梅奇酵母C14菌株的生化组成分析

2017-06-19杨志平

中国水产 2017年6期

文/徐哲吴斌杨志平

梅奇酵母C14菌株的生化组成分析

文/徐哲吴斌杨志平

通过对梅奇酵母C14菌株的生化组成进行分析，发现梅奇酵母C14菌株具有水产动物饵料生物的营养价值。但是，该菌株缺乏多不饱和脂肪酸EPA和DHA，作为幼体饵料使用时，需要添加富含这两种多不饱和脂肪酸的藻类作为补充。

酵母菌菌体富含蛋白质、核酸、维生素、多糖和维生素等营养物质，并且可以利用成本低廉的农副产品进行大量培养以生产单细胞蛋，因此，酵母菌作为生物饵料已被广泛应用于水产养殖业。海洋红酵母（Rhodotorula sp.）可以替代单胞藻进行刺参浮游幼体的培育；德巴利酵母(Debaryomyces sp.)MY3、克鲁维酵母(Kluyveromyces sp.)MY32和虫道酵母(Ambrosiozyma sp.)MY33以不超过50%的比例替代球等鞭金藻(Isochrysis galbana)，对海湾扇贝(Argopecten irradians)幼贝的生长和存活基本没有影响；沼泽生红冬孢酵母(Rhodosporidium paludigenum) 能够促进凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的生长；清酒假丝酵母(Candida sake )S165、汉逊德巴利酵母(D. hansenii) S8和热带假丝酵母(Candida tropicalis )S186 是印度明对虾(Fenneropenaeus indicus)有效的免疫增强剂。除了海洋酵母在水产养殖中的成功应用外，一些学者也对酵母本身的生化成分进行了分析。梅奇酵母(Metschnikowia sp.) C14菌株是从健康刺参肠道分离筛选的，实验证明，该菌株可提高刺参幼参生长、消化作用和免疫功能。为了进一步了解其生化成分，本实验测定了C14菌株的生化组成，为扩大开发利用该酵母菌提供参考。

一、材料与方法

1.菌株

梅奇酵母C14从健康刺参肠道分离获得。将C14种到YPD液体种子培养基，其配方为：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g，陈海水1000mL,自然pH。于25℃下150r/分钟培养过夜，将得到的种子液接种到YPD液体培养基，在相同条件下培养对数生长期，以4000r/分钟离心10分钟获得细胞，用生理盐水重悬，离心，保存在－80℃冰箱备用。

2.基本营养成分测定

粗蛋白测定采用凯氏定氮法（GB/T 5009.5-2010），糖分测定采用分光光度计法（参照GB/T 9695.31-2008）进行，粗脂肪测定采用索氏抽提法（GB/T 5009.6-2003），灰分测定采用马弗炉焚烧法（GB/T 5009.4-2010）。

3.氨基酸测定

按GB/T5009.124—2003的方法，取适量样品经水解后，利用氨基酸全自动分析仪进行分析（谱尼测试科技股份有限公司）。

4.脂肪酸测定

取菌体细胞10g加入2%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚甲醇溶液，使用Folch的方法提取脂质。将得到的脂质用0.5mol/L的KOH-甲醇在70℃水解1h后，使用Metcalfe等的方法来制备脂肪酸甲酯，利用石油醚萃取后浓缩，进行气相色谱分析，脂肪酸的定量分析采用面积归一法计算而得。

二、结果与讨论

1.梅奇酵母C14菌株的基本营养成分

C14菌株的基本营养成分测定结果如表1所示。结果表明，该菌株的粗蛋白含量为42.12%，为酵母菌的主要成分，在已报道海洋酵母的蛋白质含量范围（23%～57%）之内。该菌株的蛋白质含量相对于水产养殖上刺参对生物饵料的蛋白需求较高。糖分是刺参新陈代谢的主要能量来源，梅奇酵母C14菌株的糖分含量为28.15%。来源于酵母细胞壁的葡聚糖对刺参有免疫刺激作用。梅奇酵母C14菌株的粗脂肪含量为12.17%，高于其他海洋酵母。由于刺参对脂肪需求量并不高，因此，该菌株的脂肪含量高于刺参对脂肪的需求量。刺参生长需要少量的矿物质，不同海洋酵母灰分含量差别很大（5.35%～13%），梅奇酵母C14菌株的灰分含量为9.14%与Dipodascus capitatusACM 4779的接近。

表1 梅奇酵母C14菌株的基本营养成分（%干重）

2.梅奇酵母C14菌株的氨基酸的组成和含量

C14菌株的氨基酸成分测定结果如表2所示。该菌株的谷氨酸、天门冬氨酸和亮氨酸含量较高，并含有丰富的必需氨基酸。已报道海洋酵母含有16种～18种氨基酸，梅奇酵母菌株C14菌株含16种氨基酸，与沼泽生红冬孢酵母的类似。刺参体壁中也含有这16种氨基酸，包括7种必需氨基酸分别是异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸和缬氨酸。梅奇酵母菌株C14菌株具备这些必需氨基酸(表2)。生物饵料中的必需氨基酸组成与动物本身氨基酸组成相近似可视为该动物的最适饲料。该菌株的必须氨基酸指数（EAAI）值为1.06可作为优质蛋白源应用于刺参养殖。

3.梅奇酵母C14菌株的脂肪酸的组成和含量

不同海洋酵母脂肪酸组成含量变化很大。C14菌株的脂肪酸成分测定结果如表3所示。结果显示，C14菌株亚油酸(18∶2n-6)含量高达30.96%，其次是18∶1、16∶0、16∶1和18∶3n-3，其余含量相对较低。不过，该菌株不含水产动物生长所必需的多不饱和脂肪酸EPA(20∶5n-3)和DHA(22∶6n-3)，与前人研究结果一致。因此，在水产动物幼体培育中，建议使用海洋酵母饵料时可添加一定比例的藻类使营养上得到互补。