RP—HPLC法测定黄连上清片中栀子苷的含量
2017-08-01贾梅林
贾梅林
摘 要:本文采用高校液相测定了黄连上清片中栀子苷的含量,固定相为:安捷伦Cl8(4.6mm×250mm,5um),乙腈-甲醇-水(10:5∶85)为流动相,检测波长为238nm,流速1.0mL·min-1,柱温:30℃。栀子苷在10~120μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。栀子苷的平均回收率为99.2%,RSD为0.91%(n=6);此方法简便、准确、重现性好,可用于黄连上清片中栀子苷的含量测定。
关键词:黄连上清片;栀子苷;含量
黄连上清片具有清热通便,散风止痛的功效。黄连上清片常用于内热火盛引起的头晕脑胀、大便干燥、牙龈肿痛、咽喉红肿、耳痛耳鸣、口舌生疮、暴发火眼等。黄连上清片由黄连、大黄、栀子(姜制)、黄芩、菊花、连翘、蔓荆子(炒)、荆芥穗、薄荷、黄柏(酒炒)、防风、旋覆花、石膏、桔梗、白芷、甘草、川芎组成。栀子别名:黄栀子、山栀、白蟾,是茜草科植物栀子的果实。栀子具有护肝、镇静、止血、利胆、降压、消肿等作用。栀子常用于治疗黄疸型肝炎、扭挫伤、高血压、糖尿病等症。《药性赋》记载:“味苦,性大寒,无毒。沉也,阴也。其用有二:疗心中懊憹颠倒而不得眠,治脐下血滞小便而不得利。易老云:轻飘而象肺,色赤而象火,又能泻肿中之火。”栀子含有环烯醚萜、二萜、三萜、黄酮、有机酸酯、挥发油、多糖及各种微量元素,具有利胆、保肝、降压、降脂、降血糖、抗菌、消炎等丰富的药理活性[1-4]。本文采用高校液相测定了黄连上清片中栀子苷的含量。
1 仪器与试药
美国必能信超声波清洗机(北京星越天成科技有限公司);色谱柱温箱(北京国谱科技有限公司);Aurora-F1实验室自动洗瓶机(杭州喜瓶者生物技术有限公司);LC600A梯度液相色谱仪(南京科捷分析仪器有限公司);WIGGENS AVANT经济型超声波清洗器(北京桑翌实验仪器研究所);FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平(北京同德创业科技有限公司);便携式PH计(北京恒奥德仪器仪表有限公司);SYZ-B石英亚沸蒸馏水器(常州市精达仪器制造有限公司);HH-601超级恒温水浴锅(常州市华怡仪器制造有限公司);GQ-722型数显分光光度计(南京固琦分析仪器制造有限公司)。栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈(上海拜力生物科技有限公司)、三乙胺(广州市西陇化工有限公司)、甲醇(上海拜力生物科技有限公司)、冰醋酸(北京迪科马科技有限公司)、磷酸(北京迪科马科技有限公司)、醋酸钠(北京亚太龙兴化工有限公司)。
2 含量测定
2.1 色谱条件:依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下[5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为(4.6mm×250mm,5um);乙腈-甲醇-水(10:5:85)为流动相;检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不得低于2000。
2.2 供試品溶液的制备
取黄连上清片,研细,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加人甲醇50ml,称定重量,超声处理5分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取栀子苷对照品约5mg,用甲醇溶解并稀释成每1ml中含20?g的溶液,作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取黄连、大黄、黄芩、菊花、连翘、蔓荆子、荆芥穗、薄荷、黄柏、防风、旋覆花、石膏、桔梗、白芷、甘草、川芎药材,按样品制备工艺制成阴性对照样品,照供试品溶液的制备方法制成阴性液,依上述方法测定,结果在栀子苷出峰处阴性液无色谱峰,结果阴性试验没有干扰,表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为10、20、40、60、80、100、120μg·mL-1的对照品溶液,分别精密吸取10μL注入HPLC,记录色谱图。以峰面积积分值A(μg)为横坐标,进样量为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。试验表明,栀子苷对照品在10~120μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液,精密吸取栀子苷对照品溶液10μL重复进样6次,测定峰面积积分值,对照品峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明,本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批黄连上清片样品6份,分别依照2.3项下供试品制0.82%,结果表明,此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液,分别在0,2,4,6小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪,进样测定,供试品栀子苷峰面积积分值的RSD为0.73%。结果表明栀子苷至少在6小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验,取已知含量的同一批供试品各6份,精密称定,分精密添加一定量的栀子苷对照品,按供试品制备所述方法制备供试品溶液,测定含量(同时测定样品含量),计算回收率。6次测定的平均回收率为99.2%,RSD为0.91%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法,测定黄连上清片三批样品中栀子苷的含量,含量为3.56mg/g、3.62mg/g、3.62mg/g。
3 讨论
分别考察乙腈-水(35:65),乙腈-甲醇-水(10:5:85),水-乙腈-三乙胺(82∶18:0.01),甲醇-水-冰醋酸(20∶80∶1),甲醇:水:冰醋酸:三乙胺(30:70:0.03:0.06),乙腈-0.2%磷酸水溶液(13∶87),乙腈-水(9∶91),乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)不同比例的流动相,结果以乙腈-甲醇-水(10:5:85)为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用乙腈-甲醇-水(10:5:85)为流动相。此方法简便、准确、重现性好,可用于黄连上清片中栀子苷的含量测定。黄连上清片中栀子苷的含量不少于3.0mg/g。
参考文献
[1]时宇静,黄洋,郭姗姗,姜晶,苏丹,赵晔,高英杰,崔晓兰.栀子提取物对单纯疱疹病毒1型感染小鼠VP16mRNA和IFN-γmRNA的影响[J].病毒学报,2009(01).
[2]周峻伟.栀子苷、黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血模型缺血脑组织单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的影响[J].中医药学刊,2004(06).
[3]张立明,何开泽,任治军,蒲蔷.栀子中京尼平甙对CCl4急性小鼠肝损伤保护作用的生化机理研究(英文)[J].应用与环境生物学报,2005(06).
[4]丁嵩涛,刘洪涛,李文明,李秀英,于超.栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用[J].中国药理学通报,2009(06).
[5]胡开治,刘燕琴,秦剑,张军,秦静,刘杰.重庆产栀子的栀子苷含量分布规律研究[J].西南大学学报(自然科学版),2010(08).endprint