胡椒碱含量检测方法的改进

林宜国

摘要： 胡椒碱属于桂皮酞胺类生物碱，是胡椒果实的主要提取物，在食品生产、医疗临床应用、药物理念、杀虫防菌等领域具有极其重要的地位。本文所论的胡椒碱含量检测方法是在现行国家标准基础上，进一步简化胡椒碱的前处理方法，使得分析过程更加准确，提高检测结果准确率，缩短实验时间。

Abstract： Piperine belongs to cinnamon phthalamide alkaloids， and is the main extract of pepper fruit. It plays an important role in the fields of food production， clinical application of medicine， drug concept， insecticide and insect control， and so on. The method of detecting the content of piperine in this paper is to simplify the pretreatment method of piperine on the basis of the current national standard， which makes the analysis process more accurate， improves the accuracy of the test result and shortens the experiment time.

关键词： 胡椒碱；前处理；检测

Key words： piperine；pretreatment；detection

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2017）24-0174-02

0 引言

胡椒碱是胡椒中主要的活性化学成分，属于桂皮酞胺类生物碱，早在19世纪末，作为胡椒的主要成分胡椒碱就能被提纯和合成，现今作为重要的一种化工中间体，更是被发现和研究出具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、促进药物代谢等作用。

胡椒碱含量是根据国家标准《GB/T 17528-2009 胡椒碱含量的测定 高效液相色谱法》实行检验检测，其检测要点是“由于胡椒碱溶液不稳定，见光易分解，避光操作很有必要。操作中用铝箔或黑纸将烧瓶和容量瓶包裹起来，并尽可能快地测定”，但是在检验检测实践中，胡椒等固体样品“蒸馏回流三小时”这项针对提取胡椒碱的操作即使烧瓶、冷凝管按要求包裹避光，都不能很好地隔绝光源照射和蒸馏过程的操作误差，从而极大地影响仪器检测出峰值，由此得出的检验检测结果重复性、准确性都存在很大的偏差。本方法通过对胡椒碱检测前处理方法进行改进，在操作过程中利用恒温超声波系统批量处理样品，大大提高了检验检测数据的真实性、稳定性，缩短实验时间，提高工作效率。

1 试验材料与方法

1.1 主要器材

高效液相色谱仪：MltiMate 3000 DGLC双三元系列，包含有带在线脱气单元的双三元梯度泵，自动进样器，带有一个六通阀的柱温箱，二极管阵列检测器。

超纯水机

台式离心机

高速组织搅拌机

样品筛：孔径为500μm

恒温超声波系统

万分之一天平

微量移液器

1.2 主要试剂

去离子水；无水乙醇；甲醇（色谱纯）；胡椒碱标准物质

1.3 操作步骤

1.3.1 胡椒碱标准溶液配制

胡椒碱标准储备溶液：用25ml棕色瓶准确称取0.2140g胡椒碱标准物质，用无水乙醇溶解并定容，此溶液浓度为：8.5600mg/ml。再用微量移液器吸取储备液5.0ml，用无水乙醇定容50ml，此溶液浓度为：856.0μg/ml。

1.3.2 样品制备

本方法使用整粒胡椒，产地茂名市。

①挑取颗粒饱满胡椒粒约100g，用高速组织搅拌机将样品粉碎，直至全部通过样品筛，储于棕色瓶中备用。

②准确称取制好的样品约0.7g，置于100ml棕色瓶中，加入无水乙醇25ml，加塞摇匀后置于恒温超声波系统超声处理45min，超声条件：20℃，功率250W，频率20kHz。超声完毕取出流水冷却，定容，用0.22μl有机过滤膜过滤上清液，取其中2.0ml于棕色样品瓶，上机待测定。

1.3.3 标准曲线制备

用微量移液器吸取标准储备液以无水乙醇逐级稀释浓度分别为：1.712μg/ml，4.8827μg/ml，17.12μg/ml，54.784μg/ml，171.2μg/ml的标准工作溶液；再稀释浓度为200.0μg/ml的标准加标溶液。

1.3.4 色谱条件

色谱柱：Thermo Hypersil GOLD，4.6x160mm（P/N：25005-154630）

流动相：甲醇+水=72：28

流速：1.0ml/min

色谱柱温度：30℃

检测器波长：343nm

进样量：10μl

2 数据与结论

2.1 实验数据

2.1.1 胡椒碱标准品色谱图（图1）

依次进样浓度为1.712μg/ml，4.8827μg/ml，17.12μg/ml，54.784μg/ml，171.2μg/ml的标准工作溶液，绘制标准曲线，相对标准偏差值（%）为：1.2953；判定系数：0.99994。

2.1.2 加标样品色谱图

本方法处理辣椒粉样品检测色谱图，加标量为：200.0μg/ml 1ml（图2）。

检测得出含量为198.8798μg/ml，本方法加标回收率为99.44%。

国标方法处理辣椒粉样品檢测色谱图，加标量为：200.0μg/ml 1ml（图3）。

检测得出含量为172.2737μg/ml，国标方法加标回收率为86.14%。

2.1.3 样品检测色谱图

本方法检测结果平均值为27014.2860μg/ml，标准偏差17.0995，相对标准偏差0.06%。（图4）

国标方法检测结果平均值为24760.0502μg/ml，标准偏差1160.8453，相对标准偏差4.69%。（图5）

2.2 结论

总结对比两方法的样品处理检测数据分析显示本方法加标回收率、样品检测重现性、样品检测结果的稳定性和相对标准偏差等数据均优于国标方法，说明本方法的准确度较高。本方法操作较国标方法，用恒温超声提取代替加热回流提取，减少胡椒碱溶液见光易分解造成的检测误差，提高检测结果的准确性；并且操作简便易行，大大缩短了实验时间。

参考文献：

[1]国家标准GB/T 17528-2009，胡椒碱含量的测定[S].

[2]GB/T 12729.6-1991，香辛料和调味品 水分含量的测定（蒸馏法）[S].

[3]GB/T 12729.3-1991，香辛料和调味品 分析用粉末试样的制备[S].