PD—1抗体在肿瘤治疗中的应用

黄乐

【摘 要】 目的：分析PD-1抗体在肿瘤治疗中的应用价值。方法：从2014年2月～2015年9月，医院住院的15名肺癌患者中、15名体检健康的志愿者，采血获得外周血单个核细胞（PBMCs），体外培养CIK细胞，进行肿瘤组织离体培养，以CIK为效应细胞，以A549、H1299、原代细胞为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按照10：1比例混合，采用GytoTox-Glo细胞毒性检测细胞进行活化淋巴细胞杀伤作用检测，以自身PBMC作为阴性对照组，设置实验组加入效应细胞，同时另设三组分别加入10、50、100ngPD -1抗体（低剂量组、中剂量组、高剂量组）。结果：实验组、小剂量组、中剂量组、高剂量组肿瘤细胞杀伤率指标差异有统计学意义，高剂量组高于中剂量组，中剂量组高于小剂量组，小剂量组高于实验组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：PD-1抗体可增强效应细胞杀伤肿瘤细胞作用。

【关键词】 恶性肿瘤 靶向治疗 PD-1抗体

靶向治疗是恶性肿瘤治疗的新疗法，也是当前最有潜力的肿瘤疗法。PD-1抗体是PD-LI一个抑制性受体，PD-1分子尾部含有2个酪氨酸残基，他们与下游信号传导分子相互作用，可能发挥不同的调节作用，PD-1表达与活化的T、B淋巴细胞、NK细胞、活化的单核以及树突状细胞[1]。本次研究采用体外试验研究，评价PD-1抗体在肿瘤治疗中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 样本来源

从2014年2月～2015年9月，医院住院的15名肺癌患者中，抽取血液10ml，其中男6例、女4例，平均年龄（58.1±5.2）岁。另选择体检健康的志愿者15名，其中男6例、女4例，平均年龄（58.3±5.2）岁，采血10ml。从人淋巴新=细胞中，采用梯度離心法，获得外周血单个核细胞（PBMCs），含有10%FCS和200U/ml IL-2的PRMI-1640培养基悬浮培养。

1.2 仪器与试剂

仪器主要包括牛血清单板、PD-1单抗、流式细胞仪、自动酶标仪、各类培养基，BX-60荧光显微镜等。

1.3 方法

首先：体外培养CIK细胞，取静脉血EDTA抗凝，分离淋巴细胞分离液，获得的细胞，于4ml1640完全培养基重悬，计数台盼蓝备用，而后进行CIK细胞培养。健康的人PBMC采用1-2×106/mln浓度悬浮无血清培养液，加入重组人IFN-g，37℃，5%CO2培养箱中培养，24h加入CD3单克隆抗体50ng/ml，重组人IL-2 300U/ml，刺激CIK细胞生长增殖，加入重组人IL-1a 100U/ml，换液培养扩瓶，并补充IL-1a，第14日收获CIK细胞，染色。其次，进行肿瘤组织离体培养，保存离体组织，快处理，消化，培养，过滤，离心滤液，进行培养，换液传代。最后进行肿瘤杀伤实验：以CIK为效应细胞，以A549、H1299、原代细胞为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按照10：1比例加入到96孔U型板中，采用GytoTox-Glo细胞毒性检测细胞进行活化淋巴细胞杀伤作用检测，以AAF-GloTM为底物，发光强度与细胞毒效应的细胞数量成正比，计算总细胞发光强度减去死细胞发光强度计算细胞活力，计算活化淋巴细胞对靶细胞杀伤率。以自身PBMC作为阴性对照组，设置实验组加入效应细胞，同时另设三组分别加入10、50、100ngPD -1抗体（低剂量组、中剂量组、高剂量组）。37℃，5%CO2孵育6h，每孔加入50μl荧光底物检测，室温下摇床低速震荡15min，采用酶标仪检测每孔发光值。细胞杀伤率=[（目标组发光值-淋巴对照组组发光值-靶细胞对照组发光值+培养基发光值）/（靶细胞总发光值-靶细胞对照组发光值）]×100%。

1.4 统计学处理

采用SPSS20.0软件进行统计学计算，杀伤率指标采用（Mena±SD）符号（x±s）表示，服从正态分布组间比较采用t检验，多组间比较F检验，以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

实验组、小剂量组、中剂量组、高剂量组肿瘤细胞杀伤率指标差异有统计学意义，高剂量组高于中剂量组，中剂量组高于小剂量组，小剂量组高于实验组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3 讨论

从本次研究结果来看，体外试验证实：PD-1抗体可增强CIK效应细胞杀伤肿瘤细胞作用，提高肿瘤细胞杀伤率，且表现出剂量依赖。目前抗PD-1药物已进入临床试验阶段，一项针对进展期难治性NSCLC的meta分析显示，抗PD-L1药物可起到增效作用，提高患者的中位总生存期[HR=0.61，95%CI0.61～0.75，P<0.05），和总缓解率[HR=0.56，95%CI0.43～0.73，P<0.05）[2]。另一项针对PD-1/PD-L1抗体与多西他赛治疗晚期非小细胞肺癌的meta分析显示，看题组不良反应发生率较低，总的不良反应发生率显著下降，但免疫相关不良反应发生率上升[3]。PD-1抗体通过发挥增效作用，延长恶性肿瘤患者生存期，也可能存在不良反应，影响免疫功能[4]。

参考文献

[1]曹佳彬，魏敬双.PD-1 抗体在肿瘤治疗中的应用[J].中国生物制品学杂志，2014，27（6）：856-860.

[2]王心怡，李晨露.抗PD-L1药物治疗进展期难治型NSCLC有效性与安全性Meta分析[J].青岛大学医学院学报，2016，52（6）：659-664.

[3]苏强，闫涵，侯艳丽，等.PD-1/PD-L1抗体与多西他赛治疗晚期非小细胞肺癌安全性meta分析[J].中华肿瘤防治杂志，2016，23（21）：1450-1452.