复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种的鉴定及其耐药性情况分析

徐怡++王朝甘

[摘要] 目的 探讨复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种的鉴定方法及耐药性情况。 方法 取2015年1月～2016年4月医院收治的复发性外阴阴道假丝酵母菌病患者340例，从患者阴道分泌物中提取真菌培养标本，对检测的標本进行分离、鉴定，并对复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种进行鉴定，分析其耐药性。 结果 340例患者中共分离出340株病原菌，排在前三位的分别为白色念珠菌、光滑念珠菌及热带念珠菌，分别为245株、35株及29株，分别占72.06%、10.29%及8.53%；不同的病原菌对不同抗生素的耐药性不同，白色念珠菌最高耐药药物为5-氟胞嘧啶（26.53%），光滑念珠菌最高耐药药物为伊曲康唑（57.14%），热带念珠菌最高耐药药物为5-氟胞嘧啶（27.59%）；近平滑念珠菌最高耐药药物为伊曲康唑和5-氟胞嘧啶（12.50%）；克柔念珠菌最高耐药药物为氟康唑（100.0%）。结论 对复发性外阴阴道假丝酵母菌病患者病菌进行分离鉴定能了解病原菌的耐药性，并根据耐药性情况选择合适的抗菌药物，提高临床治疗效果，促进患者早期恢复。

[关键词] 复发性外阴阴道假丝酵母菌；鉴定方法；抗菌药物；耐药性

[中图分类号] R446.5；R711.31 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2016）35-0118-03

Identification of recurrent vulvovaginal candidiasis and analysis of drug resistance

XU Yi1 WANG Chaogan2

1.Department of Gynecology and Obstetrics， Leping Maternal and Child Health Hospital in Jiangxi Province， Leping 333300， China； 2.Department of Laboratory， Leping Maternal and Child Health Hospital in Jiangxi Province， Leping 333300， China

[Abstract] Objective To investigate the identification method and antibiotic resistance of recurrent vulvovaginal candidiasis. Methods A total of 340 patients with recurrent vulvovaginal candidiasis admitted in the hospital from January 2015 to April 2016 were collected and the culture samples of the fungus were extracted from the vaginal secretions of the patients， and the testing specimens were separated and identified. The strain of recurrent vulvovaginal candidiasis was identified and drug resistance of candida was analyzed. Results A total of 340 strains of pathogenic bacteria were isolated from 340 patients. Candida albicans， Candida glabrata and Candida tropicalis were the first three strains， with 245， 35 and 29， accounting for 72.06%， 10.29% and 8.53%，respectively.Antibiotic resistance of various pathogens to different antibiotics was different.The highest resistance of Candida albicans to 5-fluorocytosine was 26.53%；the highest resistance of Candida glabrata to Itraconazole was 57.14%； the highest resistance of Candida tropicalis to 5-fluorocytosine was 27.59%； the highest resistance of Candida parapsilosis to Itraconazole and 5-fluorocytosine was 12.50%； and the highest resistance of C. kruseii to Fluconazole was 100.0%. Conclusion Isolating and identifying the pathogens of patients with recurrent vulvovaginal candidiasis can understand the drug resistance， and the right antibiotics are chosen according to the drug resistance situation to improve clinical efficacy and promote early recovery of patients.

[Key words] Vulvovaginal candidiasis； Identification method； Antibacterial drugs； Drug resistance

复发性外阴阴道假丝酵母菌病（vulvovaginal candidiasis，VVC）是临床上常见的阴道念珠菌病，患者发病后临床上表现为外阴瘙痒、灼痛、性交痛、尿急、尿频等，影响患者健康[1]。相关报道显示[2]：VVC病原体为假丝酵母菌，且80%～90%患者为白假丝酵母菌，10%～20%患者为非白假丝酵母菌。目前，临床上对于VVC以抗菌药物治疗为主，但是我国抗菌药物、激素、免疫抑制剂的不合理使用，导致病原菌耐药性发生率较高，部分菌种甚至发生变迁，难以达到预期的治疗效果[3，4]。因此，加强VVC菌种的鉴定方法及耐药性情况研究对选择合理的抗菌药物具有重要的意义。为了探讨复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种的鉴定方法及耐药性情况，本文选取2015年1月～2016年4月本院收治的复发性外阴阴道假丝酵母菌病患者340例，报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2015年1月～2016年4月本院收治的复发性外阴阴道假丝酵母菌病患者340例，年龄21～58岁，平均（32.51±4.71）岁，病程1～7周，平均（3.1±0.8）周。纳入标准：①符合复发性外阴阴道假丝酵母菌病临床诊断标准[5]；②入院后均伴有不同程度的外阴瘙痒、充血；③均经过生化指标、影像学检查确诊。排除标准：①排除不符合复发性外阴阴道假丝酵母菌病临床诊断标准者；②排除合并有影响效应指标观测、判断其他生理或病理者；③排除合并自身免疫力下降疾病及糖尿病者。

1.2 方法

上述患者均进行阴道分泌物提取并对其中真菌进行相应的培养。①标本采集。利用窥阴器扩张阴道，并采用无菌拭子取2份阴道后穹隆分泌物，一份用于培养，一份用于涂片镜检查，保温后送检。②涂片镜检查。向采集的阴道分泌物中滴加浓度为10.0%的氢氧化钾涂片，在10×40倍显微镜下观察圆形的芽生孢子[6]。③病原菌的鉴定。向阴道分泌物中支架连续划线，接种在科玛嘉假丝酵母菌显色培养基中，28℃下连续进行24～48 h培养。根据培养病原菌的形态、大小及菌群情况进行鉴定。通常来说，白色念珠菌为翠绿色，热带念珠菌为铁蓝色；光滑念珠菌呈紫色等。对于其他酵母菌或不显色菌群经过纯化后利用法国生物梅里埃API20CCAX鉴定卡进行病原菌鉴定[7]。④药敏试验。将待测菌群浓度调整为0.5麦氏浊度，克柔念珠菌再稀释5倍。蘸取少许悬液，轻轻挤压后，将其均匀涂抹在RPMI-1640平皿中，平皿直径控制在9 cm，最后沿着平皿周边围绕两圈，平皿放置在35℃开盖倒扣中进行15 min干燥，待平板上的水分被琼脂吸收后再次贴片，每个平皿贴4个药敏，纸片距离控制在24 mm，放置在恒温箱中进行18～24 h培养。参考厂家说明书对结果进行判定[8，9]。对于不同病原菌耐药性以菌落颜色作为参考对菌类进行判定，采取ATN FUNGUS 3鉴定试剂盒进行相关鉴定试验，并且遵从《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感性参考性方案》使用ATN FUNGUS 3药敏板进行药敏试验。

1.3 统计学方法

采用SPSS18.0软件处理数据，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，计量资料以（x±s）表示，行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 340例患者病原菌检测及构成比情况

340例患者中共分离出340株病原菌，排在前三位的分别为白色念珠菌、光滑念珠菌及热带念珠菌，分别为245株、35株及29株，分别占72.06%、10.29%及8.53%，见表1。

表1 340例患者病原菌检测及构成比情况

2.2 不同病原菌耐药性情况

不同的病原菌对不同抗生素的耐药性不同，白色念珠菌最高耐药药物为5-氟胞嘧啶（26.53%），光滑念珠菌最高耐药药物为伊曲康唑（57.14%），热带念珠菌最高耐药药物为5-氟胞嘧啶（27.59%）；近平滑念珠菌最高耐药药物为伊曲康唑和5-氟胞嘧啶（12.50%）；克柔念珠菌最高耐药药物为氟康唑（100.0%），见表2。

2.3 340例患者治疗效果及预后

340例患者经病原菌鉴定及耐药性分析后均选择合适的抗生素进行治疗，患者均取得预期治疗效果。患者治疗后进行3个月随访，均未见复发，未见不良反应。

3 讨论

假丝酵母菌是临床上常见的致病菌，多分布在人体口腔、肠道及皮肤中[10]。有报道显示[11]：在人的一生中，10%～20%非妊娠妇女及超过30.0%妊娠女性含有假丝酵母菌。当人体某一时间段免疫低下后，将会引起病原菌在阴道中增殖，分泌出多种侵袭性酶和毒素，增加阴道组织炎症发生率[12]。本课题中，对患者阴道分泌物进行了提取培养并通过药敏试验对其耐药性进行鉴别，结果显示：340例患者中共分离出340株病原菌，排在前三位的分别为白色念珠菌、光滑念珠菌及热带念珠菌，分别为245株、35株及29株，分别占72.06%、10.29%及8.53%。由此看出：复发性外阴阴道假丝酵母菌病患者中病原菌类型相对较多，且多为白色念珠菌。临床上应该加强病原菌检测，选择敏感抗生素治疗，使得患者的治疗更具针对性。

目前，临床上对于白色念珠菌主要以抗生素治疗为主，药物能有效的抑制病原菌增殖，从而能改善机体症状。但是，随着抗生素的大量不合理使用，导致病原菌耐药性呈现上升趋势，使得许多抗生素难以达到预期的治疗效果[13]。对于复发型外阴阴道假丝酵母菌病，传统方法以直接涂片法为主，该方法虽然能满足诊断需要，但是诊断过程中需要完成病原菌的鉴定，并且该诊断方法所需时间较长，难以满足医院需要。本课题中采用科玛嘉显色法在病原菌鉴定中得到应用，该方法对病原菌培养准确率得到进一步提高，尤其是对于混合感染区别能力更强[14]。本研究中，不同的病原菌对不同抗生素的耐药性不同，白色念珠菌最高耐药药物为5-氟胞嘧啶（26.53%），光滑念珠菌最高耐藥药物为伊曲康唑（57.14%），热带念珠菌最高耐药药物为5-氟胞嘧啶（27.59%）；近平滑念珠菌最高耐药药物为伊曲康唑和5-氟胞嘧啶（12.50%）；克柔念珠菌最高耐药药物为氟康唑（100.0%）。340例患者经病原菌鉴定及耐药性分析后均选择合适的抗生素进行治疗，患者均取得预期治疗效果。因此，临床上患者治疗时必须加强患者病原菌监测，善于根据监测结果选择敏感抗生素治疗，提高临床治疗效果，促进患者早期恢复。治疗时应该密切观察患者病情变化情况，动态了解患者恢复情况，根据患者情况及时调整抗菌药物类型或抗菌药物级别，达到有效的抗菌效果[15]。同时，患者治疗时必须规范化使用抗真菌药物，常规开展真菌培养鉴定及药敏试验，必要时可以联合用药。在强化治疗达到真菌学治愈后，应该给予巩固至少半年，降低复发率。

综上所述，对复发性外阴阴道假丝酵母菌病患者病菌进行分离鉴定能了解病原菌的耐药性，并根据耐药性情况选择合适的抗菌药物，提高临床治疗效果，促进患者早期恢复。

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（收稿日期：2016-09-16）