甲胎蛋白异质体在原发性肝癌中的表达及意义

陈秋英 刘志伟 刘艳芬 时秀菊

·论著·

甲胎蛋白异质体在原发性肝癌中的表达及意义

陈秋英 刘志伟 刘艳芬 时秀菊

目的 研究甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在原发性肝癌患者血清中的表达及意义。方法 分别采用电化学发光法、酶联免疫吸附实验(ELISA)测定80例原发性肝癌(原发性肝癌组)、80例良性肝病(良性肝病组)及80例健康体检者(健康对照组)血清AFP、AFP-L3含量及检出阳性率，分析AFP-L3与肿瘤大小、临床分期、组织分化程度的关系。结果 与健康对照组比较，良性肝病组和原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3含量、检出阳性率显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；良性肝病组和原发性肝癌组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。AFP-L3检出阳性率随肿瘤直径增加、临床分期进展逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)，而不同组织分化程度间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。原发性肝癌组腹腔积液脱落癌细胞、肝组织AFP、AFP-L3含量和检出阳性率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。联合检测血清AFP、AFP-L3诊断原发性肝癌的敏感性为86.25%，特异性为93.75%。结论 AFP-L3在原发性肝癌的早期诊断中具有一定临床价值。

甲胎蛋白异质体；原发性肝癌；肿瘤标志物

原发性肝癌是我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一，其病死率居恶性肿瘤第二位。近年来，原发性肝癌发病率呈逐年上升趋势，患者病死率高，预后差[1,2]。因此，早期发现、早期诊断对于疾病治疗具有重要意义。血清甲胎蛋白(AFP)是目前应用最为广泛的原发性肝癌肿瘤标志物，但10%～30%的原发性肝癌患者血清AFP检测仍呈阴性。此外，AFP对于原发性肝癌早期诊断灵敏性和特异性不高，因此仍需要借助2种或2种以上肿瘤标志物才能提高诊断效率[3]。研究发现，血清甲胎蛋白异质体(AFP-L3)作为肝癌细胞特有的新型肿瘤标志物，对于原发性肝癌的早期诊断价值更高[4,5]。本研究主要探讨AFP-L3在原发性肝癌患者血清中的表达及与肿瘤病理特性的关系，并探讨AFP、AFP-L3联合检测在原发性肝癌中的诊断价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年10月至2017年2月我院收治的原发性肝癌80例，其中男70例，女10例；年龄25～80岁，平均年龄(55.34±7.12)岁；肿瘤直径：≤5 cm 12例，5～10 cm 39例，≥10 cm 29例；肿瘤分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例，Ⅳ期26例；肿瘤分化程度：高分化10例，中分化45例，低分化25例。良性肝病80例(慢性肝炎52例，肝硬化28例)，其中男67例，女13例；年龄22～82岁，平均年龄(53.88±6.72)岁。另设健康对照80例，男64例，女16例；年龄20～78岁，平均年龄(52.59±7.11)岁。3组年龄、性别比等基本资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 诊断标准

1.2.1 原发性肝癌诊断标准：以CT、肝动脉造影等影像学诊断为标准，且术后经病理确诊，符合内科学(第8版)制定的原发性肝癌诊断标准[6]。

1.2.2 慢性肝炎诊断标准：乙肝表面抗原(+)持续超过6个月，影像学检查未见肝硬化、肝内占位性病变及门脉高压，符合2010年中华医学会肝病学分会、感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准[7]。

1.2.3 肝硬化诊断标准：根据症状体征、实验室检查及CT、磁共振等影像学检查排除肝癌，符合肝病诊疗指南中的肝硬化诊断标准[8,9]。

1.3 观察指标 观察3组血清AFP、AFP-L3含量及检出阳性率。

1.3.1 标本采集:①血清标本：抽取患者清晨空腹静脉血5 ml，3 000 r/min离心10 min，分离血清，-20℃保存备用。②腹腔积液标本：采用腹腔穿刺抽取中段腹腔积液10 ml，3 000 r/min离心5 min，分离上清，于2 h内检测标本。

1.3.2 AFP、AFP-L3含量:采用德国Liaison索林全自动化学发光分析仪及配套试剂检测AFP含量，严格按照试剂盒说明书操作。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测AFP-L3含量，试剂盒由美国Sigma公司提供，严格按照试剂盒说明书操作。

2 结果

2.1 3组血清AFP、AFP-L3含量比较 与健康对照组比较，良性肝病组和原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3含量显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；良性肝病组和原发性肝癌组比较差异也有统计学意义(P<0.05)。见表1。

组别AFPAFP-L3健康对照组 2.47±0.321.98±0.24良性肝病组 8.43±1.04*6.56±0.81*原发性肝癌组834.19±79.33*#792.43±80.48*#

注：与健康对照组比较,*P<0.05;与良性肝病组比较,#P<0.05

2.2 3组血清AFP、AFP-L3检出阳性率比较 与健康对照组比较，良性肝病组和原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3检出阳性率显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；良性肝病组和原发性肝癌组比较差异也有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组血清AFP、AFP-L3检出阳性率比较 n=80,例(%)

注：与健康对照组比较,*P<0.05;与良性肝病组比较,#P<0.05

2.3 原发性肝癌组AFP、AFP-L3分布情况 与AFP<25 ng/ml原发性肝癌组比较，25 ng/ml≤AFP≤400 ng/ml原发性肝癌组、≥400 ng/ml原发性肝癌组AFP-L3检出阳性率>10%的比例显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；AFP<25 ng/ml原发性肝癌组和AFP≥400 ng/ml原发性肝癌组比较差异也有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 原发性肝癌组AFP、AFP-L3分布情况 例(%)

注：与AFP<25 ng/ml比较,*P<0.05;与25≤AFP≤400 ng/ml,#P<0.05

2.4 AFP-L3与原发性肝癌临床病理特征的关系 原发性肝癌组AFP-L3与肿瘤直径和肿瘤分期具有相关性，随着肿瘤直径增加及病情进展AFP-L3含量、AFP-L3检出阳性率逐渐升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；AFP-L3与肿瘤分化程度不具有相关性，随着肿瘤分化程度提高AFP-L3含量、AFP-L3检出阳性率虽显示逐渐升高，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

2.5 原发性肝癌组腹腔积液、肝组织中所测AFP、AFP-L3含量比较 腹腔积液脱落癌细胞、肝组织中所测AFP、AFP-L3含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表5。

2.6 原发性肝癌组腹腔积液、肝组织中AFP、AFP-L3检出阳性率比较 腹腔积液脱落癌细胞、肝组织中AFP、AFP-L3检出阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表6。

2.7 原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3联合检测结果 80例原发性肝癌组以AFP、AFP-L3任何一个指标阳性作为判定原发性肝癌的标准，AFP(+)AFP-L3(+)62.50%(50/80)，AFP(+)AFP-L3(-)11.25%(9/80)，AFP(-)AFP-L3(+)12.50%(10/80)，AFP(-)AFP-L3(-)13.75%(11/80)，检测原发性肝癌敏感性达86.25%(69/80)。见表7。

表4 AFP-L3与原发性肝癌临床病理特征的关系

注：与≤5 cm比较，*P<0.05;与～10 cm比较，#P<0.05；与Ⅰ期比较，△P<0.05；与Ⅱ期比较，☆P<0.05；与Ⅲ期比较，▲P<0.05

组别AFPAFP-L3腹腔积液脱落癌细胞687.08±76.77892.98±85.58肝组织737.56±980.461048.78±88.56

表6 原发性肝癌组腹腔积液、肝组织中AFP、AFP-L3检出阳性率比较 n=80,例(%)

表7 原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3联合检测结果

2.8 原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3联合检测结果 160例非原发性肝癌组(80例良性肝病组和80例健康对照组)以AFP、AFP-L3任何一个指标阴性作为判定非原发性肝癌的标准，AFP(+)AFP-L3(+)0(0/160)，AFP(+)AFP-L3(-)3.75%(6/160)，AFP(-)AFP-L3(+)2.50%(4/160)，AFP(-)AFP-L3(-)93.75%(150/160)，检测非原发性肝癌特异性达93.75%(150/160)。见表8。

表8 非原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3联合检测结果

3 讨论

研究也表明，AFP并不是原发性肝癌早期诊断的理想肿瘤标志物，其诊断原发性肝癌的灵敏性和特异性不高[10]。因此，有必要寻找新的、最为有效的肿瘤标志物，从而有利于进一步提高肿瘤诊断效率。

目前认为AFP存在3种异质体(AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3)。AFP-L1主要来源于良性肝病，AFP-L2存在于妊娠及卵黄囊肿瘤患者中，而AFP-L3是肝癌细胞特有的一种生物恶性标志物[11,12]。研究表明，AFP-L3诊断原发性肝癌的灵敏度和特异度高达72.0%、82.0%，明显高于AFP，且其对于良、恶性肝病的早期诊断和肝癌术后预后评估具有重要意义[13,14]。此外，Toyoda等[15]研究提出AFP-L3升高的良性肝病患者发展为原发性肝癌的发生率较AFP升高的患者明显升高，且以AFP-L3为指标诊断和检测原发性肝癌不依赖于AFP水平。

本研究采用电化学发光法、酶联免疫吸附实验(ELISA)测定80例原发性肝癌、80例良性肝病及80例健康体检者血清AFP、AFP-L3含量及检出阳性率，结果显示，与健康对照组比较，良性肝病组和原发性肝癌组血清AFP、AFP-L3含量、检出阳性率显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；良性肝病组和原发性肝癌组比较差异也有统计学意义(P<0.05)，且AFP升高时AFP-L3检出阳性率逐渐升高，说明AFP阳性时AFP-L3检出阳性率对于原发性肝癌诊断具有一定指导意义。此外，通过分析AFP-L3与肿瘤大小、临床分期、组织分化程度的关系，我们发现随着肿瘤直径增加和肿瘤分期进展AFP-L3检出阳性率逐渐升高，然而AFP-L3检出阳性率与肿瘤组织分化程度不具有相关性，与纪凤卿等[16]研究结果一致，提示AFP-L3对于判断肿瘤分期具有一定临床应用价值。本研究也发现联合检测血清AFP、AFP-L3诊断原发性肝癌的敏感性为86.25%，特异性为93.75%。，较单独一种肿瘤标志物的敏感性显著升高，与Zhao等[17]报道一致，提示AFP、AFP-L3联合检测可作为确诊原发性肝癌的较好肿瘤标志物，

综上所述，AFP-L3作为诊断原发性肝癌的新型肿瘤标志物，对于疾病的早期诊断及肿瘤病理学特性的判断具有重要临床意义。联合检测AFP、AFP-L3能够弥补单一指标检测敏感性和特异性方面的不足，这有助于提高原发性肝癌检测敏感性并防止漏检，尤其对于AFP水平较低的早期肝癌患者至关重要，值得临床推广应用。

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Expression and clinical significance of alphafetoprotein variant in patients with primary liver cancer

CHENQiuying,LIUZhiwei,LIUYanfen,etal.

People’sHospitalofTangshanCity,Hebei,Tangshan063001,China

Objective To investigate the expression and clinical significance of serum alphafetoprotein (AFP) and alphafetoprotein variant (AFP-L3) in patients with primary liver cancer.Methods The serum levels of AFP and AFP-L3 as well as positive detection rate were detected by electrochemiluminescence method and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),respectively in 80 cases of primary hepatocellular carcinoma (primary liver cancer group),80 cases of benign liver diseases (benign liver disease group) and 80 healthy subjects (control group). Moreover the correlation between serum AFP-L3 and tumor size,cinical staging,tissue differentiation degree was analyzed.Results As compared with those in control group,the serum levels of AFP and AFP-L3 as well as positive detection rate in benign liver disease group and primary liver cancer group were significantly increased (P<0.05),moreover,there were significant differences between benign liver disease group and primary liver cancer group (P<0.05). The positive detection rates of AFP-L3 were closely correlated to tumor size and clinical stages (P<0.05), however, there were no significant differences between different tissue differentiation degree (P>0.05).Besides there were no significant differences in seroperitoneum abscission cancer cells,the levels of AFP,AFP-L3 in liver tissues and positive detection rates in primary liver cancer group (P>0.05). The sensitivity and specificity AFP by combination detection of serum levels of AFP and AFP-L3 in diagnosis of primary liver cancer were 86.25% and 93.75%,respectively.Conclusion The detection of AFP-L3 has certain clinical value in early diagnosis of primary hepatocellular carcinoma.

primary carcinoma of the liver;alphafetoprotein variant; alpha-fetoprotein

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.14.003

063001 河北省唐山市人民医院

R 735.7

A

1002-7386(2017)14-2094-04

2017-01-19)