微小核糖核酸(miRNA)联合C反应蛋白检测对肺癌早期的诊断价值

吴振永



微小核糖核酸(miRNA)联合C反应蛋白检测对肺癌早期的诊断价值

吴振永

目的 探讨微小核糖核酸(miRNA)联合C反应蛋白(CRP)检测对肺癌早期的诊断价值。方法 选取经病理学确诊为肺癌患者42例作为观察组，另取同期健康体检者30例作为对照组，采用RT-PCR检测法检测并比较两组受试者血清中的miRNA 21，miRNA 141，miRNA 145表达水平，采用速率散射比浊法测定及比较两组受试者血清中CRP，同时采用ROC曲线分析联合检测miRNA 和CRP对早期肺癌的诊断价值。结果 观察组患者miRNA 21、miRNA 141和CRP表达水平明显高于对照组，mi RNA 145水平则明显低于对照组，差异比较具有统计学意义(P<0.05)。曲线分析结果显示，miRNA 和CRP水平联合诊断肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度，均较miRNA 、CRP水平单独预测肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA联合CRP检测诊断肺癌早期的灵敏度和特异度均较高，诊断价值良好，可以作为肺癌诊断的参考指标。

微小核糖核酸；C反应蛋白；肺癌；诊断

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1062～1064)

肺癌是世界上发病率最高的肿瘤之一，占男性肿瘤发病率和死亡率首位，全世界肺癌的死亡率高达85%，严重威胁着患者的生命安全[1-2]。肺癌早期症状通常较轻微，甚至可无任何不适，而一旦发觉往往是晚期，已错过了最佳的治疗时机，预后多因此不良。因而寻求有效参考指标为肺癌早期诊断提供辅助极其必要[3-4]。本文通过研究探讨微小核糖核酸(miRNA)联合C反应蛋白(CRP)检测对肺癌早期的诊断价值，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2016年1月我院病理学确诊为肺癌患者42例作为观察组，所有病例均于体检时行胸部X检查时发现，进一步诊断证实为肺癌早期，其中包含小细胞肺癌患者11例，非小细胞肺癌患者31例，非小细胞癌患者包括鳞癌患者11例，腺癌患者7例，大细胞癌患者13例。所有患者均已被告知本研究，患者均同意本研究且已签署知情同意书。患者排除严重的心脑血管疾病，且均为首次诊断为肺癌，术前均未接受放疗化疗及免疫治疗，其中包括男性20例，女性22例，年龄30～77岁，平均年龄(53.27±4.86)岁。另取同期健康体检者30例作为对照组受试者，受试者均无心脑血管疾病、肾病及近期感染。其中男性13例，女性17例，年龄31～79岁，平均年龄(53.44±4.75)岁。两组患者在年龄，性别等基本资料差异比较无统计学意义(P>0.05)，一般资料具有可比性。

1.2 治疗方法

所有患者均在病理诊断的基础上，根据各自的病情由同一主治医生采取相应的手术及放化疗治疗及予以相应的手术禁忌、饮食康复指导。嘱患者定期复查，密切观察。

1.3 样本收集方法

所有受试者于入院时抽取其空腹静脉血5 ml，置于离心机上以3 500 r/min离心10 min，取上层血清分装储存于-80 ℃冰箱中,备用以测定PCR水平。取1 ml血样，加1 ml T10E10充分混匀后,以8 000 rpm离心6 min后弃上清，下层沉淀加入667 μl STE，24 μl的20%的SDS，37 ℃水浴1 h，再弃上清液，加300 μl USSTE裂解悬浮，用力震荡破碎细胞。加入等体积的饱和酚，充分混合后以10 000 rpm离心10 min，重复3次。用吸头尖端剪头一段将上清液吸出，用等体积的氯仿异戊醇(24∶1)充分混匀至看不到白色界面后以10 000 rpm离心10 min，然后取上清，加入2倍体积冷无水乙醇混匀再次以12 000 rpm转速离心10 min，取沉淀加500 μl的70%的乙醇浸洗2次以洗出DNA的杂质，再次离心10 min，取DNA自然放置30 min。待乙醇晾干后加50 μlT10E1缓冲液回溶将其储存于-20 ℃环境中待用。

1.4 检测方法

采用速率散射比浊法,测定及比较两组受试者血清中C反应蛋白，试剂购自瑞士Bachem公司，检测操作严格按说明书进行。miRNA浓度检测方法参照参考文献[5]，即取总RNA3 μl参照TaKaRa公司的RNA PCRKitVer 3.0试剂盒说明书对标本进行RT-PCR检测，以 RNase-free H2O调零，RNase-free H2O作为空白对照，通过ND-1000微量紫外可见分光光度计测样品miRNA 21、miRNA 141、miRNA 145的浓度值。mRNA相对含量=目的基因条带积分吸光度值/内参照GAPDH基因条带积分吸光度值。实验均至少重复3次。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 两组受试者mi RNA和CRP表达水平比较

观察组患者mi RNA 21、mi RNA 141和CRP表达水平明显高于对照组，mi RNA 145水平则明显低于对照组，差异比较具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组受试者mi RNA和CRP表达水平比较情况

2.2 ROC曲线分析联合检测miRNA 和CRP对早期肺癌的诊断价值

ROC曲线分析结果显示，miRNA 和CRP水平联合诊断肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度均较miRNA 、CRP水平单独预测肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2和图1。

表2 ROC曲线分析联合检测miRNA 和CRP对早期肺癌的诊断价值

图1 受试者操作特性曲线图

3 讨论

据2012年统计数据显示，全世界有180万人被诊断为肺癌，其中死亡人数达到160万[6]。发病率占所有肿瘤的13%，死亡率占所有肿瘤死亡人数的19.4%，5年生存率仅为5.8 %，远远低于其它肿瘤，预后非常不良[7]。虽然随着近年来临床诊断技术与治疗技术不断改进与提高，肺癌诊断和治疗现状有所改善，但因缺乏有效的诊断方法，早期肺癌的诊断率依然仅有 25%左右。探求有效的参考指标，提高早期肺癌的诊断率迫在眉睫[8]。

微小核糖核酸miRNA是1类非编码小RNA分子，它在细胞增殖、分化、凋亡、上皮细胞间质转型、组织器官形成和生长发育等生理过程中发挥着重要作用[9]。近年来有研究表明，miRNA不仅参与了人体正常的生理过程，而且在各种疾病的发生和进展过程中也扮演着重要角色，各类恶性肿瘤的发生、发展、转移等病理过程与miRNA关系密切[10-11]。CRP是由人体肝细胞合成的1种正常球蛋白，它是1种与炎症反应相关的分子，健康者的血清中的CRP含量非常低，当机体发生炎症反应时，其浓度可达到正常值的几百倍甚至上千倍[12]。研究证实CRP参与多种疾病的病理过程。本文通过研究探讨肺癌患者体内的miRNA和PCR相对含量，旨在为肺癌早期的诊断提供参考指标。结果显示，患者miRNA 21，miRNA 141和CRP表达水平明显高于健康者水平，miRNA 145则明显低于健康者水平。提示RNA作为促癌基因和抑癌基因参与肺癌的病理过程，在肺癌早期尚未显现明显症状时已在血清中异常表达。miRNA 21，miRNA 141均具有促癌基因的特性，其高表达促进了肿瘤的发生发展，miRNA 145则具有抑癌基因的特性，抑制其表达会促进肿瘤的发生。而CRP作为炎症反应因子，在肺癌早期，机体出现癌变时已在血清中异常表达。以上结果提示二者结合诊断或可作为肺癌早期的参考指标。通过进一步ROC曲线分析证实了这一猜测。分析结果显示，miRNA和CRP水平联合诊断肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度均较miRNA、CRP水平单独预测肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度高。

综上所述，miRNA联合CRP检测诊断肺癌早期的灵敏度和特异度均较高，诊断价值良好，可能作为肺癌早期诊断的参考指标。

[1] 倪 军,郭子健,张 力，等.单独与联合检测四项肺癌血清肿瘤标志物在肺癌诊断中的价值〔J〕.中华内科杂志,2016,55(1):25-30.

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[3] Reynolds J,Skandan SP.An uncommon presentation of non-small-cell lung cancer with acrometastases to the great toe and index finger〔J〕.J Community Support Oncol,2016 14(3):122-125.

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[9] 陈 旭,王 琳,蒋 敏,等.肺癌患者血清和单个核细胞9种miRNAs表达差异及其意义〔J〕.中华检验医学杂志,2013,36(2):165-172.

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[11] 江 娟.miRNA与肺癌早期诊断、治疗和预后的研究进展〔J〕.医学综述,2013,19(14):2561-2564.

[12] 楼 建,滕理送.血清VEGF和C-反应蛋白水平表达预测老年肝癌病患术后复发的疗效〔J〕.中国老年学杂志,2014,34(1):106-107.

(编辑：吴小红)

Value of MiRNA Combined with C-reactive Protein in the Diagnosis of Early Lung Cancer

WUZhenyong.BaodingSecondCentralHospital,Baoding,072750

Objective To study the value of miRNA combined with C-reactive protein in the diagnosis of early lung cancer.Methods 42 cases of patients with pathology diagnosed lung cancer were selected as the observation group,30 cases of healthy examinees were selected as the control group,the serum miRNA 21,miRNA 141 and miRNA 145 level of the 2 groups were detected and measured by RT-PCR assay.Serum CRP of the 2 groups were determinated by rate scatter nephelometry.At the same time,ROC curve analysis was used to detect the diagnostic value of miRNA and CRP for early lung cancer.Results The miRNA21,mi RNA141 and CRP level of the observation group were significantly higher than that of the control group,however the miRNA 145 levels were significantly lower than that of the control group,the difference was statistically significant(P<0.05).ROC curve analysis results showed that the area under the ROC curve was bigger,sensitivity and specificity were better in the diagnosis of early lung cancer by the miRNA combined with CRP level than by any single of them(P<0.05).Conclusion miRNA combined with CRP in the diagnosis of early lung cancer have higher sensitivity and specificity,miRNA combined with PCR may become reference index for early lung cancer diagnosis.

miRNA;C-reactive protein;Lung cancer;Diagnosis

072750 河北省保定市第二中心医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.07.006

R734.2

A

1001-5930(2017)07-1062-03

2016-07-22

2017-04-16)