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PD—1抗体在肿瘤治疗中的应用

2017-06-09黄乐

今日健康 2016年11期
关键词:靶细胞小剂量抗体

黄乐

【摘 要】 目的:分析PD-1抗体在肿瘤治疗中的应用价值。方法:从2014年2月~2015年9月,医院住院的15名肺癌患者中、15名体检健康的志愿者,采血获得外周血单个核细胞(PBMCs),体外培养CIK细胞,进行肿瘤组织离体培养,以CIK为效应细胞,以A549、H1299、原代细胞为靶细胞,将效应细胞与靶细胞按照10:1比例混合,采用GytoTox-Glo细胞毒性检测细胞进行活化淋巴细胞杀伤作用检测,以自身PBMC作为阴性对照组,设置实验组加入效应细胞,同时另设三组分别加入10、50、100ngPD -1抗体(低剂量组、中剂量组、高剂量组)。结果:实验组、小剂量组、中剂量组、高剂量组肿瘤细胞杀伤率指标差异有统计学意义,高剂量组高于中剂量组,中剂量组高于小剂量组,小剂量组高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PD-1抗体可增强效应细胞杀伤肿瘤细胞作用。

【关键词】 恶性肿瘤 靶向治疗 PD-1抗体

靶向治疗是恶性肿瘤治疗的新疗法,也是当前最有潜力的肿瘤疗法。PD-1抗体是PD-LI一个抑制性受体,PD-1分子尾部含有2个酪氨酸残基,他们与下游信号传导分子相互作用,可能发挥不同的调节作用,PD-1表达与活化的T、B淋巴细胞、NK细胞、活化的单核以及树突状细胞[1]。本次研究采用体外试验研究,评价PD-1抗体在肿瘤治疗中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 样本来源

从2014年2月~2015年9月,医院住院的15名肺癌患者中,抽取血液10ml,其中男6例、女4例,平均年龄(58.1±5.2)岁。另选择体检健康的志愿者15名,其中男6例、女4例,平均年龄(58.3±5.2)岁,采血10ml。从人淋巴新=细胞中,采用梯度離心法,获得外周血单个核细胞(PBMCs),含有10%FCS和200U/ml IL-2的PRMI-1640培养基悬浮培养。

1.2 仪器与试剂

仪器主要包括牛血清单板、PD-1单抗、流式细胞仪、自动酶标仪、各类培养基,BX-60荧光显微镜等。

1.3 方法

首先:体外培养CIK细胞,取静脉血EDTA抗凝,分离淋巴细胞分离液,获得的细胞,于4ml1640完全培养基重悬,计数台盼蓝备用,而后进行CIK细胞培养。健康的人PBMC采用1-2×106/mln浓度悬浮无血清培养液,加入重组人IFN-g,37℃,5%CO2培养箱中培养,24h加入CD3单克隆抗体50ng/ml,重组人IL-2 300U/ml,刺激CIK细胞生长增殖,加入重组人IL-1a 100U/ml,换液培养扩瓶,并补充IL-1a,第14日收获CIK细胞,染色。其次,进行肿瘤组织离体培养,保存离体组织,快处理,消化,培养,过滤,离心滤液,进行培养,换液传代。最后进行肿瘤杀伤实验:以CIK为效应细胞,以A549、H1299、原代细胞为靶细胞,将效应细胞与靶细胞按照10:1比例加入到96孔U型板中,采用GytoTox-Glo细胞毒性检测细胞进行活化淋巴细胞杀伤作用检测,以AAF-GloTM为底物,发光强度与细胞毒效应的细胞数量成正比,计算总细胞发光强度减去死细胞发光强度计算细胞活力,计算活化淋巴细胞对靶细胞杀伤率。以自身PBMC作为阴性对照组,设置实验组加入效应细胞,同时另设三组分别加入10、50、100ngPD -1抗体(低剂量组、中剂量组、高剂量组)。37℃,5%CO2孵育6h,每孔加入50μl荧光底物检测,室温下摇床低速震荡15min,采用酶标仪检测每孔发光值。细胞杀伤率=[(目标组发光值-淋巴对照组组发光值-靶细胞对照组发光值+培养基发光值)/(靶细胞总发光值-靶细胞对照组发光值)]×100%。

1.4 统计学处理

采用SPSS20.0软件进行统计学计算,杀伤率指标采用(Mena±SD)符号(x±s)表示,服从正态分布组间比较采用t检验,多组间比较F检验,以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

实验组、小剂量组、中剂量组、高剂量组肿瘤细胞杀伤率指标差异有统计学意义,高剂量组高于中剂量组,中剂量组高于小剂量组,小剂量组高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

3 讨论

从本次研究结果来看,体外试验证实:PD-1抗体可增强CIK效应细胞杀伤肿瘤细胞作用,提高肿瘤细胞杀伤率,且表现出剂量依赖。目前抗PD-1药物已进入临床试验阶段,一项针对进展期难治性NSCLC的meta分析显示,抗PD-L1药物可起到增效作用,提高患者的中位总生存期[HR=0.61,95%CI0.61~0.75,P<0.05),和总缓解率[HR=0.56,95%CI0.43~0.73,P<0.05)[2]。另一项针对PD-1/PD-L1抗体与多西他赛治疗晚期非小细胞肺癌的meta分析显示,看题组不良反应发生率较低,总的不良反应发生率显著下降,但免疫相关不良反应发生率上升[3]。PD-1抗体通过发挥增效作用,延长恶性肿瘤患者生存期,也可能存在不良反应,影响免疫功能[4]。

参考文献

[1]曹佳彬,魏敬双.PD-1 抗体在肿瘤治疗中的应用[J].中国生物制品学杂志,2014,27(6):856-860.

[2]王心怡,李晨露.抗PD-L1药物治疗进展期难治型NSCLC有效性与安全性Meta分析[J].青岛大学医学院学报,2016,52(6):659-664.

[3]苏强,闫涵,侯艳丽,等.PD-1/PD-L1抗体与多西他赛治疗晚期非小细胞肺癌安全性meta分析[J].中华肿瘤防治杂志,2016,23(21):1450-1452.

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