大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价

通拉嘎 梅 红 其木格 吴七十三

内蒙古民族大学蒙医药学院,内蒙古 通辽 028043



实验研究

大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价

通拉嘎 梅 红 其木格 吴七十三*

内蒙古民族大学蒙医药学院,内蒙古 通辽 028043

目的：建立3种大鼠乙酸型胃溃疡模型并进行评价。方法：将72只健康Wistar大鼠分为正常组、乙酸注射低、中、高3个剂量组(0.01、0.03、0.05mL)、乙酸滤纸贴敷组、乙酸直接灼烧组等6个组。采用乙酸注射、乙酸滤纸贴敷和乙酸直接灼烧法建立三种乙酸型胃溃疡大鼠模型。各组大鼠处死后通过肉眼观察溃疡点状，采用图像分析软件计算image溃疡面积；检测血清MDA、SOD和NO的含量。结果：乙酸注射低、中、高剂量组溃疡面均较小，但中剂量组﹑高剂量组与正常组比较均有统计学差异(P<0.05、P<0.01)；乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组溃疡面较大，与正常组比较均有统计学差异(P<0.01)。与正常组比较乙酸注射中剂量组、乙酸滤纸贴敷组、乙酸直接灼烧组的血清MDA含量均有统计学差异(P<0.05、P<0.01)；乙酸直接灼烧组血清SOD含量与正常组比较有统计学差异(P<0.05)；乙酸注射中剂量组、乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组血清NO水平高于正常组，均有统计学差异(P<0.05、P<0.01)；与正常组相比，乙酸注射高剂量组、乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组的EGF的浓度，均有统计学差异(P<0.05、P<0.01)。结论：乙酸直接灼烧法导致的胃溃疡模型最为理想，适用于慢性胃溃疡大鼠模型的建立。

大鼠胃溃疡模型；乙酸型；建立

建立胃溃疡动物模型是研究胃溃疡发生机制和评价抗溃疡药物的有效方法之一。大鼠形体适中,繁殖快,成本较低,可用于大样本实验,因此常选用大鼠(Wistar或SD)建立胃溃疡模型。其造模方式较多,主要有水浸应激性大鼠胃溃疡模型[1]、幽门结扎型大鼠胃溃疡模型[2]、乙醇致大鼠胃溃疡模型[3]、非甾体抗炎药所致胃溃疡模型[4-6]、乙酸致慢性胃溃疡模型[7]。其中乙酸致慢性胃溃疡模型的建立简单，模型成功率较高，不易恢复等特点。目前大鼠胃溃疡模型中以冰乙酸性模型在实验研究中应用较广[8]，研究表明此模型方法可靠,重复性好,溃疡深而大,与人类的慢性胃溃疡极为相似,其自然愈合需要60d左右[9]。建立慢性胃溃疡动物模型有以下3种：乙酸注射法、乙酸滤纸贴敷法、乙酸直接灼烧法[10]。其中因乙酸注射法造模型的操作部位比较麻烦，不易造模型；乙酸滤纸贴敷法造模要精准直径的大小和滤纸贴敷的时间的长短不同而模型的程度不同；乙酸直接灼烧法造模时乙酸的量越多，造成的损伤最越重，有的引起肌层及浆膜层的损伤，甚至有坏死组织等。以上3种模型都有各自的不足点。应此目前还是没有建立乙酸型动物模型的标准和评价指标。本试验将建立3种乙酸型大鼠胃溃疡模型并进行评价。

1 仪器与材料

1.1 实验动物 清洁级 Wistar大鼠，体重(200±2)g，雄性，购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物许可证号GB14922-2001。

1.2 仪器 紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；酶标仪(帝肯上海贸易有限公司)；TG16-WS高速台式离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；HH-W600数显三用恒温水箱(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。

1.3 材料 冰乙酸(天津市天力化学试剂有限公司)；甲醛(天津市天力化学试剂有限公司)；水合氯醛(批号20150330，天津市东丽区新中村科技园区)；MDA(批号：20160114)、SOD(批号：20160112)、NO(批号：20160115)和EGF(批号：20160231)试剂盒，南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 建立3种乙酸型模型 将Wistar大鼠72只雄性，体重为(200±20)g，将大鼠随机分为正常组、乙酸注射模型组、乙酸滤纸贴敷模型组和乙酸直接灼烧模型组，每组12只。正常组自由饮食进水，14d 后取材。利用乙酸注射、乙酸滤纸贴敷和乙酸直接灼烧法分别制备乙酸型胃溃疡大鼠模型：大鼠禁食不禁水24h,用10%水合氯醛(3.5mL/kg)腹腔注射麻醉，剑突下0.5cm纵向切开腹壁约2cm，找出胃，轻移出腹腔。①乙酸注射法，用微量注射器在胃前壁胃窦部浆膜下近肌层处注入一定剂量(0.05、0.03、0.01mL)的冰乙酸。②乙酸滤纸贴敷法，用直径为5mm的圆滤纸片浸适量的冰乙酸后，在胃窦部浆膜层贴敷30s×2次。③乙酸直接灼烧法,将内径5mm、长30mm的玻璃管垂直置于胃体浆膜层，管内加入冰乙酸0.2mL，1.5min后用棉签蘸出冰乙酸。以上操作完毕，将胃轻轻送回腹腔，后覆盖网膜，缝合腹膜，腹壁各层组织。

14d后，大鼠禁食1h后经腹腔注射10% 水合氯醛1mL 深度麻醉，剖腹，腹主动脉取血3～5mL，水浴36～37℃保温30min后，3500r/min，离心10min，取上清液备用，结扎幽门和贲门，从幽门处注入4%的甲醛溶液10mL。取胃，置甲醛溶液中固定15min后，切开胃，擦去胃内容物，观察溃疡点状，比较各组大鼠胃溃疡指数及溃疡抑制率，用数码相机在固定光源和固定位置拍摄，制成图像，采用图像分析软件image 计算其溃疡面积。

2.2 一般情况的观察 实验过程中每天观察各组大鼠的精神状态、活动、饮食、皮毛、爽便、体重等情况并予以记录。

2.3 测定指标 取血清严格按照试剂盒的说明用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)；用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)；用硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)。

3 结果与分析

3.1 一般情况的观察结果 正常组、乙酸注射低剂量组大鼠术前和术后差别不大，精神状态、活动、饮食、皮毛、排粪尿均正常。乙酸注射中剂量组、高剂量组大鼠苏醒后精神状态比术前较差，活动减少，食欲下降，无竖毛现象，排粪尿正常。乙酸滤纸贴敷组、乙酸直接灼烧组大鼠苏醒后精神状态很差，供背，嗜卧，不活动，食欲明显下降，毛皮蓬松没有光泽，排粪尿基本正常。

2.2 3种大鼠胃溃疡面积的比较 与正常组比较，乙酸注射中剂量组、乙酸注射高剂量组、乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组的溃疡面积，均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。见表1。

表1 3种大鼠胃溃疡面积的比较 ±s)

注：与正常组比较，*P<0.05,#P<0.01；与乙酸注射低剂量组比较,△P<0.01；与乙酸注射中剂量组和高剂量组比较,□P<0.01。

3.3 3种乙酸型胃溃疡模型血清指标 与正常组比较，乙酸注射中剂量组、乙酸滤纸贴敷组、乙酸直接灼烧组的MDA的含量，均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)；与正常组相比，乙酸注射低剂量组、中剂量组、乙酸直接灼烧组的SOD活力，均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)；与正常组相比，乙酸注射高剂量组、乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组的NO水平，均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。见表2。

表2 3种大鼠胃溃疡模型的血清指标

注：与正常组比较，*P<0.05，#P<0.01;与乙酸注射低剂量组比较，△P<0.01；与乙酸注射中剂量组比较，○P<0.01，☆P<0.05；与乙酸注射高剂量组比较，□P<0.05。

2.4 3种乙酸型胃溃疡模型血清指标 与正常组相比，乙酸注射高剂量组、乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组的EGF的浓度，均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。见表3。

表3 3种大鼠胃溃疡面积的比较

注：与正常组比较*P<0.05，#P<0.01；与乙酸注射低剂量组比较，△P<0.01；与乙酸注射中剂量组和高剂量组比较，□P<0.01。

4 讨论

正常组、乙酸注射低剂量组的大鼠苏醒后与术前同样，造模手术3d内乙酸注射中剂量组、乙酸注射高剂量组与正常组大鼠相比苏醒后精神状态欠佳，进食进水，排粪尿正常，乙酸滤纸贴敷组、乙酸直接灼烧组的大鼠精神状态较差，活动减少食欲明显下降，毛皮松散缺乏光泽，排粪尿基本都正常。说明乙酸注射低剂量组以外均发生明显的胃溃疡。实验中，乙酸注射低剂量组大鼠4只死亡，死亡原因是大鼠的个体差异和麻醉剂量过多导致的。乙酸注射高剂量组大鼠1只死亡，死亡原因是注射时针头穿透胃壁，导致该大鼠胃部穿孔而死亡。乙酸滤纸贴敷组大鼠2只死亡，死亡原因是取出胃部时伤到了脾脏，乙酸直接灼烧组大鼠1只死亡，死亡原因是缝合时伤了腹腔内的消化道，造成腹腔内感染等原因导致的。

与正常组比较乙酸注射组的溃疡面积不明显，而乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组的溃疡面积明显，而且乙酸滤纸贴敷法导致的胃溃疡模型让大鼠的脏器出现粘连，造成的脾脏创伤比较大，乙酸直接灼烧组发生的溃疡呈圆形或椭圆形，中心凹陷，表面粗糙，粘膜缺损，周边充血水肿。乙酸直接灼烧组发生的溃疡深而大，是理想的动物模型。

胃溃疡是攻击因子与防御因子失衡所致，因此抗溃疡药物的评价通常检测MDA、SOD、NO，这些指标涵盖了组织，分子及基因水平。MDA是攻击因子，它的含量放映组织受自由基攻击的损伤程度，SOD、NO和EGF是保护因子，其活力反应机体清除氧自由基的能力。乙酸直接灼烧组的MDA含量比较其高，并其SOD活力低，模型组NO含量和EGF的浓度普遍高于正常组，其原因待进一步探讨。

综上所述，乙酸直接灼烧导致的胃溃疡模型是乙酸直接对胃壁组织侵蚀，损伤胃壁组织引起的慢性胃溃疡，结果显示，乙酸直接灼烧组发生的溃疡深而大，与周围组织粘连小，一般情况接近胃溃疡病症状，是较为理想的大鼠胃溃疡动物模型，适用于慢性胃溃疡动物模型。

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Acetic Acid Type of Rat Gastric Ulcer Model and Evaluation

TONG LaGa MEI Hong QI MuGe WU QiShiSan*

College of Mongolian Medicine of Inner Mongolian University for the Nationalities , Tongliao 028000,China

Objective Establish three kinds of acetic acid type gastric ulcer model in rats and evaluated. Method Will be dividing, sixgroups. After building 14, groups of rats with anesthesia, open, blood, stomach, macroscopic observation point of ulcer after taking pictures, measured by image analysis software Imagej ulcer area; Detection of serum MDA, SOD and the content of NOS and the concentration of EGF.Results Acetic acid injection ulcer surface low, medium and high dose group were smaller, but the medium dose group and high dose group compared with normal group, were statistically significant (P<0.01、P<0.05); The group of acetic acid and the direct burning group of acetic area compared with normal group, there were statistical differences (P<0.01).compared with normal group, acetic acid injection dose group, acetate filter paper sticking group, direct calcination acetate group of serum MDA content were statistically significant (P<0.05、P<0.01).compared with normal group, the serum SOD content of acetic acid directly burning group was statistically different (P< 0.05).compared with normal group, acetic acid injection dose group, acetate filter paper sticking group, direct calcination acetate group of serum NOS content were statistically significant (P<0.05、P<0.01).compared with normal group, the acetic acid injection of high dose group, the acetate filter paper sticking group and the concentration of acetic acid direct calcination group of EGF, were statistically significant (P<0.05、P<0.01).Conclusion The ideal of the gastric ulcer model caused by the direct burning method of acetic acid is suitable for the establishment of rat model of the chronic gastric ulcer.

Rats Stomach Ulcer Model;Acetic Acid type; Establish

通拉嘎(1991-)，女，蒙古族，硕士研究生，研究方向为蒙医病理生理学实验研究。E-mail：m15247531585@163.com

吴七十三，教授，博士，硕士生导师，研究方向为蒙医病理生理学实验研究。E-mail：qishanwu@126.com

R-332

A

1007-8517(2017)11-0049-04

2017-03-30 编辑：程鹏飞)