前列腺癌与前列腺增生合并前列腺炎患者MMPs表达的比较研究

毛祖杰 刘锋 张琦 祁小龙 魏海彬 张大宏

前列腺癌与前列腺增生合并前列腺炎患者MMPs表达的比较研究

毛祖杰 刘锋 张琦 祁小龙 魏海彬 张大宏

目的 比较前列腺癌（PCa）与前列腺增生（BPH）合并前列腺炎患者金属基质蛋白酶（MMPs）表达。方法 选择确诊为PCa患者28例（PCa组）、BPH合并前列腺炎患者30例（BPH组）。采用ELISA法检测血清MMP-2、MMP-9和MMP-14水平，采用放免法检测血清前列腺特异性抗原（PSA）水平，采用免疫组化法对病变组织中MMP-2、MMP-9、MMP-14的阳性表达率进行判定；比较两组患者MMPs及PSA。 结果 PCa组患者血清MMP-2、MMP-9、MMP-14和PSA水平均高于BPH组（均P＜0.05）。PCa组患者病变组织中MMP-2、MMP-9和MMP-14的阳性表达率为50.0%、53.6%和42.9%，分别高于BPH组的20.0%、10.0%和16.7%（均P＜0.05）。 结论 PCa与BPH合并前列腺炎患者MMPs表达明显不同，有助于对两者作出鉴别诊断；MMPs家族在PCa中表达的变化可为发病机制的研究提供参考。

前列腺癌 前列腺增生 前列腺炎 金属基质蛋白酶

前列腺增生（BPH）是中老年男性人群的高发病，其常伴有慢性前列腺炎，临床表现为尿频、尿急、夜尿增多、排尿困难、尿道不适及疼痛感，严重影响其正常生活[1-2]。前列腺癌（PCa）是发生在前列腺部位的癌性病变，近年来流行病学调查显示中国男性PCa发病率逐年增长，2008年男性PCa粗发病率为3.33%[3]。金属基质蛋白酶（MMPs）是一种水解酶类，可降解机体内各种细胞外基质成分并破坏其基质膜。目前有体内外实验证实炎症细胞、肿瘤细胞的浸润及转移与产生MMPs的能力具有相关性[4-5]，然而关于MMPs在PCa与BPH合并前列腺炎患者中表达的比较研究较少。因此，笔者采集PCa与BPH合并前列腺炎患者的血清样本，对MMPs及相关免疫因子含量进行检测与比较，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2014年11月至2015年11月本院确诊为PCa患者28例（PCa组）、BPH合并前列腺炎患者（BPH组）30例。PCa组患者年龄为49～78（64.2±11.5）岁，均行PCa根治切除术；BPH组患者年龄为44～69（59.8± 12.4）岁，均行前列腺电切手术治疗。两组患者平均年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。患有其他非前列腺部位癌变，心、肝、肾、脑等重要脏器病变，免疫性疾病者均不纳入本研究。本研究取得所有患者及其家属的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 （1）血清样本采集：术前1d晨起空腹抽取肘静脉 5ml，置于室温下1h，3 500r/min离心10min，取上清液即血清样本，置于－20℃保存待测。（2）组织标本采集：行病灶部位的组织切除术，取1.5cm× 0.5cm×0.5cm的病变组织标本，用4%的中性甲醛固定液进行固定并保存待测。

1.2.2 检测方法 （1）血清样本检测：应用ELISA法对血清中MMP－14、MMP－9及MMP－2的含量进行检测[6]，严格按照ELISA试剂盒说明书进行操作；采用放免法（RIA）[7]对两组患者血清中前列腺特异性抗原（PSA）进行检测。（2）组织样本检测：应用免疫组化法对甲醛固定的组织样本进行组织内MMP－2、MMP－9及MMP－14的检测，首先将组织标本脱水、包埋，每个样本连续切成3μm厚的切片，切3份进行MMP－2、MMP－9及MMP－14的免疫标记，使用鼠抗人单克隆抗体即用型试剂盒，按照说明书进行免疫组化的染色操作。

1.2.3 评价方法 血清PSA的正常参考范围为0～4μg/L[8]。免疫组化的结果根据显微镜高倍视野（×200）下对阳性细胞着色程度进行判定[9]：不着色为0分，浅棕色为1分，深棕色为2分；着色细胞数＜5%为0分，5%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%为3分；将染色分值与着色细胞数分值相乘，最后得分0分为（－），1分为（+），2～3分为（++），4～6分为（+++）；其中（++）、（+++）表示阳性，（－）、（+）表示阴性。

1.3 统计学处理 应用SPSS 21.0统计软件。计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；计量资料用?表示，组间比较采用独立样本t检验。

2 结果

2.1 血清MMPs及PSA水平比较 PCa组患者的MMP－2、MMP－9、MMP－14和PSA水平均高于BPH组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

2.2 病变组织中MMPs阳性表达率比较 PCa组患者的MMP－2、MMP－9和MMP－14的阳性表达均高于BPH组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

表1 两组患者血清MMPs及PSA水平比较

表2 两组患者病变组织中MMPs阳性表达率比较[例（%）]

3 讨论

PCa是男性泌尿生殖系统中的高发肿瘤，是一种极易发生侵袭和转移的恶性肿瘤，其在肿瘤细胞与细胞外基质之间伴随基底膜破坏、结缔组织基质浸润的发生过程[10]。BPH合并前列腺炎属于良性的前列腺病变，其在临床诊断中易与PCa早期症状混淆而发生误诊。MMPs以酶原形式从胞内分泌到胞外，它在体外通过有机汞制剂反应才有活性，在体内可经一系列蛋白酶级联而激活。MMPs属于消化细胞外基质和基底膜的蛋白水解酶，目前研究认为前列腺肿瘤的浸润和转移与MMPs的过度表达有关[11]。MMPs酶系中的MMP－2、MMP－9研究较为广泛，其中MMP－9能分解呼吸道和肺内的结构复合物如ECM、基底膜，可参与呼吸道和肺的重建，加强胶原质胶体中胶原细胞和MMP－13的溶胶原活动；MMP－2主要降解Ⅳ、Ⅴ型胶原及明胶，与胃癌、胰腺癌等的分化转移存在密切联系[12－13]。本研究对MMP－2、MMP－9、MMP－14进行了检测，MMP－14主要存在于肿瘤细胞膜上，可激活前MMP－2并直接降解细胞外基质，目前有研究认为MMP－14在胃癌、喉癌、肝癌及乳腺癌中的表达具有临床意义[14－15]。

本研究对PCa、BPH合并前列腺炎患者血清MMP－2、MMP－9、MMP－14和PSA水平进行检测与比较，同时取术后病变组织样本进行免疫组化检测，结果发现PCa组患者的血清MMP－2、MMP－9、MMP－14和PSA水平均高于BPH组，病变组织中MMP－2、MMP－9、MMP－14阳性表达率亦明显高于BPH组，提示PCa患者MMP－2、MMP－9和MMP－14高表达与癌变的发病机制存在相关性。本研究还发现BPH合并前列腺炎患者MMP－2表达水平也较高，但是否与BPH、前列腺炎的病理过程相关需要进一步研究。

综上所述，PCa与BPH合并前列腺炎患者MMPs表达明显不同，有助于对两者作出鉴别诊断；MMPs家族在PCa中表达的变化可为发病机制的研究提供参考。

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Expression of MMPs in patients with prostate cancer and benign prostatic hyperplasia complicated with prostatitis

MAO Zujie,LIU Feng,ZHANG Qi,et al.Department of Urology,Zhejiang Provincial People′s Hospital,Hangzhou 310014，China

Prostate cancer Prostatic hyperplasia Prostatitis MMPs

2017-03-17）

（本文编辑：陈丹）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.9.2017-583

浙江省医药卫生科技平台项目（2017ZD008）

310014 杭州，浙江省人民医院泌尿外科

毛祖杰，E-mail：kirk@zju.edu.cn

【 Abstract】 Objective To investigate the expression of matrix metalloproteinases(MMPs)in patients with prostate cancer and prostatic hyperplasia combined with prostatitis. Methods Twenty eight patients with prostate cancer(PCa group)and 30 patients with benign prostatic hyperplasia and prostatitis(BPH group)admitted from November 2014 to November 2015 were enrolled in the study.Serum levels of MMP-2,MMP-9,MMP-14 and prostate special antigen (PSA)were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)and radioimmunoassay,respectively.The expressions of MMP-2,MMP-9 and MMP-14 in tissue samples were detected by immunohistochemistry. Results The serum levels of MMP-2,MMP-9,MMP-14 and PSA in patients with prostate cancer were higher than those in BPH group(P＜0.05).The positive rates of MMP-2,MMP-9 and MMP-14 in tissue of PCa patients were 50.0%,53.6%and 42.9%,which were higher than those in BPH group (20.0%, 10.0%,16.7%,respectively)(P＜0.05).Conclusion The serum levels and tissue expression of MMP-2,MMP-9 and MMP-14 in prostate cancer are higher than those in patients of benign prostatic hyperplasia patients with prostatitis,indicating that MMPs may be associated with the occurrence and development of prostate cancer.