组织中不表达，而在胶质瘤组织中高表达，随着脑胶质瘤分级升高、肿瘤直径增大、肿瘤切除难度增大，其表达也升高，这提示Integrinβ6表达与胶质瘤的恶性生物学行为关系密切，检测Integrinβ6可能对评估胶质瘤患者预后具有一定价值，Integrinβ6也有望成为脑胶质瘤新的治疗靶点。

本研究结果还显示，脑胶质瘤组织中IgG表达与Gab2、Integrinβ6表达均呈正相关，提示三者之间存在一定相互作用，共同参与脑胶质瘤的发生发展，其作用机制有待于进一步探讨。对这一现象继续深入研究，有望为脑胶质瘤的诊断、预后评估及靶向治疗提供新的思路。

[1] Nishida K, Hirano T. The role of Gab family scaffolding adapter proteins in the signal transduction of cytokine and growth factor receptors[J]. Cancer Sci, 2003,94(12):1029-1033.

[2] Wang Y, Sheng Q, Spillman MA, et al. Gab2 regulates the migratory behaviors and E-cadherin expression via activation of the PI3K pathway in ovarian cancer cells[J]. Oncogene, 2012,31(20):2512-2520.

[3] Xu XL, Wang X, Chen ZL, et al. Overexpression of Grb2-associated binder 2 in human lung cancer[J]. Int J Biol Sci, 2011,7(5):496-504.

[4] Bocanegra M, Bergamaschi A, Kim YH, et al. Focal amplification and oncogene dependency of GAB2 in breast cancer[J]. Oncogene, 2010,29(5):774-779.

[5] Kyrou IE, Papakostas JC, Ioachim E, et al. Early ischaemic preconditioning of spinal cord enhanced the binding profile of heat shock protein 70 with neurofilaments and promoted its nuclear translocation after thoraco-abdominal aortic occlusion in pigs[J]. Eur J Vasc Endovasc Surg, 2012, 43(4):408-414.

[6] Arihiro K, Kaneko M, Fujii S, et al. Significance of alpha 9 beta 1 and alpha v beta 6 integrin expression in breast carcinoma[J]. Breast Cancer,2000,7(1):19-26.

[7] Bocanegra M, Bergamaschi A, Kim YH, et al. Focal amplification and oncogene dependency of GAB2 in breast cancer[J].Oncogene, 2010,29(5):774-779.

[8] 史立宏,陶蓉,王云甲，等.Gab2对人肺癌细胞A549侵袭能力影响及其机制的探讨[J].中华肿瘤防治杂志,2013,20(16):1207-1211.

[9] 孙磊,刘雨清,李小龙,等.Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究[J].中国肿瘤临床,2014(9):551-554.

[10] Ma J, Yu J, Liu J, et al. MicroRNA-302a targets GAB2 to suppress cell proliferation, migration and invasion of glioma[J]. Oncol Rep, 2017,37(2):1159-1167.

[11] Chen Z, Qiu X, Gu J.Immunoglobulin expression in non-lymphoid lineage and neoplastic cells[J]. Am J Pathol, 2009,174(4):1139-1148.

[12] Niu N, Zhang J, Huang T, et al. IgG expression in human colorectal cancer and its relationship to cancer cell behaviors[J]. PLoS One, 2012,7(11):e47362.

[13] Lv WQ, Peng J, Wang HC, et al. Expression of cancer cell-derived IgG and extra domain a-containing fibronectin in salivary adenoid cystic carcinoma[J]. Arch Oral Biol, 2017,21(81):15-20.

[14] 薛雨健,张杰,汪明玉,等.IgG在人脑胶质瘤中的表达及其与OPN、MMP-2、MMP-9、P16的关系[J].解剖科学进展,2013,19(6):513-515,519.

[15] Xu Y, Chen B, Zheng S, et al. IgG silencing induces apoptosis and suppresses proliferation, migration and invasion in LNCaP prostate cancer cells[J]. Cell Mol Biol Lett, 2016,3(21):27.

[16] 赵艳霞,孙华平,陈胜,等.Integrin α6在人胶质母细胞瘤组织中的表达及其临床意义[J].肿瘤防治研究,2013(7):656-659.

[17] Liang B, Shahbaz M, Wang Y, et al. Integrinβ6-targeted immunoliposomes mediate tumor-specific drug delivery and enhance therapeutic efficacy in colon carcinoma[J]. Clin Cancer Res, 2015,21(5):1183-1195.

[18] Song L, Fan Z, Jun N, et al. Tumor specific delivery and therapy mediate by integrin β6-target immunoliposomes for β6-siRNA in colon carcinoma[J]. Oncotarget, 2016,7(51):85163-85175.

山东省医药卫生科技发展计划项目(2015ws0054)；潍坊市卫生局科研项目计划(2014011)；潍坊医学院附属医院青年创新基金(K12QC1002)。

张绪美(E-mail：zhang2005033@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.27.018

R739.41

B

1002-266X(2017)27-0061-03

2017-03-24)