新-流二联灭活疫苗不同方法免疫后抗体水平检测

江兴华 福州大北农生物技术有限公司福州350014

新-流二联灭活疫苗不同方法免疫后抗体水平检测

江兴华 福州大北农生物技术有限公司福州350014

为探讨鸡新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗与禽流感抗体不同组合方法免疫商品蛋鸡和商品肉鸡后抗体水平变化规律，试验分别采用A、B、C三种方法免疫商品蛋鸡与商品肉鸡各40羽，A免疫方法为只接种新-流二联灭活苗，B免疫方法为接种新-流二联灭活苗的同时注射禽流感抗体，C免疫方法为接种新-流二联灭活苗7 d后注射禽流感抗体，D组为空白对照组，各组均于免前及免后2 d、6 d、10 d、14 d、21 d、28 d、35 d采血检测新城疫与禽流感抗体水平。结果发现，商品蛋鸡与商品肉鸡各免疫组，免后新城疫抗体均先开始下降，免后第10 d抗体开始上升，第14 d开始快速上升，第35 d达到最高，蛋鸡组最高达8log2，而肉鸡组最高达7log2。商品蛋鸡组中配合注射禽流感抗体免疫组，禽流感抗体先上升，然后下降，再继续上升，禽流感抗体保持较高的水平，不低于3log2。而未注射抗体组，禽流感抗体先下降，至第10 d下降至2log2以下，然后开始快速上升。而商品肉鸡各组禽流感抗体免后均开始下降，未注射抗体组，下降至第10 d后开始上升，注射抗体组免后第10 d时下降的幅度比未注射抗体组小，且下降至第15 d后才开始上升。说明商品蛋鸡免疫新-流二联灭活疫苗时配合注射禽流感抗体，短期内对机体禽流感抗体水平提升明显，而在商品肉鸡上配合注射流感抗体对机体禽流感抗体水平提升不明显。

鸡新城疫-禽流感（新-流）二联灭活疫苗免疫方法商品蛋鸡商品肉鸡抗体检测

鸡新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒引起的一种烈性病毒性传染病，是全球范围内重要的家禽传染病之一。禽流感（Avian Influence，AI）是由正黏病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的禽类的一种传染性疾病，鸡、火鸡、鸭和鹌鹑等家禽及野生鸟类均可感染[1]。目前在我国流行的禽流感以低致病性禽流感H9N2亚型为主型,占禽流感阳性鸡群总数的93.89%[2]。鸡新城疫和禽流感是世界范围流行的禽类疫病，给禽业生产造成巨大的经济损失，免疫接种是控制鸡新城疫和禽流感的有效方法[3]。虽然免疫接种是一种有效的方法，但是由于各种原因导致的免疫失败还是时有发生。在疫苗免疫过程中存在免疫空档期，对H9N2都采用灭活油苗免疫预防，免疫注射油苗仅仅产生循环抗体，且产生抗体的速度较慢，产生可以起到保护作用的抗体滴度一般需要2周以上，故存在短暂的免疫空档期可能让病毒入侵[4]。为了提高新-流二联灭活疫苗免疫后的禽流感抗体滴度，缩短免疫空档期，本试验在免疫新-流二联灭活疫苗时配合注射禽流感抗体，检测、观察机体禽流感抗体水平变化规律，从而为有效免疫预防新城疫与禽流感提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验用疫苗与禽流感抗体鸡新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗（简称新-流二联灭活疫苗）由本公司生产；禽流感抗体由本公司从免疫禽流感试验疫苗样品（H9N2 HP株）试验鸡中提取，禽流感抗体效价达8log2。

1.2 试验用鸡7日龄商品蛋鸡40羽，由福州市农工商种禽公司提供；7日龄商品肉鸡40羽，由福建圣农集团孵化场提供。

1.3 试验分组及免疫

1.3.1 商品蛋鸡组选择健康有活力的7日龄商品蛋鸡40羽，随机编为A、B、C、D组，每组各10羽，并分别打上翅标编号，A组于7日龄颈部皮下注射新-流二联灭活疫苗0.25 mL，B组于7日龄颈部皮下注射新-流二联灭活疫苗0.25 mL，同时肌肉注射0.5 mL禽流感抗体，C组于7日龄颈部皮下注射新-流二联灭活疫苗0.25 mL，于免后第7 d肌肉注射0.5 mL禽流感抗体，D组不免疫作为阴性对照组。

1.3.2 商品肉鸡组选择健康有活力的7日龄商品肉鸡40羽，随机编为A、B、C、D组，每组各10羽，并分别打上翅标编号，A组于7日龄颈部皮下注射新-流二联灭活疫苗0.25 mL，B组于7日龄颈部皮下注射新-流二联灭活疫苗0.25 mL，同时肌肉注射0.5 mL禽流感抗体，C组于7日龄颈部皮下注射新-流二联灭活疫苗0.25 mL，于免后第7 d肌肉注射0.5 mL禽流感抗体，D组不免疫作为阴性对照组。

1.4 抗体检测商品蛋鸡与商品肉鸡免疫组及对照组试验鸡分别于免疫前与免疫后2、6、10、14、21、28、35 d进行采血，检测新城疫与禽流感抗体（结果取10羽鸡的抗体几何平均值）。

1.5 抗体检测方法参考中华人民共和国兽用生物制品规程2000年版，应用红细胞凝集抑制试验的方法。用PBS液将待检血清做2倍系列稀释，加入含4HAU的血凝素抗原液，并设PBS液和4HAU的血凝素抗原液对照，充分振摇后置室温下20～40 min或2～8℃下40～60 min，当红细胞对照孔中的红细胞呈显著钮扣状时判定结果。以使红细胞凝集完全抑制的血清最高稀释度作为判定终点。

2 结果与分析

2.1商品蛋鸡组免后抗体水平检测结果从表1-表2可知，各免疫组免后新城疫抗体均先开始下降，下降至第10 d后抗体开始上升，免后第14 d开始快速上升，至第35 d达到最高，达8log2以上（见表1）。免疫当天配合注射抗体免疫组，禽流感抗体先上升，然后下降，再继续上升，在注射抗体后禽流感抗体保持较高的水平，最低在3log2以上；免疫7 d后注射抗体组，禽流感抗体先下降，至第6 d下降至2.9log2，6 d后开始上升；未注射抗体组，禽流感抗体先下降，至第10 d下降至2log2以下，然后开始快速上升，不同免疫组至第35 d抗体均升至8log2以上（见表2）。

表1 商品蛋鸡组免后新城疫抗体水平检测结果

表2 商品蛋鸡组免后禽流感抗体水平检测结果

2.2 商品肉鸡组免后抗体水平检测结果各免疫组免后新城疫抗体均先开始下降，下降至免后第10 d抗体开始上升，免后第14 d开始快速上升，至第35 d达到最高，达7log2以上（见表3）。各免疫组禽流感抗体免后均开始下降，未注射抗体组，下降至第10 d后开始上升，注射抗体组免后至第10 d时下降的幅度比未注射抗体组小，且下降至第15 d后才开始上升，两组注射抗体组注射抗体后，禽流感抗体均未出现上升情况，只是下降的幅度较小、比较缓慢，与商品蛋鸡组有较大的差别（见表4）。

表3 商品肉鸡组免后新城疫抗体水平检测结果

3 讨论

表4 商品肉鸡组免后禽流感抗体水平检测结果

1）尽管大多数鸡场使用有效疫苗对新城疫与禽流感进行了预防免疫，但由于多种原因导致的免疫失败而造成这两种疾病时有发生，目前对这两种疾病尚无有效药物治疗，采取被动免疫预防不失为一种有效的措施[5]。刘春红等[6]试验表明：主动免疫和被动免疫同时作用对整个鸡群具有一定的免疫保护作用。本试验在免疫新-流二联灭活疫苗时配合注射禽流感抗体，相当于主动免疫与被动免疫相结合，本试验蛋鸡组在免疫疫苗并注射抗体后，禽流感抗体在短期内升高明显，在7 d左右保持较高，免后抗体最低均高于3log2，与单独免疫组相比抗体高，从本试验禽流感抗体结果看与以上观点均相符。

2）从本试验结果看出免疫后商品蛋鸡与商品肉鸡的禽流感抗体水平变化存在较大的差异，注射禽流感抗体后，蛋鸡组禽流感抗体有短暂的上升，上升明显，而肉鸡组禽流感抗体未上升，只是免疫后至15 d内禽流感抗体比未注射抗体组高些，后期禽流感抗体上升也较慢，可能与商品肉鸡生长速度快，生长周期短，免疫器官发育较迟缓有关，在刘英豪等[7]的研究中也提到这一观点。

3）试验中配合注射流感抗体组，禽流感抗体最低值为3log2，而未注射抗体组最低为2log2，虽然提高了两倍，但是该禽流感抗体水平未必能获得有效的保护。有资料表明，要使雏鸡对禽流感的攻毒获得完全保护的临界值应在4log2～6log2[8]，所以，还得想办法使免后禽流感抗体最低值保持在4log2以上，才会有更好的免疫保护效果。

4）试验针对新-流二联灭活苗使用不同组合方法免疫后的抗体水平变化进行研究，要观察各组的免疫效果的差别，不仅要看抗体水平的高低，笔者认为还应结合攻毒保护率进行综合分析，至于攻毒保护效果还有待进一步研究。

4 结论

本试验条件下，免疫新-流二联灭活疫苗配合注射禽流感抗体组与单独免疫新-流二联灭活疫苗组对比，配合注射禽流感抗体组在免后早期、短期内禽流感抗体有一定的提升，商品蛋鸡组禽流感抗体提升较明显，而在商品肉鸡组禽流感抗体提升不明显。

[1]殷震,刘景华.动物病毒学[M].2版.北京:科学出版社,1997: 704-705.

[2]唐秀英,田国斌,赵传珊,等.中国禽流感流行株的分离鉴定[J].中国畜禽传染病,1998,20(1):1-5.

[3]曹绘,李宝臣,李漫,等.鸡新城疫和禽流感（H9型）二联灭活疫苗不同佐剂的免疫效果试验[J].浙江畜牧兽医,2015 (6):1-3.

[4]孙海龙,左绍航,王林果,等.当前养禽业中禽流感的流行及免疫现状[J].兽医导刊,2012(2):30-32.

[5]张桂枝,靳双星.抗新城疫、禽流感（H5、H9）多价二联卵黄抗体的研制及应用[J].广东农业科学,2009(9):157-158.

[6]刘春红,余兴龙,李波,等.禽流感高效价卵黄抗体的制备和应用[J].湖北畜牧兽医,2010(6):6-7.

[7]刘英豪,陆桂丽,沙依兰古丽,等.新疆商品代AA肉鸡接种禽流感疫苗的免疫效力观察[J].新疆畜牧业,2009(1):11-13.

[8]吴庭才,张春杰,郭向鹏.禽流感母源抗体消长规律和免疫保护抗体临界值的测定[J].洛阳农业高等专科学校学报, 2002,22(3):223-224.

Comparision of antibody levels against different inoculating methods of bivalent inactivated vaccines containing newcastle disease virus and avian influenza virus

Jiang Xinghua
(Fuzhou Dabeinong Biotechnology Co.Ltd.,Fuzhou 350014)

Respectively,forty commodity layers and forty commercial broilers were inoculated by A,B,C three methods to compare antibody levels against newcastle disease virus（NDV）and avian influenza virus(AIV).A stood for only inoculating bivalent inactivated vaccines containing NDV and AIV(NDV-AIV vaccines).B stood for inoculating antibodies against AIV at once when inoculating NDV-AIV vaccines.C stood for inoculating antibodies against AIV on 7th day after inoculating NDV-AIV vaccines.D group is for control.Antibody levels against NDV and AIV of all groups were detected before inoculating and on 2,6,10,14,21,28,35 day post-immunization,respectively.The results showed that antibody levels against NDV of all immune groups decreased in the early stage,and began to increase since 10th day,respectively ending up with 8log2 in commodity layers and 7log2 in commercial broilers on 35th day,and that antibody levels against AIV of immunized commodity layers by B,C methods increased in advance and then decreased and then increased,and the least antibody levels were more than 3log2,and that antibody levels against AIV of immunized commodity layers by A method decreased in advance and began to increase rapidly since 10th day,and that antibody levels against AIV of all immunized commercial broilers decreased in advance,differently,began to increase since 10th day by A method and began to increase since 15th day by B,C methods.In conclusion,antibody levels against AIV of immunized commodity layers observably increased in a short time by inoculating both NDV and AIV vaccines and antibodies against AIV,but antibody levels against AIV of immunized commercial broilers increased indistinctively.

Bivalent inactivated vaccines containing NDV and AIV Inoculating methods Commodity layers Commercial broilers Detection of antibodies

A

1003-4331（2017）04-0013-03