热性药附子、肉桂、吴茱萸、干姜对寒性药黄连中所含盐酸小檗碱提取量的影响
2017-06-24杨宇峰段秀俊
杨宇峰,段秀俊
(山西中医学院,山西 太原 030024)
热性药附子、肉桂、吴茱萸、干姜对寒性药黄连中所含盐酸小檗碱提取量的影响
杨宇峰,段秀俊
(山西中医学院,山西 太原 030024)
目的:考察热性药吴茱萸、肉桂、干姜、附子对寒性药黄连中盐酸小檗碱提取量的影响。方法:采用高效液相色谱法,测定四味热性药对寒性药黄连中的主要活性成分盐酸小檗碱提取量的影响。结果:四味热性药与黄连合煎均使得黄连中盐酸小檗碱的提取量降低,影响程度由高到低为:吴茱萸﹥肉桂﹥干姜﹥附子。结论:四味热药均对黄连中盐酸小檗碱的提取量产生减损影响。
寒性药;热性药;盐酸小檗碱;配伍变化
中药寒热配伍是指寒凉药与温热药相互伍用,属典型的相反相成配伍,其以中医基础理论为指导,继承和发展了中药七情与合理论,并具有自己独特的双向调节及平衡协调作用。中药寒热配伍源远流长,如《伤寒论》之黄连汤,《金匮要略》之大黄附子汤,《备急千金要方》之黄连升麻散,《太平圣惠方》之泽泻散,《脾胃论》之升阳益胃汤,《丹溪心法》之左金丸,《韩氏医通》之交泰丸等。中药寒热配伍自古至今虽被医家广泛应用,而关于其配伍机理的研究报道却甚少,20世纪90年代国内始有与寒热配伍相关的药理研究报道,主要研究一些同时含有寒热药物的经方,而并非从药物的寒热性进行研究[1]。21世纪国内始出现与寒热配伍有关的化学研究报道,仍为研究一些同时含寒热药物的经方,也并未提及药物的寒热性,且研究内容多局限于一味药对另一味药的影响,结论也不尽相同[2-3]。2004年国内始有真正关于寒热配伍的实验研究报道,但只涉及到对类风湿性关节炎等痹症的药效影响研究[4]。本实验选择黄连-附子、黄连-肉桂、黄连-吴茱萸、黄连-干姜等四组寒热对药作为研究对象,主要研究不同的热性药对寒性药黄连中的主要活性成分盐酸小檗碱提取量的影响,从物质基础的角度探讨寒热对药的配伍机理。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters 515系列高效液相色谱仪;2996二极管阵列检测器;M32色谱工作站;微量进样器(24 μL);SHJM-1型数显恒温电热套(菏泽市石油化工学校仪器设备厂);电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司);KQ3200 E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),容量瓶,微孔滤膜(0.45 μm),注射器,烧杯。
1.2 试药
盐酸小檗碱(批号:0713-9906)对照品购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯,水为纯净水,其他所用试剂均为分析纯。
2 方法[5]
2.1 色谱条件
色谱柱为Diamonsil(钻石)C18(4.6 mm×200 mm;5 μm);流动相为甲醇-0.5%三乙胺水溶液(41∶59),用磷酸调pH值至3;检测波长为264 nm(见图1);流速1.0 mL/min;柱温为室温,理论板数不低于3000。
图1 盐酸小檗碱对照品色谱图
2.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品,加酸性甲醇溶液制成0.58 mg/mL的盐酸小檗碱溶液,摇匀,作为对照品溶液的母液。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 黄连单味药 取黄连10 g,精密称定,加水煎煮2次,合并煎液,浓缩成稠膏状,65℃干燥。取相当于黄连药材0.05 g的上述干膏,粉碎,精密称定,置50 mL容量瓶中,加入甲醇-盐酸(100∶1)溶液约45 mL,超声提取30 min,放冷,用甲醇定容到刻度,用0.45 μm的滤膜滤过,作为黄连单味药的供试品溶液。
2.3.2 黄连附子、黄连肉桂、黄连吴茱萸、黄连干姜对药 分别取黄连、附子各10 g,黄连、肉桂各10 g,黄连、吴茱萸各10 g,黄连、干姜各10 g,精密称定,同法制成干膏,各取相当于黄连药材0.05 g的干膏按照“2.3.1”项下方法制备四组寒热对药的供试品溶液。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系 精密吸取上述对照品溶液母液0.20,0.40,0.80,1.00,1.25,2.00 mL,分别至5 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成浓度为0.0232,0.0464,0.0928,0.116,0.145,0.232 mg/mL的对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,测定盐酸小檗碱的峰面积。回归方程为:
Y=4E+06X+7328.4,
相关系数r=0.9999。盐酸小檗碱在0.232~2.320 μg内线性良好。
2.4.2 精密度 分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(0.116 mg/mL)10 μL,6份,依次进样,测定盐酸小檗碱的峰面积值,相对标准偏差(RSD)值为0.89%,精密度良好。
2.4.3 稳定性 分别考察黄连单味药、黄连附子对药、黄连肉桂对药、黄连吴茱萸对药、黄连干姜对药5种供试品溶液在0,2,4,6,8,10 h稳定性,RSD值分别为1.80%,1.60%,2.40%,2.30%,2.10%,表明盐酸小檗碱在5种供试品溶液中10 h内基本稳定。
2.4.4 重复性 分别考察黄连单味药、黄连附子对药、黄连肉桂对药、黄连吴茱萸对药、黄连干姜对药各自干膏的重复性。每种干膏各取6份,分别相当于黄连药材0.05 g,按供试品溶液制备方法处理,依次进样,依法测定盐酸小檗碱的峰面积值,计算盐酸小檗碱提取量。5种干膏重复性测定结果的RSD值分别为1.30%,1.30%,2.50%,2.20%,1.90%,表明5种干膏的重复性均较好。
3 测定结果
黄连单味药、黄连附子、黄连肉桂、黄连吴茱萸、黄连干姜对药各自煎煮干膏中盐酸小檗碱的提取量测定结果见表1,其相应色谱图见图2。
表1 盐酸小檗碱的提取量测定结果
图2 配伍研究色谱图
3.3 实验讨论
3.3.1 方法学考察结果表明所建立的各种供试液的含量测定方法精密度高、稳定性好。
3.3.2 实验结果显示,四味热性药均使黄连中盐酸小檗碱提取量降低,但降低程度不同,其中吴茱萸影响显著,使黄连小檗碱的提取量降低40.0%,其次是肉桂,降低31.7%,干姜降低13.3%,附子对黄连小檗碱提取的影响不明显,只降低0.9%。
3.3.3 黄连-吴茱萸药对中吴茱萸显著降低黄连小檗碱的提取量的原因可能有两个:①吴茱萸喹啉类生物碱分子结构中有3个N原子,碱性较强,在煎煮过程中可抑制黄连小檗碱的解离,使之由季铵型部分转化为亲脂性的醛式或醇式而降低提取量;②吴茱萸中含有一些酸酚性的苦味素或黄酮类成分,这些成分的存在也导致了黄连小檗碱在煎煮过程中的减损[6-7]。
3.3.4 黄连-肉桂药对中因肉桂中含有多酚类成分(黄酮类、羟基查尔酮类),这些偏酸性成分的存在可导致黄连小檗碱在煎煮过程中的减损[8]。
3.3.5 黄连-干姜药对中因姜辣素中含有姜酚、姜烯酚等酚性成分,并含有棕榈酸、硬脂酸等成分,在一定程度上也造成了黄连小檗碱提取量的降低[9]。
3.3.6 黄连-附子药对中因附子主要含有生物碱类成分,虽也含有一些高级脂肪酸类成分,但以生物碱类成分为主,且碱性又不是很强,使之对盐酸小檗碱的提取量未产生明显影响[10]。
3.3.7 寒热配伍属相反相成配伍,作用增强。但从实验结果看四个热性药均在一定程度上降低了同一寒性药黄连中的主要活性成分小檗碱的提取量,可以推测寒热配伍的相成作用不能单纯从物质基础增损的角度来考虑,可能从药对配伍对药理效应的影响角度来探讨配伍机理更为适宜。
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本文编辑:张钰
Effect of Hot Drugs Including Monkshood, Cinnamon, Evodia and Ginger on Extraction of Berberine Hydrochloride in Cold Drug Goldthread
Yang Yu-feng, Duan Xiu-jun
Objective:To investigate the effect of hot drugs including monkshood, cinnamon, evodia and ginger on extraction of berberine hydrochloride in cold drug goldthread. Metheds:The effect of four kinds of traditional Chinese medicines of hot nature on the extract of berberine hydrochloride, a major active component of coptis chinensis, a traditional Chinese medicine of cool nature, was evaluated by HPLC. Results:The decocation of four hot drugs together with goldthread decreased the amounts of berberine hydrochloride extracted. In the turn of effect level, the four hot drugs were evodia>cinnamon>ginger>monkshood. Conclusion:All the four hot drugs decreased the amount of berberine hydrochloride extracted from goldthread.
Cold Drug; Hot Drug; Berberine Hydrochloride; Compatibility Change
R286
A
10.3969/j.issn.2096-3327.2017.04.010
2017-03-22
山西省自然科学基金项目,项目编号:2013011048-6
杨宇峰,男,硕士。研究方向:药事管理学。E-mail:18636173685@163.com
段秀俊,女,硕士,副教授。研究方向:药物制剂与方剂化学。E-mail:dxjzhyxy@163.com