恩诺沙星对肉仔鸡胫骨发育的影响

程雪娇 ， 辛 良 ， 范庆增, ， 武沛泽 ， 王宏钧 ， 薛宝君 ， 陈 健 ， 王晓荣 ， 范 开 ， 常建宇

(1.天津市中升挑战生物科技有限公司 ， 天津西青300380 ；2.中国农业大学动物医学院 ， 北京海淀100193)

恩诺沙星对肉仔鸡胫骨发育的影响

程雪娇 ， 辛 良2， 范庆增1,2， 武沛泽2， 王宏钧2， 薛宝君1， 陈 健2， 王晓荣2， 范 开2， 常建宇2

(1.天津市中升挑战生物科技有限公司 ， 天津西青300380 ；2.中国农业大学动物医学院 ， 北京海淀100193)

为了探究氟喹诺酮类药物恩诺沙星对禽类胫骨发育的影响， 以恩诺沙星为研究对象， 选取雄性肉鸡鸡雏， 随机分成5组， 分别为空白组、 10 mg/kg体重组、 30 mg/kg体重组、 60 mg/kg体重组、 100 mg/kg体重组， 每组36只， 于1日龄和7日龄进行相应的给药处理， 在7、 14、 21、 28、 35、 42 d每组随机抽取6只肉鸡，称取胫骨鲜重， 量取胫骨长度， 骨密度仪测量胫骨密度， 胫骨干重， 茂福炉550 ℃高温灰化后得灰分含量， 紫外分光光度法测胫骨磷含量， EDTA钙滴定法测胫骨钙含量， 评价胫骨发育情况。 结果表明，至出栏前恩诺沙星对于肉仔鸡胫骨发育的影响各组之间差异不显著。

恩诺沙星 ； 肉仔鸡 ； 胫骨发育

恩诺沙星是国家指定的动物专用氟喹诺酮类药物，可用于哺乳动物、家禽及水产动物，我国使用初期，即20世纪末有报道过7起恩诺沙星的家禽中毒事故[1-7]，其中5例是肉雏鸡中毒，1例是雏番鸭中毒，1例是青年鸡中毒，肌肉给药和口服给药方式均有，绝大部分是由于给药剂量过大引起的急性中毒。恩诺沙星对肉仔鸡胫骨发育的影响的相关研究，尚未见有过报道。

氟喹诺酮类药物的关节软骨毒性已经在许多哺乳动物中证实[8]，并且存在着种属特异性，年龄和剂量相关性。而随着恩诺沙星使用范围的扩大，在家禽上的使用也越来越多，本试验从胫骨发育角度出发，阐述恩诺沙星对肉仔鸡骨骼发育的影响。

1 试验材料

-20 ℃冰箱，-80 ℃冰箱，电子分析天平，电热恒温培养箱，电陶炉，远红外辐射干燥箱，茂福炉，紫外分光光度计，生理盐水，甲醛，浓硝酸，浓盐酸，冰乙酸，盐酸羟胺，三乙醇胺，乙二胺，20%恩诺沙星注射液，1日龄鸡雏，雏鸡饲料，育成鸡饲料

2 试验步骤

2.1 采取单因子随机试验设计 将5组的雏鸡按照下表对应的给药剂量进行给药。其中肌肉注射的低(A)、中(B)、高(C)、超高(D)剂量组分别于1日龄和7日龄按相应剂量肌肉注射给药1次，空白对照组于1日龄和7日龄肌肉注射生理盐水1次，每次0.5 mL/只。

表1 分组设计

注：肌肉注射的部位是雏鸡的左腿

2.2 胫骨取样 每组分别在第7、14、21、28、35、42天随机抓取6只，分离鸡只左侧胫骨，生理盐水清洗后擦干，称重，量取胫骨长度。然后将每只鸡的胫骨单独封存后置于-20 ℃存储。根据测得的胫骨长度、胫骨鲜重与对应肉仔鸡的体重分别计算胫骨重量占肉仔鸡体重的相对重量以及胫骨鲜重对胫骨长度的单位重量。

2.3 胫骨干重 取-20 ℃冻存的胫骨自然解冻至室温(20 ℃左右)，置100 ℃干燥箱中至恒重后准确称量，记录胫骨烘干重量。

2.4 胫骨骨密度 将-20 ℃冻存的胫骨自然解冻至室温(20 ℃左右)，将待测样品置于探测器下，测量点为前端1/3处。启动驱动装置使放射源与探头同步运动，测定仪自动记录透过骨样的射线量并计算出骨密度BMD，单位g/cm2。

2.5 胫骨灰分 将带盖坩埚置于茂福炉中，在550 ℃煅烧，取出后干燥称重，重复放入茂福炉中煅烧，冷却，称重直至2次质量之差小于0.0005 g为恒重。

2.6 胫骨骨磷含量和胫骨骨钙含量的测定 分别利用比色法和络合滴定法测定经茂福炉煅烧的样品的骨磷含量和骨钙含量(简写钙、磷含量的测定)

2.7 试验结果 用均值表示，且统计结果采用SPSS 17.0 One-Way ANOVA模块进行分析，Ducan法比较显著性，同行数据肩标小写字母不同者表示差异显著(P<0.05)，肩标相同字母或无字母者表示差异不显著(P>0.05)。Graghpad Prism 5.0作统计图，CAVAS X处理统计图。

3 试验结果

3.1 恩诺沙星对肉鸡胫骨单位重量的影响 肉仔鸡在1周龄时的单位重量组间差异不显著(P>0.05)，即恩诺沙星不同剂量时对1周龄肉仔胫骨重量的影响不显著；2周龄时，单位重量组间差异显著(P<0.05)，10 mg组、60 mg组与空白组相比差异显著(P<0.05)；3周龄时，单位重量组间差异不显著(P>0.05)；4周龄时，单位重量组间差异显著(P<0.05)，10 mg组与空白组相比差异显著(P<0.05)；5周龄时，肉仔鸡的单位重量组间差异极显著(P<0.01)，30 mg组与空白组相比单位重量差异极显著(P<0.01)6周龄时，单位重量组间差异不显著(P>0.05)，但10 mg组、60 mg组与空白组相比单位重量的差异显著(P<0.05)。

3.2 恩诺沙星对肉鸡相对重量的影响 肉仔鸡在2、4、6周龄的相对重量组间差异均不显著(P>0.05)；肉仔鸡在1周龄时相对重量组间差异极显著(P<0.01)，100 mg/kg体重组1周龄肉仔鸡的相对重量与空白组相比差异显著(P<0.05)；肉仔鸡在3周龄时相对重量组间差异显著(P<0.05)，60 mg/kg体重组与空白组相比差异显著(P<0.05)；肉仔鸡在5周龄时相对重量组间差异显著P<0.05)，30 mg/kg体重组与空白组相比相对重量差异极显著(P<0.01)。

3.3 恩诺沙星对肉鸡胫骨长度的影响 肉仔鸡在1周龄时的胫骨长度组间差异显著(P<0.05)，即恩诺沙星不同剂量时对1周龄肉仔的胫骨长度影响显著，30 mg/kg体重、100 mg/kg体重组比10 mg/kg体重、60 mg/kg体重、空白组胫骨长度显著更长；肉仔鸡在2周龄时的胫骨长度组间差异不显著；肉仔鸡在3周龄时的胫骨长度的组间差异不显著(P>0.05)；肉仔鸡在4周龄时的相对长度组间差异显著(P<0.05)，30 mg/kg体重、60 mg/kg体重、100 mg/kg体重和空白组与10 mg/kg体重组差异显著；肉仔鸡在5周龄时的胫骨长度组间差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重、30 mg/kg体重组比60 mg/kg体重、100 mg/kg体重组与空白组胫骨长度差异显著；肉仔鸡在6周龄时的胫骨长度组间差异显著(P<0.05)。

3.4 恩诺沙星对肉鸡胫骨相对长度的影响 肉仔鸡在1周龄到4周龄时的相对长度组间差异不显著(P>0.05)，即恩诺沙星不同剂量时对1周龄到4周龄肉仔鸡的胫骨长度影响不显著；肉仔鸡在5周龄时的相对长度组间差异显著(P<0.05)，60 mg/kg体重组与空白组相比相对长度差异显著；肉仔鸡在6周龄时的相对长度组间差异不显著(P>0.05)。相对长度差异性相比胫骨长度而言敏感性较低，可能是药物对胫骨长度的影响与体长的影响在计算中相互抵消所致。

3.5 恩诺沙星对肉鸡胫骨骨密度的影响 不同剂量下恩诺沙星对肉仔鸡胫骨密度的影响在前3周不同剂量组与空白组组间差异均不显著(P>0.05)，但各剂量组的肉仔鸡胫骨密度在前3周均大于空白组肉仔鸡胫骨密度，且呈现出随剂量增加而骨密度下降的趋势；在第4周时，各剂量组之间差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重组与其余各组相比均具有显著的差异；第5周时，与第4周相似，各剂量组与空白组组间差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重组与其余各组相比均具有显著的差异(P<0.05)，其余各组之间无显著差异；第6周时，各剂量组与空白组组间差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重组与30 mg/kg体重、60 mg/kg体重及空白组相比差异显著(P<0.05)，与100 mg/kg体重组相比差异极显著(P<0.01)。不同剂量恩诺沙星对肉仔胫骨密度的影响从第3周开始明显，100 mg/kg体重组在后期表现出了骨密度明显低于其余剂量组及空白组。

3.6 诺沙星对肉鸡胫骨灰分的影响 第1周和第2周时，各恩诺沙星剂量组以及空白组对肉仔鸡胫骨灰分的影响组间差异均不显著(P>0.05)；第3周时，各恩诺沙星剂量组及空白组对肉仔鸡胫骨灰分影响组间差异显著(P<0.05)，30 mg/kg体重组与60 mg/kg体重、100 mg/kg体重组胫骨灰分含量差异显著(P<0.05)，空白组与60 mg/kg体重、100 mg/kg 体重组胫骨灰分含量相比差异显著(P>0.05)；第4周，各恩诺沙星剂量组及空白组对肉仔鸡胫骨灰分含量影响组间差异显著(P<0.05)，30 mg/kg体重与100 mg/kg体重组胫骨灰分含量相比差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重、60 mg/kg体重、空白组相比差异不显著；第5周时，各剂量恩诺沙星和空白组对肉仔鸡胫骨灰分含量的影响组间差异不显著(P>0.05)，即不同剂量组恩诺沙星和与空白组间无明显差异；第6周，不同剂量恩诺沙星及空白组对肉仔鸡胫骨灰分含量组间差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重组、空白组与60 mg/kg体重组相比差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重组和空白组与100 mg/kg体重相比差异均显著(P<0.05)。

3.7 恩诺沙星对肉鸡胫骨磷含量的影响(1)磷标准曲线 由图1所得磷标准曲线图可知，在波长为278 nm条件下，磷浓度在1-25 ug/mL浓度范围内线性方程为y = 0.0872x -0.006，R2=0.9999，线性关系良好。(2)胫骨磷含量 第1周时，各剂量恩诺沙星对肉鸡胫骨磷含量的影响组间差异不显著(P>0.05)；第2周时，各剂量恩诺沙星对肉鸡胫骨磷含量的影响组间差异不显著(P>0.05)；第3周时，不同剂量恩诺沙星与空白组对肉鸡胫骨磷含量组间差异不显著(P>0.05)；第4周时，空白组、10 mg/kg体重组、30 mg/kg体重组和60 mg/kg体重组与100 mg/kg体重组肉鸡胫骨磷含量差异显著(P<0.05)，空白组、10 mg/kg体重组、30 mg/kg体重组和60 mg/kg体重组肉鸡胫骨磷含量两两之间差异不显著(P>0.05)；第5周时，不同剂量恩诺沙星与空白组对肉鸡胫骨磷含量组间差异不显著(P>0.05)；第6周时，空白组、10 mg/kg体重组、30 mg/kg体重组和60 mg/kg体重组与100 mg/kg体重组肉鸡胫骨磷含量差异显著(P<0.05)，空白组、10 mg/kg体重组、30 mg/kg体重组和60 mg/kg体重组肉鸡胫骨磷含量两两之间差异不显著(P>0.05)

图1 磷标准曲线

3.8 恩诺沙星对胫骨钙含量的影响 第1周到第4周，不同剂量恩诺沙星组与空白组肉鸡胫骨钙含量组间差异不显著(P>0.05)；第5周和第6周时，10 mg/kg体重、30 mg/kg体重、60 mg/kg体重组以及空白对照组胫骨钙含量比100 mg/kg体重组高，相比差异显著(P<0.05)，10 mg/kg体重、30 mg/kg体重、60 mg/kg体重组以及空白组相比差异不显著(P>0.05)。由上可知，胫骨钙含量只有在恩诺沙星超高剂量使用后期才会表现降低。其他剂量组与空白组钙之间胫骨钙含量无明显差异。

4 讨论

胫骨长度与胫骨重量是评估肉仔鸡胫骨生长发育的重要指标。一般情况下，胫骨的长度与重量越大，表明胫骨生长发育越好。本试验结果显示，不同剂量恩诺沙星对肉仔鸡胫骨长度与重量均有一定的影响，且存在着随剂量的升高而肉鸡的胫骨长度与重量呈现出先升高后下降的趋势，表明一定剂量的恩诺沙星有利于肉仔鸡的生长发育，而超过一定浓度后，恩诺沙星对肉仔鸡不利影响开始显现，但依然没有显著低于肉仔鸡空白组胫骨的生长发育，这说明高剂量的恩诺沙星在一定程度上依然有利于肉仔鸡胫骨的生长发育，但这种有利影响逐渐消失或者与其产生的毒副作用抵消。有文章指出，骨重占体重的百分比例是反映幼雏骨钙磷需要的敏感指标，也是反映骨骼发育的指标之一。百分比高就表示幼雏的钙磷需求满足度高，骨骼发育程度较好，否则钙磷含量不能达到骨骼发育的需要量，骨骼发育受到限制。本试验结果表明，胫骨相对重量和单位长度两项指标对肉仔鸡发育及钙磷沉降的指示性不明显，这可能是肉仔鸡在胫骨长度和重量发生变化的同时，体重与体长也发生了趋势下的变化，从而导致相对指标的变化。而相比之下，单独比较不同剂量下肉仔鸡不同时期的体重变化和日增重我们可以发现，30 mg/kg体重剂量组的增长与空白对照组的增长趋势具有一致性且其增长率要大于空白组的增长率。而其余剂量组的肉仔鸡体重及日增重的6周变化趋势比较紊乱，无明显指示性意义。

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2016-08-09

程雪娇(1981-)，女，工程师，硕士，主要从事兽药的研发及申报工作，E-mail：tzchengxuejiao@qq.com

范开，E-mail：dirtyfan@sina.com；常建宇，E-mail：changjianyu@cau.edu.cn

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0529-6005(2017)05-0107-03