补中益气汤对脾虚慢传输型便秘小鼠结肠组织血管活性肠肽的影响

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补中益气汤对脾虚慢传输型便秘小鼠结肠组织血管活性肠肽的影响

徐嘉淦1石伟1叶影1石佳1高祥福2龙惠珍2

目的观察补中益气汤对脾虚慢传输型便秘（STC）小鼠结肠组织血管活性肠肽（VIP）的影响，探对其治疗脾虚慢传输便秘的作用机制。方法32只雄性昆明小鼠随机分为正常组（8只）和造模组（24只），造模组采用番泻叶+限制饮水+控制饮食的方法复制小鼠脾虚STC模型，模型复制成功后，将造模组小鼠随机分为模型组、中药组（补中益气汤）和西药组（莫沙必利），各组灌胃对应的药物，1天1次，共7天，末次给药后检测各组小鼠粪便含水率、肠道推进率及结肠组织VIP含量。结果中药组小鼠粪便含水率（55.55±10.90）%，肠道推进率（69.84±9.67）%，分别高于模型组的（45.50±13.04）%和（50.44±14.45）%（P均<0.05），中药组小鼠结肠组织VIP水平（156.73±11.41）ng/L，低于模型组的（245.12±12.43）ng/L（P<0.05）。西药组小鼠粪便含水率、肠道推进率分别为（52.83± 12.43）%，（65.15±13.56）%，与中药组比较差异无统计学意义（P>0.05），西药组小鼠结肠组织VIP水平（120.91±17.65）ng/L较中药组降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论补中益气汤能提高小鼠粪便含水率及肠道推动率，改善脾虚慢传输型便秘症状，其作用机制可能与降低结肠组织VIP水平有关。

小鼠；慢传输型便秘；补中益气汤；脾虚；血管活性肠肽

结肠慢传输型便秘（slow transit constipation，STC）是指因胃肠道动力减弱，肠内容物传输减慢而导致的便秘[1]。临床主要表现为排便困难，大便次数减少，便意减弱甚至消失。流行病学研究显示，STC约占功能性便秘的45.5%[2]，随着生活水平的提高，这一比例正逐年上升。便秘严重影响患者的生活质量，甚至会引发心脑血管意外，危及生命。本实验通过观察补中益气汤对STC模型小鼠肠道传输功能及血管活性肠肽（VIP）的影响，初步探讨补中益气汤治疗STC可能作用机制，为临床应用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 实验动物SPF级雄性昆明小鼠32只，体质量（20±2）g，由浙江中医药大学动物实验中心代购并饲养于该中心，实验动物合格证：SYXK（浙）2008-0115。各组小鼠常规适应性饲养7天。

1.2 药物与试剂补中益气汤（黄芪18g，党参15g，生白术、炙甘草各9g，升麻、柴胡、陈皮各6g，当归3g，由浙江省中医院中药房提供），制备成浓度为0.225g/mL的水煎液备用。枸橼酸莫沙必利片：江苏豪森药业股份有限公司，5mg/片，国药准字：19990315，配置成浓度为0.095mg/mL的混悬液。番泻叶煎液：取番泻叶500g（由浙江省中医院中药房提供）加入5L沸水中浸泡10min后，过滤，取滤液，使用旋转蒸发皿将其浓缩成1g/mL的溶液，装入瓶内，备用。活性碳灌胃液：取阿拉伯树胶100g（天津市登科化学试剂有限公司），加入800mL水，煮沸直至溶液透明后，加入粉状活性炭50g（天津市北辰方正试剂厂）,再煮沸3次，待溶液冷却后加水定容到1000mL，备用；血管活性肠肽（VIP）试剂盒：上海信裕生物科技有限公司提供，产品货号xy-E12161。

1.3 仪器电子精密天平：北京赛多利斯天平有限公司；酶标仪：芬兰（Labsystems Multiskan MS）公司。

2 实验方法

2.1 分组与模型制备将32只雄性昆明小鼠按照完全随机设计原则分成正常组、模型组、西药组、中药组四组，每组8只，除正常组外余三组根据文献[3-4]的方法，采用番泻叶+限制饮水+控制饮食的方法复制小鼠脾虚STC模型。具体方法：造模第1～7天，按20g/（kg·d）灌胃番泻叶水煎液（1g/mL），同时自由饮水进食，造成脾虚模型，模型成功标志：小鼠活动减少，反应较慢，四肢乏力，消瘦拱背，被毛枯槁。第8天开始停止灌胃番泻叶水煎液，隔天喂食灭菌生大米4～8g，隔天饮水1次，每次饮水30min，共15天。

2.2 药物干预造模完成后，除正常组外，余三组仍以隔天喂食灭菌生大米4～8g，隔天饮水1次，每次饮水30min。同时根据小鼠体表面积换算成人等效剂量的方法[5]，中药组每天灌胃补中益气汤煎液9g/kg，西药组每天灌胃莫沙必利混悬液1.9mg/kg，正常组和模型组每天各灌胃生理盐水0.2mL/10g。各组每天给药1次，连续灌胃7天。

2.3 指标检测

2.3.1 粪便含水率末次给药结束后，收集各组小鼠粪便各12颗，托盘电子分析天平称重，记为湿重，然后置于80℃电热恒温培养箱中24h后再称重，记为干重。粪便含水率=（湿重-干重）/湿重×100%。

2.3.2 肠道推进率末次给药前，各组小鼠禁食不禁水14h，给药后，按0.2mL/20g的剂量灌胃活性炭灌胃液，立刻计时，30min后，用颈椎脱臼法处死小鼠，迅速打开腹腔，仔细分离小鼠肠系膜，剪取上自幽门、下至回盲部的小肠管，置于托盘上，测量小肠总长度以及活性炭推动的距离，计算小肠推动率。小肠推动率=活性炭推动的距离/小肠总长度×100%

2.3.3 结肠VIP水平测量小鼠小肠长度及炭末推进的距离后，迅速切取结肠中段肠管3cm，称重，用预冷的生理盐水进行清洗，冲去肠道内容物，然后使用玻璃匀浆器，采用手工匀浆的方式制作组织匀浆，然后用离心机以2000r/min的转速离心15min后，取上清冻存于-80℃，留以待测。应用酶联免疫吸附试验（Elisa）的方法检测VIP水平。

2.4 统计学方法应用SPSS20.0软件进行统计分析，使用均数±标准差表示定量资料，使用t检验进行两样本间均数的比较；采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行多样本均数比较，当方差齐时用LSD法，不齐时选用Dunnett's T3检验。P＜0.05时差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 补中益气汤对小鼠粪便含水率的影响与正常组相比，模型组小鼠粪便含水率下降，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，中药组粪便含水率升高，差异有统计学意义（P<0.05），西药组虽也有所升高，但差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3.2 补中益气汤对小鼠肠道推进率的影响与正常组比较，模型组小鼠肠道推动率下降，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，各药物干预组肠道推动率有上升，且差异有统计学意义（P<0.05）；中药组较西药组肠推动率有所升高，但差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 各组小鼠粪便含水率及肠道推进率比较

表1 各组小鼠粪便含水率及肠道推进率比较

注：与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05

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3.3 补中益气汤对小鼠结肠组织VIP水平的影响

与正常组比较，模型组小鼠结肠VIP浓度升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，各药物干预组小鼠结肠VIP浓度均有降低，差异有统计学意义（P<0.05）；西药组较中药组VIP浓度下降明显，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 各组小鼠结肠VIP含量

表2 各组小鼠结肠VIP含量

注：与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；与中药组比较，#P<0.05；VIP：血管活性肠肽

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4 讨论

STC为临床常见病，其病情顽固，治疗困难，目前病因尚不明确，临床上并无针对STC的特效药，现多采用泻剂或促动力药对症处理，疗效欠佳，且副作用多。

STC属中医“便秘”范畴，基本病机为热结、寒凝、气滞、气血阴阳亏虚等，导致大肠传导失司发为便秘[6]。临床上，STC多表现为排便困难、便意减弱或消失，且常常伴有纳差乏力、神疲气短等症状，与中医脾气虚关系密切。赵蕾等[7]研究发现慢性功能性便秘人群中，以气虚型（70.6%）最多见，显示脾气虚在慢性便秘发病中起着重要的作用。

补中益气汤出自李东垣《内外伤辨惑论·卷中·饮食劳倦论》，原方由黄芪、人参、白术、升麻、柴胡、陈皮、当归、炙甘草等八味中药构成，为补气升阳，甘温除热的代表方。补中益气汤具有双向调节作用，能促进或抑制肠道蠕动，恢复肠道功能[8]。何云贵[9]运用补中益气汤治疗慢性便秘150例，结果显示治疗组总有效率为96.6%，疗效明显优于莫沙必利组（68%）。另有学者[10]认为，补中益气汤具有补气通便之效，运用补中益气汤治疗结肠慢传输型便秘，并与西药组（西沙比利）进行比较，显示中药组有效率高于西药组，差异有统计学意义（P<0.05）。

血管活性肠肽（VIP）是肠神经系统中主要的抑制性递质之一，能够调节肠道平滑肌的舒张，促进胃肠道腺体分泌，抑制肠道蠕动。动物实验研究[11]发现，慢性便秘模型组大鼠结肠组织VIP表达高于正常组，差异有统计学意义（P<0.05），提示VIP的分布异常可能与慢性便秘发病有关。

本研究显示，补中益气汤能够提高STC模型小鼠粪便含水率及肠道推动率，从而改善便秘症状，同时降低肠抑制递质VIP的水平。补中益气汤改善脾虚型慢传输便秘的症状的作用机制可能与降低结肠VIP水平有关。

［1］Frattini JC，Nogueras JJ.Slow transit constipation:a review of a colonic functional disorder［J］.Clin Colon Rectal Surg，2008，21：146-152.

［2］杨向东，贺百林，贾英田.慢传输型便秘机理的研究近况［J］.结直肠肛门外科，2011，17（04）：264-267.

［3］邹颖，郑学宝，戴世学，等.小鼠脾虚便秘模型的建立［J］.北京中医药，2009，28（01）：60-62.

［4］夏旭婷，樊俊阳，王碧玉，等.脾虚证慢传输型便秘小鼠模型构建方法的比较研究［J］.湖南中医药大学学报，2014，34（12）：4-7+81.

［5］赵伟，孙国志.不同种实验动物间用药量换算［J］.畜牧兽医科技信息，2010，05：52-53.

［6］吴勉华，王新月.中医内科学［M］.北京：中国中医药出版社，2012：237.

［7］赵蕾，廖秀军，杨关根，等.慢性功能性便秘基本证型分布特点及相关因素分析［J］.中国中西医结合杂志，2014，34（10）：1173-1177.

［8］李岩，吴春明，李雪，孙宁.补中益气汤对小鼠胃肠运动双向调节作用和抗炎作用的研究［J］.医药论坛杂志，2011，32（22）：18-19+22.

［9］何云贵.补中益气汤化裁方治疗习惯性便秘150例［J］.光明中医，2010，25（06）：975-976.

［10］宋卫国.补中益气汤加减治疗结肠慢传输型便秘的临床观察［J］.实用中西医结合临床，2010，10（05）：56-57..

［11］杜丽娟，唐学贵，吴至久，李敏.VIP在慢性便秘大鼠结肠肌间神经丛中的表达和意义［J］.医学理论与实践，2011，24（15）：1755-1756.

（收稿：2016-08-16修回：2016-10-09）

Effects of Buzhongyiqi Decoction on Vasoactive Intestinal Peptide in Colonic Tissue in Slow Transit Con－stipation Mice with Spleen Deficiency

XU Jiagan1,SHI Wei1,YE Ying1,SHI Jia1,GAO Xiangfu2,LONG Huizhen21 The First Clinical Medical College,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China;2 Department of Internal Chinese Medicine,the First Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou(310000),China

ObjectiveTo investigate the effects of buzhongyiqi decoction on vasoactive intestinal peptide（VIP）in slow transit constipation（STC）mice with spleen deficiency,in an attempt to explore the underlying mechanism.MethodsThirty-two male Kunming mice were randomly divided into normal group（n=8）and model group（n= 24）.The model group was copied to STC model with spleen deficiency by folium sennae+limited water+control diet. Then,the model group were randomly divided into model control group,Chinese herb group（buzhongyiqi decoction）and western medicine group（mosapride）.Each group was treated one time a day by gavage with its corresponding drug,the course lasted for 7d.After the last treatment,the moisture content of feces,intestinal propulsion rates and the content of VIP in colonic tissue were detected.ResultsMoisture content of feces and intestinal propulsion rate in Chinese herb group were（55.5±10.90）%and（69.84±9.67）%,respectively,which were higher than those in model control group[（45.50±13.04）%and（50.44±14.45）%,P<0.05].VIP level of Chinese herb group was lower than that of model control group[（156.73±11.41）ng/L vs（245.12±12.43）ng/L,P<0.05].The moisture content of feces and Intestinal propulsion rate in western medicine group were（52.83±12.43）%and（65.15±13.56）%; no significant difference was found between Chinese herb group and western medicine group（P>0.05）.The VIP level of western medicine group[（120.91±17.65）ng/L]was significantly lower than that of Chinese herb group（P< 0.05）.ConclusionBuzhongyiqi decoction can increase the moisture content of feces and intestinal propulsion rate and improve symptoms of STC with spleen deficiency.The underlying mechanism might be related to the decreaseof VIP in colonic tissue.

mice;slow transit constipation;buzhongyiqi decoction;spleen deficiency;vasoactive intestinal peptide

浙江省大学生科技创新活动计划（新苗人才计划）项目（No.2015R410027）

1浙江中医药大学第一临床医学院（杭州310053）；2浙江中医药大学附属第一医院中医内科（杭州310000）

徐嘉淦，Tel：15700067082；E-mail：574800732@qq.com