棉花分子育种研究进展

邓琳+余小刚+姜朵+刘倩+汪保华��

摘要：棉花分子育种是目前棉花育种研究的重要手段。本文从分子标记辅助育种和转基因育种两个方面，概述近几年国内外棉花分子育种的研究进展，总结棉花分子育种目前遇到的问题，以期为今后棉花分子育种提供参考。

关键词：棉花；分子标记；转基因；育种

中图分类号：S562.03文献标识号：A文章编号：1001-4942（2017）05-0144-07

Research Progress of Cotton Molecular Breeding

Deng Lin，Yu Xiaogang，Jiang Duo，Liu Qian，Wang Baohua

（School of Life Sciences，Nantong University，Nantong 226019，China）

AbstractMolecular breeding is an important means in cotton breeding research at present. In this paper，the progress and problems of cotton molecular breeding at home and abroad in recent years were summarized from aspects of molecular marker-assisted breeding and transgenic breeding，so as to provide references for future cotton molecular breeding.

KeywordsCotton；Molecular marker；Transgene；Breeding

棉花是我國重要的经济作物，2015年种植面积达到379.9×104 hm2，总产量为560.5×104 t。除了主产品棉纤维外，副产品的经济效益也日益被发掘，棉秆和棉籽等都可以作为生物质能源原料被利用[1]。然而，传统的棉花育种方式已不能充分满足工业生产迅速发展的需求。棉花分子育种由于能明显缩短育种周期、可定向选择优质基因等优点，已经逐步成为棉花育种的重要方式，已高效实现棉花性状中的产量、棉纤维品质、对生物及非生物胁迫的抗性（抗病抗逆性）、种子含油量、纤维颜色、光合效率等性状的改良。本文拟从分子标记辅助育种、转基因育种两个方面概述近几年来国内外棉花分子育种的研究进展、棉花分子育种目前的成就及面临的困难，提出我们对于该问题的思考，以期为棉花分子育种提供参考。

1棉花分子标记辅助育种与转基因技术的基本原理

1.1分子标记的种类及分子标记辅助育种的原理

经过多年的发展，分子标记主要包括以下四类。第一类以DNA-DNA杂交技术为基础，如限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）、数目可变串联重复序列多态性（variable number of tandem repeat，VNTR）。第二类以PCR技术为基础，如随机扩增片段长度多态性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）、简单重复序列（simple sequence repeat，SSR）、序列特异性扩增片段（sequence-characterized amplified region，SCAR）、相关序列扩增多态性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）、靶位区域扩增多态性（target region amplified polymorphism，TRAP）、扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism，AFLP）。第三类以DNA单链、单核苷酸多态性为基础，如单链物质多态性（single strand conformation polymorphism，SSCP）、单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）、衍生的酶切扩增多态性（derived cleaved amplified polymorphic sequence，dCAPS）。第四类原位杂交技术（in situ hybridization，ISH），包括荧光原位杂交（fluorecence in situ hybridization，FISH）和基因组原位杂交（genome in situ hybridization，GISH）等[2]。分子标记辅助选择是在作物改良过程中，利用分子标记选择目的性状基因型的一种辅助手段。它为了减少连锁累赘，获得带有期望性状的个体，提高育种效率，而借助与目的基因呈共分离关系或紧密连锁的分子标记筛选选择个体，包括目标区域以及全基因组两个部分。它是在分子水平上对作物育种的直接应用，不受环境干扰，结果可靠。

1.2转基因技术的原理

转基因技术可以定向性地将优质基因导入棉花体内，由此获得生产成本低、经济效益高的转基因棉花。农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法是目前广泛用于棉花转基因技术的方法[3]。

1.2.1农杆菌转化法农杆菌大致分为四类，而能够应用于转化植物的只有两类，即带有Ti质粒的根癌农杆菌与带有Ri质粒的发根农杆菌。又因对于Ti质粒研究得较为透彻，且以下胚轴做受体的转化率极高，故根癌农杆菌最常用于棉花遗传转化[4]。根癌农杆菌的Ti质粒上有一段可以将目的基因插入的T-DNA区，借助农杆菌的侵染能力，经过一系列过程，便可将外源基因导入到受体中[5]。例如，NOS（nopaline synthase）反义基因通过农杆菌介导的转化和体细胞胚发生系统介导，经PCR反应和Southern杂交，检测到该基因的存在并且转基因植株并没有感染棉花曲叶病毒[6]。

1.2.2花粉管通道法花粉管通道法的基本原理是外源DNA能通过花粉管渗透，经过珠心进入胚囊，变成不具有细胞壁的合子或早期胚胎细胞。欧文氏菌对大白菜造成最具破坏性的疾病，借助花粉管通道法将aiiA基因导入大白菜中，建立软腐病抗性的aiiA基因转化系统，可以培育出有效的抗软腐病植株[7]。目前该方法已成功运用于棉花遗传转化，并得到耐盐变异体、双价转基因抗虫棉株系等优质品种[8]。

1.2.3基因枪法该法是利用基因枪在棉花受体中导入外源基因，即在动力系统的作用下，金属颗粒（金粒或钨粒）将DNA吸附在表面，然后在不需除去细胞壁和细胞膜的情况下以一定的速度射进植物细胞进入基因组，从而达到稳定转化的目的。马玲玲[9]对新疆自育海岛棉品种新海13号茎尖和新陆早33号胚性愈伤组织进行基因枪转化，建立了高效的遗传转化技术体系。

2棉花分子标记辅助育种的发展现状

近年来，分子标记辅助育种技术在棉花上的运用日渐成熟，特别是在遗传图谱构建和纤维品质、抗枯黄萎病、耐盐性、含油量、光合效率等性状方面均取得重大成就，这些将为以后的棉花分子育种提供信息支持。

2.1纤维品质

近年来，国内外在提高棉花产量方面硕果累累。但是先进的纺纱技术对棉花纤维品质提出了更高的要求。应用基于与优良纤维性状相关基因紧密连锁的分子标记进行辅助育种是改良纤维品质的有效途径。表1列出了近几年国内外在棉花纤维品质QTL的定位情况。

2.2抗枯黄萎病

枯黄萎病严重影响棉花产量，培育抗病品种是解决该问题的有效措施，也是棉花育种的重要目标。促进抗病性QTL的定位，实现棉花抗病分子育种，需开发出多态性分子标记。表2列出了近几年国内外棉花抗黄萎病QTL的定位情况。

.3耐盐性

我国现有盐渍土面积为3 470×104 hm2，且尚有1 733×104 hm2左右的潜在盐渍化土壤。这些盐碱地严重威胁我国主产棉区的环境，对棉花生产有一定影响[38]，因此，对耐盐相关的分子标记的开发很有必要。徐鹏等[39]利用陆地棉品种Miscott7913-83和苏棉12在不同盐胁迫下的基因表达获得3 232条差异表达基因，并利用生物信息学手段大规模地开发了SSR以及Indel等分子标记，提供了一套高效可行的快速开发陆地棉品种间多态性分子标记的分析方法。刘雅辉等[40]利用相关序列扩增多态性和群体分离法对棉花耐盐材料×敏盐材料组合的F2群体及26个耐、敏盐品种进行了分析和鉴定，筛选出了与棉花耐盐相关的分子标记。

2.4含油量

陆地棉棉仁的含油量与大豆相当，达25%～40%[41]，是植物油的重要来源。科研工作者的研究范围主要集中于抗逆性状、纤维品质以及产量性状，对棉仁含油量性状关注较少。赵文霞[41]从全国收集到507份陆地棉种质资源，以其组成的自然群体和双亲分离群体开展关联和连锁分析，获得6个油分含量QTLs，得到群体含油量性状具有很高遗传力和易受环境显著影响的结果，为后续QTL的精准定位和克隆提供了信息资源，也为高油育种提供了优良条件。

2.5光合效率

光合效率是影响棉花经济产量的主要因素，光合效率高能显著增加棉花产量。张建[42]利用渝棉1号和T586的重组近交系群体F2∶7家系，分析光合性状的QTL及其效应，檢测到48个光合性状QTL，对提高棉花产量具有重要意义。

3棉花转基因技术的发展现状

随着转基因技术的不断成熟，棉花在这方面的成果也在不断更新。近年来，转基因技术广泛应用于改良棉花的抗虫、抗病、抗逆性、抗除草剂和纤维品质等性状[43]。

3.1抗虫基因

苏云金芽孢杆菌的内毒素蛋白基因、蛋白酶抑制基因和植物外源凝集素类基因是广泛应用于棉花的抗虫基因[44]。苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因可用于构建具有抗虫作用的抗虫工程菌，通过拌种或叶面喷雾等方法可达到快捷、经济、高效地防治虫害的目的[45]。从苏云金杆菌（Bt）提取出的Cry1Fa蛋白基因有控制鳞翅目害虫的潜力，尤其是在玉米和棉花的转基因表达中[46]。纳米氧化铜（Cu-NPs）对转基因抗虫棉性状表达具有重要作用。CuO-NPs影响转基因棉和常规棉的生长、养分含量、吲哚乙酸（IAA）和脱落酸（ABA）浓度。纳米氧化铜提高了外源基因编码的Bt毒蛋白在叶片和根中的表达程度，对转基因棉花的抗虫性有积极意义[47]。申贵芳等[48]对2005—2014年山东省棉花转基因抗虫育种中间材料的纤维品质测试数据进行比较，并与我国其它产棉区数据进行比对，分析山东省棉花品质育种现状和存在的主要问题，对今后的棉花品质育种提出了方向。

3.2抗除草剂基因

棉田杂草严重影响棉花产量，而滥用杀虫剂不但会增加杂草对它的抗性，也会对棉花植株造成影响。在棉花植株中导入抗除草剂基因，会大大削弱除草剂对于作物的影响。抗草甘膦基因是我国成功用于棉花的抗除草剂基因。刘锡娟等[49]将抗草甘膦基因导入棉花中，得到有较强草甘膦抗性的转基因棉花植株。Puspito等[50]采用农杆菌介导的转化方法将两个Bt基因（Cry1Ac和Cry2A）和抗除草剂基因（CP4 EPSPS）转导进入一个当地的棉花品种VH 289，得到转基因植株。与非转基因品种相比，转基因品种表现出更好的抗性。

3.3抗病基因

病害是影响棉花产量的重要因素之一，可导致棉花欠收甚至绝收，其中最为严重的就是黄萎病，目前尚无法根治[51]。近年来，大量科研人员对此病进行了研究。娄善伟等[52]通过田间小区试验，研究不同包衣处理防治黄萎病的效果。结果表明：在不同包衣处理后，出苗时间缩短，出苗率提高，其中枯草芽孢杆菌包衣处理结果最好。一种新型的抗菌蛋白（HCM1）使转基因棉花产生微观的过敏反应（micro-HR）、活性氧（ROS）爆裂，并导致在响应非生物胁迫相关的基因激活，表明转基因棉花保护宿主免受病原感染[53]。

3.4纤维品质改良

棉花的强度、长度、马克隆值等都是评价棉花纤维品质的重要指标[54]。张海平等[55]将木醋杆菌纤维素合酶基因acsA和acsB导入棕色棉G007和白色棉X003中，转基因后代的棉纤维品质有显著提高。张震林等[56]通过花粉管通道转基因技术，在高产棉花品种苏棉16号中导入兔角蛋白基因，成熟植株纤维的品质得到部分改良，比强度有较明显提升。李飞飞等[57]通过农杆菌介导法在陆地棉品系 WC中导入蚕丝心蛋白基因，检测结果表明，目的基因已整合到棉花基因组，并且能够稳定遗传和表达，从而获得纤维品质改良的棉花株系。Han等[58]的研究表明通过转基因方法来调节内源性激素水平，可以提高棉花纤维品质。从陆地棉中克隆出一个假定存在的PSK基因（GhPSK），能够在迅速增强伸长的纤维细胞（5～20天开花后）中特异表达。GhPSK基因的过度表达增加内源性 PSK-α的水平和促进棉纤维细胞的伸长，产生更长和更细的纤维。从生理学上分析表明，GhPSK通过K+外流影响纤维的进一步发育。数字基因表达（DGE）进一步分析证明PSK信号可能调节呼吸链电子传递活性氧，从而影响棉纤维的品质。

3.5抗逆基因

由于土壤、水源的客观存在性，所以要想改变植株本身对环境的适应能力，就需要改变其选择性的基因，借此提高棉花对环境的抗性。目前取得研究进展的抗性基因包括抗旱基因、耐盐碱基因等。朱超等[59]利用花粉管通道法，获得了转Δ1-二氢吡咯-5-羧酸合成酶基因（MvP5CS）高代棉花材料，并在田间干旱胁迫下比较了转MvP5CS基因的T6代3个株系植株与受体棉花材料 D5主要生理生化指标和农艺性状的差异，结果表明：转基因棉花比非转基因棉花植株更有利于在干旱胁迫条件下生长，且在单铃重、籽棉产量、皮棉产量、衣分等方面更具优势，纤维长度和强度有所增加，马克隆值降低，品质得到改善。为获得耐盐性高的棉花植株，蒋玉容等[60]通过花粉管通道法在中棉所35中导入山菠菜甜菜碱醛（BADH）基因，与对照相比，其T2代种子在0.6% NaCl盐池的发芽结果表明，转化植株的耐盐性有显著增加。

4分子标记辅助育种存在的问题

近十几年来，分子标记辅助育种虽在棉花上得到较大发展，但多数仅关注于标记鉴定、定位、作图等基础环节。通过分子标记辅助育种提高育种效率、大规模培育优良品种的技术还未成熟，其中还存在大量问题[61]。

4.1标记鉴定与辅助育种两个重要环节脱节

大多数科研工作者只关注重要标记的鉴定，而忽视了标记辅助育种。基于这个问题，若起始亲本选用优良品种，那么一方面标记的可行性能得到保障，另一方面可以进一步为培育优良品系提供种质资源[62]。

4.2标记的选择和鉴定技术亟待提高

现有的标记辅助选择体系的有效范围仅仅在于单个或少数几个基因，但对于多基因控制的数量性状，收效甚微。另外，分子标记鉴定技术的操作依旧不够精简，实验成本高且费时[63]。

4.3遗传图谱饱和度有待提高

为了解决很多类型的分子标记在陆地棉中多态性很低的问题，所以需要大量筛选与目的基因紧密连锁的分子标记[64]。基于海陆杂交群体和陆陆杂交群体构建的较高密度遗传连锁图谱，仍然不能满足相关性状精细定位进行图位克隆和分子标记辅助育种需要的现状[65]，因此需要开发更多的分子标记，整合基于不同群体构建的遗传图谱，或采取多元杂交配制群体等方法提高遗传图谱饱和度，从而提高QTL定位的准确度。马和欢等[66]在最大限度地消除了遗传背景干扰的条件下，利用与其紧密连锁的分子标记精确地解析了Chr.7 染色体纤维品质 QTLs 的遗传效应，是值得借鉴的一个方向。

5转基因技术存在的问题

转基因育种与传统育种相比，以其大大缩短固有生长周期的优势而被广泛运用。导入的优质基因使棉花具有了各种抵抗不良环境的能力。但由于技术本身尚不完善，转基因育种目前仍面临着许多亟待解决的问题。

5.1基因转化率低

在各种物理、生化因素的影响下，基因转化效率仍处于较低水平。在农杆菌介导海岛棉遗传转化实验中，尽管已选用最佳的处理方法，但是效率依旧很低，达不到预期效果。周梦岩等[4]为提高实验杆菌转化遗传因子的效率，分别从浸染时间、菌液浓度、共培养方法和预培养时间等方面进行了研究。

5.2对环境产生的不良影响

导入的外源基因具有不稳定性，因而转基因作物可能会对环境产生无法预知的影响，这些影响大致包括：转基因作物本身遗传性质不稳定，可能演变为其它物种；基因逃逸影响周围物种，且大量的实验都集中研究转基因作物和它们的野生近缘物种因转基因逃逸而发生基因流的概率。通过分析基因流的不同步骤，表明杂种虽长得很好，但种子比它们的野生親本少，且随着世代的增加而下降[43]；可能对非目标生物造成危害[67]。

5.3转基因产品的安全问题

转基因作物的安全性也影响到产物的进一步推广。2014年1月，名为“Genetic Basis of Unintended Effects in Modified Plants”的国际会议在加拿大渥太华举行。会议进一步研究植物修饰后的意外效应，并讨论如何提高转基因作物安全性[68]。由此可见，转基因安全问题不容忽视。杜红方等[69]从转基因植物的外源基因和蛋白质是否会被降解或发生转移，及抗除草剂植株的除草剂残留等几个方面，分析了转基因作物饲养动物的安全性。

6思考与展望

随着基因组测序等多种技术的突破，现代作物分子育种技术已逐步成为国际上作物育种的主流。与传统育种相比，分子育种能利用现代分子技术打破生殖隔离，缩短育种周期，实现基因的直接选择和有效聚合，在提高作物品质和产量等方面都有显著成效。然而，随着理论体系的不断更新和完善，分子育种技术还有巨大潜力。对于转基因育种来说，有限的优质基因制约了新品种作物研究的进程，新型优质基因亟待挖掘；目前的基因转化方法效率较低，未来转基因技术的发展有赖于改良现有转化方法的工艺流程，以期获得更高的转化效率；对于转基因产品的安全检测也应进一步加强，借以消除大众对转基因产品的疑虑，从而使转基因技术得到更好的发展。针对分子标记辅助育种，我们可以利用DNA芯片及相应的计算机分析软件等实现标记筛选和鉴定的自动化、规模化；另一方面我们还可以加强引进、发掘、保存与利用与标记相关的细胞遗传学材料，进一步构建相关性状分子标记和遗传连锁群体。相信在不久的将来，和常规育种结合的分子育种可最大限度地为作物育种做出贡献，推动现代农业的发展。

参考文献：

[1]

張蓓蓓，耿维，崔建宇，等. 中国棉花副产品作为生物质能源利用的潜力评估[J]. 棉花学报，2016，28（4）：384-391.

[2]赵兴华，渠云芳，黄晋玲. 分子标记技术在棉花育种中的应用[J]. 山西农业科学，2011，39（6）：611-615.

[3]张树伟，马燕斌，孙璇，等. 棉花遗传育种现状及展望[J]. 山西农业科学，2016，44（1）：119-122.

[4]周梦岩，苏豫梅，李柯，等. 农杆菌介导海岛棉遗传转化影响因子的研究[J]. 农业与技术，2016，36（1）：12-14.

[5]王彦霞，王省芬，马峙英. 棉花转基因技术的研究及应用[J]. 华北农学报，2006，21（S1）：41-45.

[6]Sohrab S S，Kamal M A，Ilah A，et al. Development of cotton leaf curl virus resistant transgenic cotton using antisense βC1 gene[J]. Saudi Journal of Biological Sciences，2016，23（3）：358-362.

[7]Han L W，Ge Y，Yao L，et al. Transformation of soft rot resistant aiia gene into Chinese cabbage （Brassica rapa ssp.pekinensis） by the pollen-tube pathway[J]. International Journal of Agriculture and Biology，2015，17（3）：668-670.

[8]王永锋，栾雨时，高晓蓉. 花粉管通道法在植物转基因中的研究与应用[J]. 东北农业大学学报，2004，35（6）：764-768.

[9]马玲玲. 海岛棉茎尖的基因枪转化体系的建立[D]. 石河子：石河子大学，2013.

[10]张震. 陆地棉SNP遗传图谱构建及产量纤维品质性状的QTL定位[D]. 北京：中国农业科学院，2015.

[11]Lan M J，Yang Z M，Shi Y Z，et al. Assessment of substitution lines and identification of QTL related to fiber yield and quality traits in BC4F2 and BC4F3 populations from G.hirsutum×G.barbadense[J]. China Agriculture Science，2011，44（15）：3086-3097.

[12]梁清志，荣义华，付永红，等. 陆地棉遗传连锁图谱构建和纤维品质性状QTL分析[C]//中国棉花学会2012年年会暨第八次代表大会论文集.安阳：棉花学报杂志社，2012.

[13]Tan Z Y，Fang X M，Tang S Y，et al. Genetic map and QTL controlling fiber quality traits in upland cotton （Gossypium hirsutum L.）[J]. Euphytica，2015，203（3）：615-628.

[14]张兴居. 棉花新种质鲁HB22黄萎病抗性、产量和纤维品质的分子标记[D]. 泰安：山东农业大学，2011.

[15]Lacape J M，Llewellyn D，Jacobs J，et al. Meta-analysis of cotton fiber quality QTLs across diverse environments in a Gossypium hirsutum×G. barbadense RIL population[J]. BMC Plant Biol.，2010，10（1）：107-113.

[16]Zhang Z S，Rong J，Waghmare V N，et al. QTL alleles for improved fiber quality from a wild Hawaiian cotton，Gossypium tomentosum[J]. Theor. Appl. Genet.，2011，123（7）：1075-1088.

[17]Yu J W，Zhang K，Li S Y，et al. Mapping quantitative trait loci for lint yield and fiber quality across environments in a Gossypium hirsutum × Gossypium barbadense backcross inbred line population[J]. Theor. Appl. Genet.，2013，126（1）：275-287.

[18]Fang D D，Jenkins J N，Deng D D，et al. Quantitative trait loci analysis of fiber quality traits using a random-mated recombinant inbred population in Upland cotton （Gossypium hirsutum L.）[J]. BMC Genomics，2014，15（1）：1-15.

[19]Nie X，Tu J，Wang B，et al. A BIL population derived from G. hirsutum and G. barbadense provides a resource for cotton genetics and breeding[J]. PLoS One，2015，10（10）：e0141064.

[20]Zhang Z，Li J，Muhammad J，et al. High resolution consensus mapping of quantitative trait loci for fiber strength，length and micronaire on chromosome 25 of the Upland cotton （Gossypium hirsutum L.）[J]. PLoS One，2015，10（8）：0135430.

[21]王志伟，魏利民，谢晓美，等. 利用AFLP构建棉花遗传图谱及纤维品质性状QTL分析[J]. 江苏农业科学，2015，43（7）：71-74.

[22]孔凡金，王宗文，韩宗福，等. 陆地棉遗传图谱构建与优异纤维品质性状QTL定位[C]//山东省棉花学会第六次代表大会暨学术讨论会论文汇编.2013：78.

[23]伊海法. 棉花产量和纤维品质性状QTL定位[D]. 泰安：山东农业大学，2014.

[24]孔祥瑞. 棉花黄萎病抗性的分子标记研究[D]. 北京：中国农业科学院，2011.

[25]吴翠翠，简桂良，王安乐，等. 棉花抗黄萎病QTL初步定位[J]. 分子植物育种，2010，8（4）：680-686.

[26]石玉真，卢全伟，李文坦，等. 棉花陆海种间分子连锁图谱构建与抗黄萎病性状QTL定位[C]//中国棉花学会2014年年会论文汇编.中国棉花杂志社，2014.

[27]刘剑光，吴巧娟，赵君，等. 陆地棉抗黄萎病QTL的定位[J]. 江苏农业学报，2014，30（6）：1235-1239.

[28]Zhang J，Yu J ，Pei W，et al. Genetic analysis of Verticillium wilt resistance in a backcross inbred line population and a meta-analysis of quantitative trait loci for disease resistance in cotton[J]. BMC Genomics，2015，16（1）：1-13.

[29]Ren G，Li X，Lin Z. Mining，genetic mapping and expression analysis of EST-derived resistance gene homologs （RGHs） in cotton[J]. BMC Plant Biol.，2014，14（1）：1-9.

[30]Guo X H，Cai C P，Yuan D D，et al. Development and identification of Verticillium wilt-resistant upland cotton accessions by pyramiding QTL related to resistance[J]. Journal of Integrative Agriculture，2016，15（3）：512-520.

[31]赵君，刘剑光，吴巧娟，等. 利用染色体片段代换系定位棉花抗黄萎病QTL[J]. 棉花学报，2014，26（6）：499-505.

[32]张仁善. SSR分子标记辅助聚合陆地棉抗黄萎病QTL[D]. 南京：南京农业大学，2010.

[33]李丹. 棉花黄萎病抗性评价指标与抗病相关基因引物分析[D]. 乌鲁木齐：新疆农业大学，2014.

[34]宁志怨. 爱字棉代表品种Prema的优质、黄萎病抗性QTL的标记定位[D]. 南京：南京农业大学，2012.

[35]徐乐. 多环境下陆地棉产量、纤维品质、抗黄萎病性的评价及QTL定位[D]. 武汉：华中农业大学，2012.

[36]郭志军. 陆海高代回交群体黄萎病抗性QTL定位和陆地棉相关农艺性状关联分析[D].北京：中国农业科学院，2014.

[37]马俊召. 鲁棉研15重组自交系产量、纤维品质及黄萎病抗性QTL定位研究[D]. 武汉：华中农业大学，2012.

[38]叶武威，王俊娟，宋丽艳，等. 棉花耐盐基因表达谱与耐盐相关基因的克隆研究[C]//中国棉花学会2010年年会论文汇编.中国棉花杂志社，2010.

[39]徐鹏，蔡继鸿，杨阳，等. 陆地棉耐盐相关EST-SSR以及EST-InDel分子标记的开发[J]. 棉花学报，2016，28（1）：65-74.

[40]刘雅辉，王秀萍，鲁雪林，等.棉花耐盐相关序列扩增多态性（SRAP）分子标记筛选[J].江苏农业学报，2015，31（3）：484-488.

[41]赵文霞. 陆地棉棉仁含油量的关联与连锁分析[D]. 武汉：华中农业大学，2015.

[42]張建. 陆地棉遗传图谱标记加密与衣分、光合性状QTL定位[D]. 重庆：西南大学，2012.

[43]李常凤，郑曙峰. 转基因棉花研究与应用进展[C]//安徽省农学会、安徽省作物学会2014联合学术年会.安徽农学通报杂志社，2015.

[44]赵丹，吴琼，沈丹，等. 我国转基因棉花研究与展望[J]. 辽宁农业科学，2013（1）：41-44.

[45]孙良武，梁平彦，田颖川，等. 苏云金芽孢杆菌δ-内毒素基因穿梭质粒的构建[J]. 微生物学报，1996，36（1）：69-72.

[46]Velez A M，Vellichirammal N N，Jurat-Fuentes J L， et al. Cry1F resistance among lepidopteran pests：a model for improved resistance management [J]. Current Opinion in Insect Science，2016，15：116-124.

[47]Van N L，Ma C X，Shang J Y，et al. Effects of CuO nanoparticles on insecticidal activity and phytotoxicity in conventional and transgenic cotton[J]. Chemosphere，2015，144：661-670.

[48]申贵芳，张晓洁，韩宗福，等. 棉花转基因抗虫育种基础材料纤维品质测试数据分析[J]. 山东农业科学，2015，47（10）：22-24.

[49]刘锡娟，刘昱辉，王志兴，等. 转5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）基因抗草甘膦烟草和棉花的获得[J]. 农业生物技术学报，2007，15（6）：958-963.

[50]Puspito A N，Rao A Q，Hafeez M N，et al. Transformation and evaluation of Cry1Ac+Cry2A and GT Gene in Gossypium hirsutum L.[J]. Frontiers in Plant Science，2015，6：943.

[51]高灵路，王长彪，汪保华. 棉花抗黄萎病分子育种的现状、问题与展望[J]. 安徽农业科学，2011，39（19）：11520-11522，11525.

[52]娄善伟，张鹏忠，王大光，等. 枯草芽孢杆菌种子包衣对棉花黄萎病抑制作用的研究[J]. 中国棉花，2016，43（6）：28-30.

[53]Zhang Z Y，Zhao J，Ding L Y，et al. Constitutive expression of a novel antimicrobial protein，Hcm1，confers resistance to both Verticillium and Fusarium wilts in cotton[J]. Scientific Reports，2016，6：20773.

[54]范森淼. 棉花纤维素合成与纤维品质的关系研究[D]. 开封：河南大学，2013.

[55]张海平，王学德，邵明彦，等. 外源纤维素合酶基因对棉纤维品质的改良作用[J]. 棉花学报，2008，20（2）：110-115.

[56]张震林，刘正銮，周宝良，等. 转兔角蛋白基因改良棉纤维品质研究[J]. 棉花学报，2004，16（2）：72-76.

[57]李飞飞，吴慎杰，吕芬妮，等. 转蚕丝心蛋白基因改良了棉花纤维品质[J]. 科学通报，2009，54（4）：457-462.

[58]Han J，Tan J F，Tu L L，et al. A peptide hormone gene，GhPSK promotes fibre elongation and contributes to longer and finercotton fibre[J]. Plant Biotechnology Journal，2014，12（7）：861-871.

[59]朱超，杨云尧，游朝，等. 转MvP5CS基因棉花抗旱性及其育种价值评价[J]. 干旱区研究，2016，33（1）：131-137.

[60]蒋玉蓉，袁俊杰，陈国林，等. 转甜菜碱醛脱氢酶（BADH）基因棉花的获得及其耐盐性鉴定[J]. 分子植物育种，2015，13（1）：125-131.

[61]裴冬丽. 分子标记在作物育种中的应用[J]. 商丘师范学院学报，2005，21（2）：139-142.

[62]郝晓华，郝晓玲. 分子标记在作物育种中应用价值研究[J]. 农业技术与装备，2015（8）：17-19.

[63]梁清志，荣义华，付永红. 棉花分子标记辅助育种研究进展[C]//中国棉花学会2011年年会论文汇编. 中国棉花杂志社，2011.

[64]王启会，李怀芹，朱新宇，等. 棉花数量性状基因定位研究进展[J]. 生命科学，2011，23（5）：511-518.

[65]Liu Y B，Wei W，Ma K P，et al. Consequences of gene flow between oilseed rape （Brassica napus） and its relatives[J]. Plant Science，2013，211：42-51.

[66]马和欢，王芙蓉，刘国栋，等. 陆地棉遗传背景下海岛棉 Chromsome 7片段纤维品质性状的QTL定位[J]. 山东农业科学，2013，45（10）：7-11.

[67]Khan M S，Khan M A，Ahmad D. Assessing utilization and environmental risks of important genes in plant abiotic stress tolerance[J]. Frontiers in Plant Science，2016，7：792.

[68]Ladics G S，Bartholomaeus A，Bregitzer P，et al. Genetic basis and detection of unintended effects in genetically modified crop plants[J]. Transgenic Research，2015，24（4）：587-603.

[69]杜红方，武书庚，齊广海. 转基因植物作为饲料的安全性评价研究[J]. 中国畜牧杂志，2006，42（19）：51-53.