附子理中汤超微颗粒与传统饮片的毒性对比研究

杨春燕，薛志红，姚 凯

（安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 230088）

附子理中汤超微颗粒与传统饮片的毒性对比研究

杨春燕，薛志红，姚 凯

（安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 230088）

附子理中汤出自于张仲景的《伤寒论》，由制附子、炒白术、党参、干姜、炙甘草等五味中药共同组成，具有回阳补虚、温中散寒之效.本文以"附子理中汤"为研究对象，拟采用动物实验比较附子理中汤超微颗粒与附子理中汤传统煎法中的毒性，并采用高效液相法（HPLC法）检测中药饮片与超微颗粒中有毒成分（乌头碱、次乌头碱等）的水平；结合急性毒性实验结果，分析附子理中汤超微颗粒及附子理中汤传统煎剂的毒性效应与毒性成分的关系.

超微颗粒；传统饮片；乌头碱；次乌头碱；新乌头碱

中药超微颗粒是指采用现代科学技术技术与传统的中药炮制技术相结合，将中药饮片粉碎成粒径为微米级的超微粉，无需煎煮，直接冲服的一种新型饮片[1].中药饮片经超微粉碎机粉碎成超微细粉后，其药材的细胞壁基本被全部破坏，有效成分能迅速、彻底地溶出，冲服时原饮片的成分不仅全部保留，而且所含有效成分更加易于吸收，并可在提高有效成分生物利用度的基础上，大大降低处方的用药剂量，节约资源，便于服用[2].目前，据国内外很多研究表明，中药超微颗粒的药效远远优于传统饮片.唐铭翔[3]通过离体豚鼠实验观察发现：四逆汤超微颗粒较中药饮片对离体豚鼠具有更强的镇痛、麻痹作用.张祥伟，罗奇志，伍彪等[4]通过临床试验发现小柴胡汤复方经超微粉碎后水溶性成分溶出度增加，药效的有效化学成分总黄酮及黄芩苷溶出量是传统饮片的2倍.蔡光先[5]等进行28味常用中药（人参,黄芪,白术,山药,白芍等）饮片与散剂中用量的研究中发现达到同种药效时，超微颗粒的用量最少.

附附子理中汤出自于张仲景的《伤寒论》，由制附子、炒白术、党参、干姜、炙甘草等五味中药共同组成，具有回阳补虚、温中散寒之效，主治五脏中寒，口噤，四肢强直，失音不语；下焦虚寒，火不生土，脘腹冷痛，呕逆泄泻等.

附子理中汤中的附子为大辛、大热、大毒之品，若服用不慎，易引发严重的神经、肝脏毒性反应，甚者导致死亡.在传统煎法中，附子通常先煎煮一段时间后再与干姜、炙甘草共同煎煮.有实验证明,附子与干姜、炙甘草共煎时，附子中有毒成分乌头碱的含量随甘草剂量增加而减少，说明甘草具有有效解除附子毒性的作用[6].何丹[7]认为甘草能使附子减毒增效，其机制可能在于甘草中某些成分能结合生物碱形成络合物或促进生物碱的水解.刘红霞[8]用傅里叶变换红外光谱(FT限)技术对不同配伍方式的附子理中汤水煎液进行了研究，结果显示不同配伍方式样品的红外谱图特征具有一定的变化规律，说明附子理中汤中甘草与附子有关成分相互发生了反应.

据目前的资料来看，研究表明在附子理中汤在共煎的过程中，甘草对降低附子的毒性，起到了很大的作用.相对比下，附子理中汤的超微颗粒饮用时只需用温开水冲泡十到二十分钟，无需共同加热、混合，附子超微颗粒中的有毒成分能否能被甘草超微颗粒所制约还不得而知.有关附子理中汤超微颗粒的毒性情况如何，目前尚未有相关的研究结果见诸于报.

若取得预期效果，该项目的完成有助于进一步判断临床上附子理中汤超微颗粒取代附子理中汤传统煎剂的可行性，也为其它有毒中药超微颗粒的应用提供更有价值的参考信息.

1 仪器与试剂

1.1 仪器高效液相色谱仪 (1260系列,美国安捷伦)；紫外可见分光光度（UV1000，天美（中国）科学仪器有限公司）；LB801型超级恒温器(辽宁市恒温仪器厂)；分析天平(FA2004,上海良平仪器仪表有限公司)；LDZ4-1.2高速离心机(徐州博成医疗器械销售有限公司)；自动进样器（安捷伦，美国）；旋转蒸发器（RE5299,上海申生科技有限公司）.

1.2 试剂制附子、炒白术、党参、干姜、炙甘草传统饮片 (Trad itional cut crude drug,TCCD)购自亳州中药材市场；制附子、炒白术、党参、干姜、炙甘草超微颗粒(ultramcro-cut crude drug,UCCD)由安徽新华学院药学院实验室提供；对照品购自中国药品检验所；乙腈、浓氨水、乙醚、盐酸为分析纯.

2 实验方法

2.1 对照品溶液的配制：分别精密称取乌头碱对照品5.00mg、次乌头碱对照品5.00mg、新乌头碱对照品各5.00mg，分别置于50mL容量瓶中，用用75%甲醇溶液定容，配成0.1mg／mL的对照品溶液.

2.2 供试品溶液的配制

2.2.1 附子理中汤传统煎剂溶液（A）的配制

称取制附子、干姜、炒白术、炙甘草、党参传统饮片各 9g、15g、12g、6g、6g，按 1:10的比例加500m1的蒸馏水，用回流法提取1.5h，真空泵抽滤.抽滤后的残渣加水400m1，再回流提取1.5小时，真空抽滤.合并两次抽滤的滤液，至旋转蒸发仪上55℃下浓缩至100mL.

(2) 在整个竖井模拟施工过程中，每一开挖循环结束时，井底都出现了应力集中现象，并且随着开挖深度的增加而越发明显，剪应力也随之增大，所以开挖结束后应加强掌子面处井壁的支护，尽快进行初期衬砌。

精确吸取2mL浓缩的上清液，于离心机中离心(12000r/min)15min.精密吸取0.5mL上清液,置于10mL离心试管中，加入0.5mL浓氨水，再加入3mL乙醚充分搅拌3min,再离心(3000r/min)15min.离心后静置15min后，分取乙醚层置10mL离心管，加入1mL0.1mo1/L盐酸溶液,充分搅拌lmin，离心(3000r/min)5min.分取乙醚层于50℃自然挥发至干，挥发后的残渣用100μl乙睛充分溶解，即制得传统饮片的供试品溶液(A).

2.2.2 附子理中汤超微饮片供试品溶液(B)的配制

称取制附子、干姜、炒白术、炙甘草、党参传统饮片各9g、15g、12g、6g、6g，，分别放置于保温杯中，按1:10的比例加新制的开水 (95℃以上)400mL密封浸泡1.5h.浸泡后的药材用纱布过滤，过滤后的滤渣加新制的开水400mL再浸泡1.5h，充分过滤.合并两次过滤的滤液，至旋转蒸发仪上50℃下浓缩至100mL.

取浓缩后的溶液参照“2.2.1”相关内容，制得附子理中汤超微饮片的供试品溶液(B).

3 实验结果

3.1 高效液相色谱图

在同等实验条件下，乌头碱、次乌头碱和新乌头碱成分均能与其他成分充分分离，其保留时间分别为25.30min、20.70min、18.20min.而.阴性对照品在乌头碱、次乌头碱、新乌头碱处无干扰，见图1-1.

图1 -1 附子理中汤传统饮片和超微饮片的HPLC图谱

3.2 线性关系考察

3.3 样品侧定结果

分别精密称取附子理中汤传统饮片3份、超微饮片3份，按“1.2.3”步骤操作，得到附子理中汤的供试品溶液.进样50μL，分别进行乌头碱、次乌头碱和新乌头碱三种成分的含量测定，结果见表1-3,1-4.从表中看出，附子理中汤超微饮片水提取液与传统饮片中三种乌头碱的含量存在着明显差异.与附子理中汤传统饮片的水提液相比，其超微饮片水提液中的乌头碱和新乌头碱的成分含量均显著提高.其中，附子理中汤超微饮片中的乌头碱成分的含量是其传统饮片的3.77倍，而新乌头碱成分的含量高达其传统饮片的15.72倍，但次乌头碱的成分含量无明显差异.

4 结论

本实验结果显示，附子理中汤超微颗粒中乌头类生物碱成分的含量显著高于其传统饮片.附子理中汤水提液中乌头类生物碱成分的含量的高低主要取决于乌头类生物碱从药材中溶出率.附子理中汤乌头碱类生物碱成分的溶出率主要取决于中药材与水的温度、时间及接触面积.制附子为根茎类药材，材质坚硬细密，细胞间隙较小，其乌头碱类成分很难被溶出来.同时，附子中乌头碱类生物碱成分的极性相对较小，一般常选用氯仿、乙醚等有机溶剂进行有效提取.而附子理中汤超微饮片则是将制附子、炒白术、党参、干姜、炙甘草等五种中药材经过超微粉碎机充分粉碎，其细胞壁均已被基本完全破坏.经过充分粉碎后的药材非常易溶于水，并且与水迅速增大接触面积，其有效成分非常利于被溶出来.

在相同剂量的条件下，附子理中汤超微饮片中的乌头类生物碱类毒性成分的浸出率显著高于其传统饮片的毒性.相对而言，附子理中汤超微饮片毒性成分的服用量也就高于其传统饮片.附子理中汤传统饮片的水煎提取法能非常有效地促进双酷型乌头类生物碱的水解及其与甘草之间的作用，从而非常有效地降低附子的毒性.通过本次实验，毒性中药材是否可制成超微饮片，服用时如何调整用法剂量，应是临床应用非常值得考虑的重要问题.

〔1〕蔡光先,杨永华.中药饮片改革的新探索—单味中药超微饮片 [J]．湖南中医杂志，2010，16（2）：50．

〔2〕汪涛，孙亮，粱蓉梅，宓鹤鸣.中药超微粉碎的研究进展与应用前景[J].药学实践杂志,2011,25(3): 129-133.

〔3〕唐铭翔，周知午，曾嵘，周于禄．四逆汤超微颗粒与传统饮片对离体豚鼠心脏作用的比较研究[J]．湖南中医学院学报，2014，26(1)：3-4．

〔4〕张祥伟，罗奇志，伍彪，等.小柴胡汤超微饮片与常规饮片化学成分溶出特性的对比研究 [J].时珍国医国药,2009,20(11):2750-2752.

〔5〕蔡光先，刘柏炎.28味常用中药饮片汤剂与散剂中用量的研究[J].中国实验方剂学杂志,2004,10 (2):63-64.

〔6〕裴妙荣，王世民，李晶．附子理中汤中甘草对附子解毒作用的相关性分析 [J]．中国中药杂志，2012，21(1)：50—52.

〔7〕何丹，刘凤琴，李焕德.甘草解毒作用研究进展[J].中南药学，2009,7（12）:927-931.

〔8〕刘红霞,孙素琴,杨峻山.现代红外光谱技术用于复方附子理中汤的配伍研究[J].光谱学与光谱分析,2012,27(7):1316-1318.

R282

A

1673-260X（2017）07-0163-03

2017-04-09

安徽新华学院资助科研项目（2016zr014）；安徽省级高校自然重点课题：附子理中汤超微颗粒与传统饮片的毒性对比研究(KJ2015A307)