浅析有髯鸢尾杂交种成熟胚培养成苗技术

赵宇婷

摘 要：有髯鸢尾是一种垂瓣上有髯毛附属物的鸢尾花，具有花大、花形奇特且花香艳丽的特点得到人们的青睐，也是世界范围内十分重要的宿根花卉之一。早在19世纪，人们在生物科技领域就利用了杂交技术，可以获得更多不同性状的品种，本文针对有髯鸢尾杂交种成熟胚培养成苗技术进行分析。

关键词：有髯鸢尾；杂交技术；成苗技术

有髯鸢尾的观赏价值非常高，在近代花卉观赏中得到迅速发展，目前我国的有髯鸢尾都是通过从国外引进而来，有髯鸢尾的生长习性为喜排水，适合高爽的中性砂质土壤，近年来我国在针对有髯鸢尾的育种方面均采用杂交的方式来进行培育以及新品种的开发。

一、材料与方法

1.试验材料

本次试验选取了有髯鸢尾“白与蓝”ד印度首领”果实。

2.试验方法

（1）消毒处理。将果实外包被的干黄苞片出去，使用洗衣粉浸泡后再使用自来水清洗20min，取出种子，再将种子冲洗30min后使用75%传达的酒精进行消毒，然后将清洗好的种子进行解剖，取出种胚，再采取不同的处理方式并将材料放于MS培养基之中，再进行接种，接种完成后才可以放于培养室进行培养。

（2）种胚萌发诱导培养基的筛选。将胚种分别接种在不同浓度的6-BA、IBA以及NAA的MS细胞培养基当中，根据胚萌发和成苗的情况来研究植物生长调节剂的相应影响，并对种胚存在的体积膨大、弯曲等情况进行记录并作为萌发标准，以成苗的叶片形成情况来作为成苗的标准，最后根据培萌发率以及成苗率来进行胚的培养方案的制定以及相应标准的研究。

（3）培养条件。向MS培养基中进行添加琼脂、白砂糖等，并采用熟料封口的方式进行高温灭菌，时间为19min，在进行培养过程中，培养温度应为24-26℃之间，光照时间应控制在12h之内。

（4）练苗和移栽。查看幼苗的生长情况，将良好的幼苗进行练苗移栽，待试管苗根长到3cm左右时，将封口膜缓慢打开，分别取出进行练苗操作，将小苗取出并将根基残留的培养基清洗干净，使用过0.2%多菌灵溶液浸泡30s然后在分别将小苗移栽到灭菌后的基石上。

二、實验结果

1.不同消毒处理对种子和种胚的污染率的影响

根据不同消毒处理后对种子和种胚的污染程度来看，影响程度差异很大，但是随着消毒处理的时间的不断增长，对种子的污染率也就逐渐降低，并且，种子在经过2个星期的时间后，萌发率形成由上升到下降的趋势，再根据消毒时间的长短来看，消毒时间过长对种胚会产生毒害作用，并不利于种胚的发芽。

2.杂交种植成熟胚诱导培养基的筛选

不同的激素浓度对杂交中胚萌发的影响各有不同，添加7次不同的6-BA、IBA、NAA进行处理，根据不同的激素本身的特性以及浓度可以得知，第6次的萌发率和成苗率最高，约为87%和86%，其他的几次都要比第6次少很多。

3.增殖培养

（1）增殖培养基筛选。把丛生不定芽转接到增殖培养基中培养26天后，只有1个出现了污染情况，并且芽丛增殖的非常明显，通过对试管苗增殖以及生长情况的了解，增殖试管的苗可以分为三种，这三种苗都存在着增殖倍数的不同，不过三种苗的增殖倍数均在3到5之间。

4.生根培养

根据污染浓度的不同针对有髯鸢尾的培苗生根的程度也会不同，也就是说随着浓度的增加，培苗生根的时间会先缩短再进行延长，一般是7天左右的时间。

三、综合分析

1.种胚的获取以及消毒

在对有髯鸢尾进行取胚时，应当先将种皮、胚乳等全部去除然后才能够真正的取出完整的胚胎。完整的种子胚胎中是不会存在病毒的侵入，因此，种胚的培养过程中可以排除存在污染的问题，但是若种皮、胚乳处理不当，则会容易伴有细菌的滋生和入侵，从而导致种胚产生污染，也就说明了种胚的培养已经失败了。因此，在进行种胚的获取工作中时，应当注意对种胚的二次消毒消毒，并且针对消毒时所使用的试剂以及消毒所需要的时间要进行相应的控制，否则，二次消毒也会给种胚带来污染。

2.种胚的萌发

通过实验可以发现，种胚在接种以后生长方式主要为脱分化形成愈伤组织后，再分化出无菌苗以及直接萌发出幼苗，然而幼苗的状态又可以分为单苗或者是丛苗。

在日后的繁殖过程中，这两种种胚的生长方式都能做到苗相整齐且增殖效果显著。另外针对种胚直接萌发出幼苗的过程中，种胚在萌发时能够首先出现下胚轴，接着是根环处膨大产生轴毛，然后是胚芽的位置开始膨大，能够长出叶子，最后是胚根得到发育，形成根系组织。

3.继代复壮

根据实验可以得知，无菌苗普遍存在增殖倍数低、生长速度缓慢等问题，也存在玻璃化苗、褐化苗等情况，其中的大部分原因是由于随着无菌苗继代次数的不断增多，体内所包含的激素量过大，从而导致出现了此类情况的发生，也就是要在无菌苗继代生长次数达到一定程度后就需要进行继代复壮的培养了。由于无污染的程度较好，因此无菌苗生根的速度也会非常迅速，且株丛健壮，叶片颜色纯正，在进行接下来的一段时间的培养中，部分的苗已经生根，针对具体情况将生根苗的根系剪去，然后将其接种到处于最佳培养基中去，经过一段时间观察，能够发现株丛叶片的宽度、颜色都已经发生了许多变化。

四、结语

胚是能够具有形成新植株的能力且离体萌发容易，胚的培养技术则是可以通过将种子的休眠状态打破，促进萌发率的提升，进而产生整齐苗的出现，与茎尖、根茎以及花蕾等其他植被部位相比，胚的取材往往更具有方便性，而且在消毒、萌发以及繁殖速度反面都有显著的效果。

参考文献：

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[2]樊璐，李淑娟，张蕊莲.光照和种皮对有髯鸢尾种子萌发的影响[J].中国农学通报，2010，12：200-202.

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