HPLC法测定芪连通络胶囊中天麻素的含量*

2017-06-19王艳艳刘长河

中医研究 2017年4期

关键词：项下天麻通络

王艳艳，刘长河

(河南省中医药研究院，河南郑州 450004)

·药学研究·

HPLC法测定芪连通络胶囊中天麻素的含量*

王艳艳，刘长河

(河南省中医药研究院，河南郑州 450004)

目的：建立芪连通络胶囊中天麻素的HPLC含量测定方法。方法：采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，以乙腈-0.5 mL/L磷酸溶液(1∶99)为流动相,检测波长220 nm,柱温40 ℃,体积流量1.0 mL/min。理论板数按天麻素峰计算应不低于3 000。结果：天麻素在0.082 ～0.410 μg 间线性良好，r=0.999 5(n=5)。天麻素平均加样回收率为99.5%(RSD=1.84%,n=6)。结论：所建立的测定方法准确可靠，简便易行，重现性好，能够很好的开展该制剂的定量控制。

芪连通络胶囊；天麻素含量测定；HPLC法

芪连通络胶囊为山西临汾中医院的医院制剂，由雪莲花、天麻、黄芪、党参、地龙组成，具有补益肾气、活血通络的功效，临床用于中风的治疗，效果良好。天麻为处方中重要药物，临床和实验研究[1-3]表明，天麻中所含的天麻素具有镇痛、安眠、镇静等中枢抑制作用，能增加脑血流量，改善椎基底动脉供血不足，保护神经细胞。本研究选择天麻素作为指标性成分，对芪连通络胶囊中的天麻素进行含量测定，以便更好地控制制剂的内在质量。

1 药品、试剂与仪器

芪连通络胶囊样品，临汾中医院制剂室生产，批号分别为160130，160131，160132。天麻素对照品，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号110807-201306。乙腈，高效液相用色谱纯，美国DIKMA公司产品，批号R141048；水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。LC-10A液相色谱系统，日本岛津公司产品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

参照参考文献[1]方法。色谱柱为依利特C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈- 0.5 mL/L磷酸溶液(1∶99)，体积流量1.0 mL/min，柱温40 ℃，检测波长220 nm，进样体积10 μL，理论板数按天麻素峰计应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取天麻素对照品2.05 μg，置50 mL量瓶中，加流动相制成1 mL含天麻素 41 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品提取方法研究和供试品溶液的制备

取批号为160130的芪连通络胶囊内容物适量，研细，混匀，精密称取6份，每份约0.5 g，精密称定，各加入稀乙醇溶液25 mL，1-4号分别超声处理提取30，60，90，120 min，5-6号分别加热回流提取1，2.5 h。滤过，取滤液进样10 μL测定天麻素的含量。结果：1-6号样品天麻素含量分别为1.68，1.70，1.72，1.72，1.72和1.73 mg/g。结果提示：超声、回流提取的天麻素量基本一致，超声提取60，90，120 min基本可将天麻素提取完全。考虑到超声处理方法简便易行，选择超声提取60 min的方法提取供试品溶液。

取本品内容物适量，混匀，研细，取约0.5 g，精密称定，置50 mL三角瓶中，准确加入稀乙醇溶液25 mL，称定质量，超声处理(功率350 W，频率40 kHz)1 h，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5 mL，蒸干，残渣用流动溶液相适量使溶解，并转移至10 mL量瓶中，用流动相溶液稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液，即得。

2.4 线性关系的考察

分别精密称取2.2项下的天麻素对照品溶液2，4，6，8，10 μL，进样测定其峰面积，以天麻素进样量(μg)为纵坐标(Y)，以峰面积积分值为横坐标(X)，计算回归方程，绘制天麻素的标准曲线。回归方程为：Y=5.305 53×10-7X+2.633 21×10-3，r=0.999 5。结果表明：天麻素进样量在0.082～0.410 μg 之间，峰面积积分值(X)与天麻素的进样量(Y)呈良好的线性关系。

2.5 阴性对照试验

取芪连通络胶囊处方中除天麻外的其他药物，按处方比例，按其工艺制成不含天麻的空白制剂，按2.3项下方法制备缺天麻阴性样品。分别取天麻素对照品溶液、芪连通络胶囊供试品溶液、缺天麻阴性样品溶液，按2.1项下色谱条件下进样分析。结果：供试品溶液色谱中，在与天麻素对照品色谱相同保留时间处有相应的吸收峰出现，且分离良好；缺天麻阴性样品色谱中，在与天麻素对照品色谱相同保留时间处没有相应的吸收峰出现，提示方中除天麻外的其他药物对测定无干扰，见图1。

A.天麻素对照品；B.芪连通络胶囊供试品；C.缺天麻阴性样品

2.6 精密度试验

取批号为160130的芪连通络胶囊样品，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件重复进样5次，测定峰面积。结果：天麻素的峰面积RSD值(n=5)为0.21%。结果表明：仪器精密度较好。

2.7 稳定性试验

取批号为160130的芪连通络胶囊样品，照2.3项下方法，制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别于供试品溶液制备完成0，1，2，4，6，7 h测定测得天麻素峰面积RSD值(n=6)为0.68%。结果表明：供试品溶液于7 h内稳定性较好。

2.8 重复性试验

取批号为160130的芪连通络胶囊样品，按2.3项下方法制备6份供试品溶液，在2.1项色谱条件下测定。结果：样品中天麻素的平均含量为0.852 mg/粒(RSD=1.66%，n=6)。结果表明：天麻素测定的重复性较好。

2.9 加样回收率试验

取天麻素含量已知的芪连通络胶囊(批号为160130，含量按0.883 mg/粒、即1.765 1 mg/g计)内容物适量，研细、混匀，称取6份，每份约0.25 g，精密称定，分别准确加入含有0.092 g/L天麻素稀乙醇溶液5 mL和稀乙醇溶液20 mL，按2.3项下方法制备加样回收率供试品溶液，按2.1项下方法测定，计算天麻素的加样回收率。结果：天麻素加样回收率分别为99.78%、99.02%、101.16%、100.55%、100.27%和95.57%。结果表明：天麻素平均加样回收率为99.5%(RSD=1.84%，n=6)。

2.10 样品测定

分别取批号为160130，160131，160132的芪连通络胶囊适量，除去囊壳，研细，混匀，分别按2.3项下方法制备供试品溶液，测定并计算出芪连通络胶囊中天麻素的含量。结果：3批样品的测定结果分别为0.870，0.763和0.883 mg/粒(n=3)。

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法研究

根据天麻素的理化性质，采用稀乙醇为溶剂对芪连通络胶囊中天麻素进行提取。据文献[5-6]报道，使用超声和回流提取均能较好地提取出天麻素。笔者在实验中分别比较了超声处理和加热回流两种提取方式，并比较了不同的提取时间，根据实验结果选择超声处理1h提取供试品溶液。所选供试品溶液的处理方法操作简便、准确可靠。

3.2 色谱条件的选择

天麻为《中国药典》2015版一部收载品种[7]。本实验在选择色谱条件时参照了《中国药典》中规定的HPLC法，对色谱流动相中乙腈与磷酸溶液的不同配比进行了实验。文中所选流动相比例峰型对称，保留时间适宜，与杂质峰可良好分离，基线平稳。

本文采用与《中国药典》一致的HPLC法建立芪连通络胶囊中天麻素的含量测定方法，可丰富该制剂的质控标准，有助于提高制剂的临床有效性，可为含天麻的复方制剂的定量质控提供参考。

[1]叶靖宇.天麻素注射液联合高压氧治疗椎基底动脉供血不足疗效观察[J].中国社区医师(医学专业)，2012,14(11):63-64.

[2]聂晶，杜亮，陆远富，等.天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用[J].重庆医学，2012,41(18)：1841-1842.

[3]徐纪伟，陈旭东，刘喜民，等.天麻素对大鼠脊髓损伤后神经元的保护作用[J]. 时珍国医国药，2011，22 (3) :568 -569.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010:54.

[5]刘辉,张婧,樊光辉，等.HPLC法测定天麻素缓释片中天麻素的含量[J].中国药师，2013,16(6)：825-827.

[6]樊莉,周世文.黄芪天麻胶囊的质量标准研究[J].中国药房，2013,24(35)：3314-3317.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部 [M].北京：中国医药出版社，2015：58-59.

(编辑陶珠)

1001-6910(2017)04-0078-03